The pTARGET™ Mammalian Expression V

The pTARGET™ Mammalian Expression Vector System(a,c) is a convenient system
for cloning PCR(b) products and for expression of cloned PCR products in mammalian
cells. The vector is prepared by cutting the pTARGET™ Vector with EcoR V
and adding a 3´ terminal thymidine to both ends. These single 3´-T overhangs at the
insertion site greatly improve the efficiency of ligation of a PCR product into the plasmid
in two ways. First the overhangs prevent recircularization of the vector; secondly
they provide a compatible overhang for PCR products generated by certain thermostable
polymerases (1,2). As summarized in Table 1, these polymerases often
add a single deoxyadenosine in a template-independent fashion to the 3´-ends of
amplified fragments (3,4). The pTARGET™ Vector also contains a modified version of
the coding sequence of the α-peptide of β-galactosidase, allowing blue/white recombinant
screening.
The pTARGET™ Vector carries the human cytomegalovirus (CMV) immediate-early
enhancer/promoter region(c) to promote constitutive expression of cloned DNA
inserts in mammalian cells. This vector also contains the neomycin phosphotransferase
gene, a selectable marker for mammalian cells. The pTARGET™ Vector can be
used for transient expression or for stable expression by selecting transfected cells
with the antibiotic G-418.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

pTarget ™เลี้ยงลูกด้วยนมระบบเวกเตอร์การแสดงออก (ค) เป็นระบบที่สะดวก
เพื่อโคลน pcr (ข) ผลิตภัณฑ์และการแสดงออกของผลิตภัณฑ์ pcr โคลนในเลี้ยงลูกด้วยนม
เซลล์ เวกเตอร์ที่มีการเตรียมความพร้อมโดยการตัดเวกเตอร์ pTarget ™ด้วย ecor v
และเพิ่ม 3 'thymidine terminal เพื่อปลายทั้งสอง เหล่านี้เพียงครั้งเดียวกระเช้า 3 ของ t-
ที่เว็บไซต์แทรกช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพของ ligation ของผลิตภัณฑ์ pcr เป็นพลาสมิด
ในสองวิธี แรกกระเช้าป้องกัน recircularization ของเวกเตอร์; ประการที่สอง
พวกเขาให้สิ่งที่แขวนอยู่เข้ากันได้กับผลิตภัณฑ์ pcr สร้างโดย polymerases ร้อน
บางอย่าง (1,2) ที่สรุปไว้ในตารางที่ 1, polymerases เหล่านี้มักจะ
เพิ่ม deoxyadenosine เดียวในแฟชั่นแบบอิสระที่ 3 ของปลายของ
ชิ้นส่วนขยาย (3,4) pTarget ™เวกเตอร์นอกจากนี้ยังมีรุ่นที่ปรับเปลี่ยน
ลำดับการเข้ารหัสของα-เปปไทด์ของβ-galactosidase ช่วยให้สีฟ้า / สีขาว recombinant คัดกรอง
.
เวกเตอร์ pTarget ™ดำเนิน cytomegalovirus มนุษย์ (CMV) ทันทีต้น
เพิ่ม / ก่อการภูมิภาค (ค) เพื่อส่งเสริมการแสดงออกที่เป็นส่วนประกอบของดีเอ็นเอโคลน
แทรกในเซลล์ที่เลี้ยงลูกด้วยนม เวกเตอร์นี้ยังมีนีโอมัยซิ phosphotransferase
ยีนยีนเครื่องหมายสำหรับเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม เวกเตอร์ pTarget ™
สามารถใช้สำหรับการแสดงออกชั่วคราวหรือการแสดงออกที่มั่นคงด้วยการเลือกเซลล์ transfected
ด้วยยาปฏิชีวนะกรัม-418

