antibody and incubated at room temp

antibody and incubated at room temperature for 1 h. Blots
were developed with Clarity ECL regent (Bio-rad) and a
ChemiDoc MP Imaging System (Bio-rad). Densitometry
quantification was performed using ImageJ software
(NIH). Blots are representative of three runs.
ALDEFLUOR assays
Aldehyde dehydrogenase (ALDH) enzyme activity was
determined using the ALDEFLUOR™ Kit (Stem Cell
Technologies, Vancouver, British Columbia, Canada)
according to the manufacturer’s protocol. Briefly 2.0x105
MMTV-PyMT;Apc+/+ or MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells
were suspended in Aldefluor™ assay buffer containing
ALDH substrate (Bodipy-Aminoacetaldehyde) which
served as the “test” sample. An identical sample served as
the “control” containing the ALDH substrate and diethylaminobenzaldehyde
(DEAB), a specific ALDH1 enzyme inhibitor.
Both the test and control samples were incubated
for 60 min at 37 °C. The fluorescent ALDH-expressing
cells were detected in the green fluorescence channel
(515–535 nm) of a Cytotomics FC 500 (Beckman Coulter,
Brea, CA) flow cytometer. Data were analyzed using
FlowJo Flow Cytometry Data Analysis Software (Tree Star,
Ashland, OR). The percent shift between gated events in
the test versus control samples was calculated; a greater
shift indicates a greater number of ALDH positive cells in
a given sample.
Statistical analysis
Student’s t-tests were used for all analyses except the
combination treatments where a two-way ANOVA with
Bonferroni post-hoc test was used. A p-value < 0.05 was
considered significant.
Results
One major mechanism of chemotherapeutic resistance is
the presence of ATP-dependent efflux pumps to regulate
the rate at which chemotherapeutic drugs are effluxed
out of a cell and control the amount of drug remaining
within the cell [10]. Through microarray analysis, our
laboratory previously demonstrated that ABCG2 expression
was down-regulated in Apc-mutant mouse mammary
glands during lactation [11]; however, MDR1
expression was significantly increased (Fig. 1a). MDR1 is
one of the most common efflux pumps that confers chemotherapeutic
resistance and has been shown to regulate
efflux of paclitaxel and doxorubicin [12]. Consistent
with the developmental studies (Fig. 1a), cells isolated
from MMTV-PyMT;ApcMin/+ tumors showed a significant
increase of MDR1 expression compared to control
MMTV-PyMT;Apc+/+ cells (Fig. 1b, Additional file 1).
Treatment with paclitaxel and doxorubicin, but not cisplatin,
further enhanced expression of MDR1 in
MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells (Fig. 1b, Additional file 1).
Doxorubicin treatment also enhanced MDR1 protein
expression in MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells (Fig. 1d and e,
Additional file 1). We observed no changes in the expression
of ABCG2 after treatment with chemotherapeutic
agents (Fig. 1c, Additional file 1). However MMTVPyMT;Apc+/+
have a greater expression of ABCG2 protein
compared to MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells (Fig. 1d and f,
Additional file 1).
Given the increase in MDR1 expression, we hypothesized
that Apc mutation may therefore confer chemotherapeutic
resistance. To test this hypothesis, we measured
cell proliferation and apoptosis after a 24-hour treatment
with cisplatin, paclitaxel or doxorubicin. BrdU incorporation
demonstrated that while paclitaxel treatment did not
alter cell proliferation, the impact of cisplatin and doxorubicin
on proliferation was modestly enhanced in
MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells (Fig. 2a, Additional file 1).
Given the mechanisms of action of chemotherapeutic
agents, and the lack of a strong proliferative effect, we
used cleaved caspase 3 IF to determine whether Apc mutation
decreased the rate of apoptosis after chemotherapeutic
treatment. As expected, no difference was observed in the
percent of apoptosis in control (vehicle-treated) MMTVPyMT;ApcMin/+
versus MMTV-PyMT;Apc+/+ cells (Fig. 2b
and c, Additional file 1). However, MMTV-PyMT;ApcMin/+
cells had decreased cisplatin- or doxorubicin-induced
apoptosis compared to MMTV-PyMT;Apc+/+ (Fig. 2b and
c, Additional file 1). No difference in paclitaxel-induced
apoptosis was observed in the two cell lines.
We previously demonstrated that mutant Apc in the
MMTV-PyMT mouse model increased proliferation
and expression of pFAK, pSrc and pJNK, and that inhibition
of Src or JNK diminishes the APC-mediated cell
proliferation [23]. Given the effect of Apc status on
cisplatin- and doxorubicin-mediated apoptosis (Fig. 2b,
Additional file 1) and to understand whether the Src/
JNK signaling pathway could impact chemotherapeutic
resistance, we measured apoptosis in cells treated with a
combination regimen. Cells were treated with either
cisplatin or doxorubicin in combination with either an
inhibitor to Src (PP2) or JNK (SP600125). The addition
of PP2 or SP600125 to cisplatin significantly increased
apoptosis compared to cisplatin alone in MMTVPyMT;ApcMin/+cells
(Fig. 3a and c, Additional file 1).
Therefore the cisplatin-mediated apoptosis becomes
equivalent in the two cell lines with the inhibition or Src
or JNK. It is also evident that cisplatin and doxorubicin
have differing modes of action because the doxorubicinmediated
apoptosis in the MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells
was not affected by the addition of PP2 or SP600125
(Fig. 3b, Additional file 1).
TICs have been shown to have higher levels of ABC
transporters or efflux pumps compared to normal differentiated
cells [12], and impact chemotherapeutic resistance.
VanKlompenberg et al. BMC Cancer (2015) 15:457 Page 4 of 14
Fig. 1 (See legend on next page.)
VanKlompenberg et al. BMC Cancer (2015) 15:457 Page 5 of 14
In other words, the cells that often remain after treatment,
and therefore cause tumor recurrence are often TICs. A
common mechanism to measure TICs is through the use
of the ALDEFLUOR assay using FACS, where 23 out of 33
human breast cancer cell lines were found to be positive
[24]. Therefore we used the ALDEFLUOR assay to determine
the population of TICs. Cells were incubated with
ALDH substrate in the presence (control) or absence (test)
of the ALDH enzyme inhibitor, diethylaminobenzaldehyde
(DEAB). The gated (ALDH−
) population in the control
condition was unchanged in the Apc-mutant versus wildtype
cells (Fig. 4a, 97.7 % compared to 95.5 %). However,
in the absence of the ALDH inhibitor, the gated population
changed from 77.8 % in the MMTV-PyMT;Apc+/+cells to a
mere 20.3 % in the MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells, indicating
that Apc mutation increases the TIC population (Fig. 4)
a and b.
To translate our results from mouse cell lines to a human
cell line, we turned to MDA-MB-157 cells, which
are a triple negative breast cancer cell line derived from
a pleural effusion from a metaplastic human breast cancer
[25]. This specific cell line was chosen because of the
metaplastic-like tumors that developed in the MMTVPyMT;ApcMin/+
model [23]. As MDA-MB-157 cells have
wild-type APC [26–27] we used lentiviral mediated
shRNA to knockdown APC and observed a 60 % decrease
in APC gene expression (Fig. 5a). Using immunofluorescence
we observed that APC knockdown cells
had decreased APC protein expression at the membrane
and nucleus (Fig. 5b). Baseline cell proliferation was not
changed in the APC knockdown cells (data not shown).
Treatment with cisplatin, doxorubicin or paclitaxel did
not impact proliferation in the APC knockdown lines
compared to the parent line (Fig. 5c, Additional file 1),
similar to the effects in the PyMT-derived model (Fig. 2).