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PTARGET ™ System(a,c) เวกเตอร์นิพจน์ Mammalian เป็นระบบสะดวก
สำหรับโคลนผลิตภัณฑ์ PCR(b) และของผลิตภัณฑ์ PCR โคลนใน mammalian
เซลล์ เวกเตอร์จะเตรียม โดยการตัดแบบ pTARGET ™เวกเตอร์กับ EcoR V
และเพิ่ม thymidine การเทอร์มินัล 3´ ทั้งสอง 3´ T overhangs ที่เดียวเหล่านี้การ
ไซต์แทรกปรับประสิทธิภาพของไข่ผลิตภัณฑ์ PCR เป็น plasmid
สองวิธี ครั้งแรก overhangs ป้องกันการ recircularization ของเวกเตอร์ ประการที่สอง
ให้ overhang เข้ากันได้สำหรับผลิตภัณฑ์ PCR ที่สร้างขึ้น โดยบาง thermostable
polymerases (1, 2) ตามที่สรุปไว้ในตารางที่ 1, polymerases เหล่านี้มัก
เพิ่ม deoxyadenosine เดียวในแม่แบบอิสระปลาย 3´ ของ
ขยายชิ้นส่วน (3, 4) PTARGET ™เวกเตอร์ยังประกอบด้วยการปรับเปลี่ยนของ
กำหนดลำดับของα-เพปไทด์ของβ-galactosidase ให้วททชสีน้ำเงิน/ขาว
คัดกรอง
pTARGET ™เวกเตอร์ดำเนินการมนุษย์ cytomegalovirus (CMV) ทันทีก่อน
เพิ่ม/โปรโมเตอร์ region(c) เพื่อส่งเสริมค่าขึ้นของ cloned DNA
แทรกใน mammalian เซลล์ เวกเตอร์นี้ยังประกอบด้วย phosphotransferase นีโอมัยซิน
ยีน เครื่องหมายเลือกใน mammalian เซลล์ PTARGET ™เวกเตอร์สามารถ
ใช้นิพจน์แบบฉับพลัน หรือ สำหรับนิพจน์ที่มีเสถียรภาพ โดยการเลือกเซลล์ transfected
ด้วยยาปฏิชีวนะ G 418

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแสดงออกทางความคิดเห็นหรือระบบเกี่ยวกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ptarget™ ( C )เป็นระบบที่สะดวก
สำหรับการโคลนมนุษย์ pcr ( B ) ผลิตภัณฑ์ และสำหรับการแสดงออกทางความคิดเห็นของตัวสินค้า pcr จำลองไว้ในเซลล์เกี่ยวกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
ปัจจัยที่ได้รับการจัดเตรียมโดยการตัด ptarget™ ที่เวกเตอร์ด้วย ecor V
และการเพิ่ม thymidine 3 'อาคารโดยสารที่จะสิ้นสุดลงทั้งสอง คนเดียวยานยนต์ 3 ' - T ที่
ตามมาตรฐานเว็บไซต์การใส่เพิ่ม ประสิทธิภาพ ของ ligation ของ ผลิตภัณฑ์ pcr ใน plasmid ที่
ในสองวิธี เป็นครั้งแรกที่ป้องกันไม่ให้ยานยนต์ recircularization ของเวกเตอร์ที่ประการที่สอง
ซึ่งจะช่วยให้พวกเขายื่นออกมาใช้งานร่วมกันได้ของ ผลิตภัณฑ์ pcr สร้างขึ้นโดยบางอย่าง thermostable
polymerases ( 1,2 ) เป็นสรุปได้ในตารางที่ 1 นี้ polymerases มัก
ตามมาตรฐานเพิ่ม deoxyadenosine ตัวเดียวในแฟชั่นเทมเพลต - เป็นอิสระอย่างแท้จริง 3 ' - สิ้นสุดที่
แอมพลิฟายเศษ( 3.4 ) เวกเตอร์ ptarget™ ยังมีเวอร์ชันแก้ไขแล้วของ
ตามลำดับการเข้ารหัสของโซนี่ - peptide ของเวกเตอร์
ซึ่งจะช่วยกลั่นกรอง.
ptarget™ poxvaccine ที่ช่วยให้สีฟ้า/สีขาวเฉพาะ galactosidase มี cytomegalovirus ( cmv )ได้ทันที - ต้น
contrast enhancer /ผู้ก่อการบริษัท ภูมิภาค ( C )เพื่อส่งเสริมการแสดงออกทางความคิดเห็นจัดตั้งของจำลองไว้ดีเอ็นเอ
แทรกในเซลล์เกี่ยวกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม Initialization Vector แบบนี้ยังประกอบด้วยยีน phosphotransferase
neomycin แต้มแบบเลือกได้สำหรับเซลล์เกี่ยวกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม เวกเตอร์ ptarget™
ซึ่งจะช่วยให้สามารถนำไปใช้สำหรับการแสดงออกทางความคิดเห็นชั่วคราวหรือสำหรับการแสดงออกทางความคิดเห็นที่มี เสถียรภาพ โดยการเลือกเซลล์ transfected
ด้วยปฏิชีวนะ G -418 ได้