APC knockdown MDA-MB-157 cells exhibited decreased
apoptosis after treatment with paclitaxel or cisplatin
(Fig. 5d and e, Additional file 1). While paclitaxel
response was not previously shown to be dependent on
APC status (Fig. 2b), the impact of APC on cisplatin response
(Fig. 2b, and 5d) is consistent between the two
model systems. In contrast to the results in the PyMT
model system (Figs. 2b) doxorubicin-mediated apoptosis
was not altered by APC-status in the MDA-MB-157 cell
system (Fig. 5d).
Discussion
The recurrence of breast cancer, which accounts for 90 %
of breast cancer-related deaths [13], is often accompanied
by chemotherapeutic resistance [28]. Therefore, it is critical
to investigate the biological markers involved with this
process. Many mechanisms have been attributed to the
development of chemotherapeutic resistance; however,
one of the most well-known is the multidrug resistance
theory. The expression of efflux pumps that regulate the
rate in which drugs can remain in cells and increased
expression or activity of these pumps leads to increased
chemotherapeutic resistance. TICs or cancer stem cells
express high levels of ABC transporters [12, 29] and are
more resistant to chemotherapeutic agents than other
tumor cells [30]. Our results in the mouse cell model support
this claim because MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells have
increased TICs and higher levels of MDR1 expression. We
previously reported that mutant Apc in the MMTV-PyMT
model increased FAK activation [23]. FAK deletion has
been shown to decrease the number of TICs present in
both breast cancer [31–33] and skin cancer [34]. Therefore,
the regulation of FAK by APC may be contributing
to the change in the number of TICs through blocking the
process of self-renewal.
ALDH-positive cells are more metastatic than ALDHnegative
cells [24] and increased ALDH activity leads to
poor clinical prognosis [35]. Cisplatin and paclitaxel resistant
cell lines have increased ALDH expression compared
to parent cells [36, 37]. ALDH positive cells have
increased expression of STAT3 (signal transducer and
activator of transcription 3) [38] which makes STAT3 an
ideal target for decreasing the TIC population in
MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells. In addition to commercially
available STAT3 inhibitors [39], miR-337-3p, a mature
sequence of miR-337, can also inhibit STAT3,
sensitizing lung cancer cells to paclitaxel treatment [40].
(See figure on previous page.)
Fig. 1 Gene expression of ATP-dependent binding cassette transporters. a Microarray analysis of mammary glands from ApcMin/+ and Apc+/+
mic

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แอนติบอดี และ incubated สำหรับกันบล็อท 1 h. ที่อุณหภูมิห้องได้รับการพัฒนา ด้วยความชัดเจน ECL รีเจนท์ (ไบ-rad) และภาพระบบ (ไบ-rad) MP ChemiDoc Densitometryนับถูกดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ(NIH) ตัวแทนของการทำงานสามกันบล็อทได้ALDEFLUOR assaysมีเอนไซม์ dehydrogenase (ALDH) แอลดีไฮด์กำหนดโดยใช้ชุดอุปกรณ์™ ALDEFLUOR (เซลล์ต้นกำเนิดเทคโนโลยี แวนคูเวอร์ บริติชโคลัมเบีย แคนาดา)ตามโพรโทคอลของผู้ผลิต 2.0x105 สั้น ๆMMTV-PyMT เอพีซี + /mts + หรือ MMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ถูกหยุดชั่วคราวใน Aldefluor ™วิเคราะห์บัฟเฟอร์ประกอบด้วยALDH พื้นผิว (Bodipy Aminoacetaldehyde) ซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวอย่าง "การทดสอบ" ตัวอย่างเหมือนเป็นการ "ควบคุม" ที่ประกอบด้วยพื้นผิว ALDH และ diethylaminobenzaldehyde(DEAB), สารยับยั้งเอนไซม์ ALDH1 ที่ระบุมี incubated ทั้งตัวอย่างการทดสอบและควบคุมใน 60 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส การเรืองแสง ALDH-แสดงเซลล์ที่พบในช่องเขียว fluorescence(515 – 535 nm) ของ Cytotomics FC (Beckman Coulter, 500Brea, CA) ไหล cytometer มีวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ข้อมูลเซลล์ FlowJo ขั้นตอน (แผนภูมิดาวAshland, OR) เปอร์เซ็นต์การเลื่อนระหว่างรั้วเหตุการณ์ในทดสอบกับตัวอย่างควบคุมไม่ได้ มีมากขึ้นกะบ่งชี้จำนวน ALDH บวกเซลล์มากขึ้นตัวอย่างกำหนดวิเคราะห์ทางสถิติใช้สำหรับการวิเคราะห์ทั้งหมดยกเว้น t-ทดสอบของนักเรียนรักษาชุดเป็นการวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทางด้วยใช้ทดสอบโพสต์ฮอค Bonferroni P ค่า < 0.05 ได้ถือว่าสำคัญผลลัพธ์เป็นกลไกสำคัญของการเผชิญการต้านทานของปั๊ม efflux ATP ขึ้นอยู่กับการควบคุมอัตราที่ยาเคมีบำบัดหลายชนิด effluxedออกจากเซลล์และควบคุมจำนวนยาที่เหลือภายในเซลล์ [10] ผ่านการวิเคราะห์ microarray ของเราห้องปฏิบัติแสดงนิพจน์ที่ ABCG2 ก่อนหน้านี้ถูกกำหนดลงใน Apc mutant เมาส์ทางหน้าอกต่อมในด้านการให้นม [11]; อย่างไรก็ตาม MDR1นิพจน์ถูกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (Fig. 1a) MDR1 เป็นปั๊ม efflux ทั่วที่ confers เผชิญอย่างใดอย่างหนึ่งต้านทาน และจะควบคุมefflux paclitaxel และ doxorubicin [12] สอดคล้องกันด้วยการพัฒนาการศึกษา (Fig. 1a), เซลล์ที่แยกต่างหากจาก MMTV-PyMT ApcMin / + เนื้องอกพบเป็นสำคัญเพิ่มนิพจน์ MDR1 เมื่อเทียบกับตัวควบคุมMMTV-PyMT เอพีซี + /mts + เซลล์ (Fig. 1b แฟ้มเพิ่มเติม 1)รักษา ด้วย paclitaxel และ doxorubicin แต่ไม่ cisplatinเพิ่มเติมเพิ่มนิพจน์ของ MDR1 ในMMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ (Fig. 1b แฟ้มเพิ่มเติม 1)รักษา doxorubicin เพิ่มเติมโปรตีน MDR1นิพจน์ใน MMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ (Fig. 1 d และ eเพิ่มเติมแฟ้ม 1) เราสังเกตการเปลี่ยนแปลงในนิพจน์ของ ABCG2 หลังจากการรักษาด้วยเคมีบำบัดหลายชนิดตัวแทนกิน 1c แฟ้มเพิ่มเติม 1) อย่างไรก็ตาม MMTVPyMT เอพีซี + /mts +มีนิพจน์มากกว่าโปรตีน ABCG2เมื่อเทียบกับ MMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ (Fig. 1 d และ fเพิ่มเติมแฟ้ม 1)ให้เพิ่มขึ้นในนิพจน์ MDR1 เราตั้งสมมติฐานว่าการกลายพันธุ์ที่ Apc อาจดังนั้นประสาทเผชิญต้านทาน การทดสอบสมมติฐานนี้ เราวัดเซลล์ apoptosis และการแพร่หลายหลังจากการรักษาตลอด 24 ชั่วโมงcisplatin, paclitaxel หรือ doxorubicin ประสาน BrdUแสดงที่ในขณะที่รักษา paclitaxel ไม่เปลี่ยนแปลงเซลล์การงอก ผลกระทบของ cisplatin และ doxorubicinในการแพร่หลายมีทั้งเพิ่มในMMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ (Fig. 2a แฟ้มเพิ่มเติม 1)กำหนดกลไกการดำเนินการของเผชิญตัวแทน และขาดผล proliferative ต้นแข็งแรง เราใช้แหวก caspase 3 ถ้ากำหนดว่า Apc กลายพันธุ์ลดอัตราการ apoptosis หลังจากเผชิญรักษา ตามที่คาดไว้ ไม่แตกต่างที่สังเกตในการเปอร์เซ็นต์ apoptosis ในการควบคุม (รถรับ) MMTVPyMT ApcMin / +เมื่อเทียบกับ MMTV-PyMT เอพีซี + /mts + เซลล์ (Fig. 2bก c เพิ่มเติมแฟ้ม 1) อย่างไรก็ตาม MMTV-PyMT ApcMin / +เซลล์ลดลงเกิด cisplatin หรือ doxorubicinเมื่อเทียบกับ MMTV-PyMT; apoptosis เอพีซี + /mts + (Fig. 2b และc เพิ่มเติมแฟ้ม 1) ไม่แตกต่างในการเกิด paclitaxelมีสังเกต apoptosis ในเซลล์สองบรรทัดก่อนหน้านี้ว่า mutant ที่เอพีซีในการMMTV PyMT เมาส์รุ่นขยายตัวเพิ่มขึ้นและ pFAK, pSrc pJNK และยับยั้งที่นายหรือ JNK เซลล์ APC mediated ที่ค่อย ๆ หายไปขยาย [23] ได้รับผลของสถานะ Apc ในcisplatin- and doxorubicin-mediated apoptosis (Fig. 2b,Additional file 1) and to understand whether the Src/JNK signaling pathway could impact chemotherapeuticresistance, we measured apoptosis in cells treated with acombination regimen. Cells were treated with eithercisplatin or doxorubicin in combination with either aninhibitor to Src (PP2) or JNK (SP600125). The additionof PP2 or SP600125 to cisplatin significantly increasedapoptosis compared to cisplatin alone in MMTVPyMT;ApcMin/+cells(Fig. 3a and c, Additional file 1).Therefore the cisplatin-mediated apoptosis becomesequivalent in the two cell lines with the inhibition or Srcor JNK. It is also evident that cisplatin and doxorubicinhave differing modes of action because the doxorubicinmediatedapoptosis in the MMTV-PyMT;ApcMin/+ cellswas not affected by the addition of PP2 or SP600125(Fig. 3b, Additional file 1).TICs have been shown to have higher levels of ABCtransporters or efflux pumps compared to normal differentiatedcells [12], and impact chemotherapeutic resistance.VanKlompenberg et al. BMC Cancer (2015) 15:457 Page 4 of 14Fig. 1 (See legend on next page.)VanKlompenberg et al. BMC Cancer (2015) 15:457 Page 5 of 14In other words, the cells that often remain after treatment,and therefore cause tumor recurrence are often TICs. Acommon mechanism to measure TICs is through the useof the ALDEFLUOR assay using FACS, where 23 out of 33human breast cancer cell lines were found to be positive[24]. Therefore we used the ALDEFLUOR assay to determinethe population of TICs. Cells were incubated withALDH substrate in the presence (control) or absence (test)of the ALDH enzyme inhibitor, diethylaminobenzaldehyde(DEAB). The gated (ALDH−) population in the controlcondition was unchanged in the Apc-mutant versus wildtypecells (Fig. 4a, 97.7 % compared to 95.5 %). However,in the absence of the ALDH inhibitor, the gated populationchanged from 77.8 % in the MMTV-PyMT;Apc+/+cells to amere 20.3 % in the MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells, indicatingthat Apc mutation increases the TIC population (Fig. 4)a and b.To translate our results from mouse cell lines to a humancell line, we turned to MDA-MB-157 cells, whichare a triple negative breast cancer cell line derived froma pleural effusion from a metaplastic human breast cancer[25]. This specific cell line was chosen because of themetaplastic-like tumors that developed in the MMTVPyMT;ApcMin/+model [23]. As MDA-MB-157 cells havewild-type APC [26–27] we used lentiviral mediatedshRNA to knockdown APC and observed a 60 % decreasein APC gene expression (Fig. 5a). Using immunofluorescencewe observed that APC knockdown cellshad decreased APC protein expression at the membraneand nucleus (Fig. 5b). Baseline cell proliferation was notchanged in the APC knockdown cells (data not shown).Treatment with cisplatin, doxorubicin or paclitaxel didnot impact proliferation in the APC knockdown linescompared to the parent line (Fig. 5c, Additional file 1),similar to the effects in the PyMT-derived model (Fig. 2).APC knockdown MDA-MB-157 cells exhibited decreasedapoptosis after treatment with paclitaxel or cisplatin(Fig. 5d and e, Additional file 1). While paclitaxelresponse was not previously shown to be dependent onAPC status (Fig. 2b), the impact of APC on cisplatin response(Fig. 2b, and 5d) is consistent between the twomodel systems. In contrast to the results in the PyMTmodel system (Figs. 2b) doxorubicin-mediated apoptosiswas not altered by APC-status in the MDA-MB-157 cellsystem (Fig. 5d).DiscussionThe recurrence of breast cancer, which accounts for 90 %of breast cancer-related deaths [13], is often accompaniedby chemotherapeutic resistance [28]. Therefore, it is criticalto investigate the biological markers involved with thisprocess. Many mechanisms have been attributed to thedevelopment of chemotherapeutic resistance; however,one of the most well-known is the multidrug resistancetheory. The expression of efflux pumps that regulate therate in which drugs can remain in cells and increasedexpression or activity of these pumps leads to increasedchemotherapeutic resistance. TICs or cancer stem cellsexpress high levels of ABC transporters [12, 29] and aremore resistant to chemotherapeutic agents than othertumor cells [30]. Our results in the mouse cell model supportthis claim because MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells have
increased TICs and higher levels of MDR1 expression. We
previously reported that mutant Apc in the MMTV-PyMT
model increased FAK activation [23]. FAK deletion has
been shown to decrease the number of TICs present in
both breast cancer [31–33] and skin cancer [34]. Therefore,
the regulation of FAK by APC may be contributing
to the change in the number of TICs through blocking the
process of self-renewal.
ALDH-positive cells are more metastatic than ALDHnegative
cells [24] and increased ALDH activity leads to
poor clinical prognosis [35]. Cisplatin and paclitaxel resistant
cell lines have increased ALDH expression compared
to parent cells [36, 37]. ALDH positive cells have
increased expression of STAT3 (signal transducer and
activator of transcription 3) [38] which makes STAT3 an
ideal target for decreasing the TIC population in
MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells. In addition to commercially
available STAT3 inhibitors [39], miR-337-3p, a mature
sequence of miR-337, can also inhibit STAT3,
sensitizing lung cancer cells to paclitaxel treatment [40].
(See figure on previous page.)
Fig. 1 Gene expression of ATP-dependent binding cassette transporters. a Microarray analysis of mammary glands from ApcMin/+ and Apc+/+
mic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แอนติบอดีและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง บลอต
ได้รับการพัฒนาด้วยความชัดเจน ECL ผู้สำเร็จราชการแผ่นดิน (Bio-RAD) และ
ChemiDoc MP ถ่ายภาพระบบ (Bio-RAD) densitometry
ปริมาณที่ได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ
(NIH) บลอตเป็นตัวแทนของสามวิ่ง.
ALDEFLUOR ตรวจ
dehydrogenase ลดีไฮด์ (ALDH) กิจกรรมของเอนไซม์ได้รับ
การพิจารณาโดยใช้ ALDEFLUOR ™ Kit (เซลล์ต้นกำเนิด
Technologies, แวนคูเวอร์, บริติชโคลัมเบีย, แคนาดา)
ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต สั้น ๆ 2.0x105
MMTV-PyMT; Apc + / + หรือ MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์
ถูกระงับในบัฟเฟอร์ทดสอบ Aldefluor ™ที่มี
พื้นผิว ALDH (Bodipy-Aminoacetaldehyde) ซึ่ง
ทำหน้าที่เป็น "การทดสอบ" ตัวอย่าง ตัวอย่างเหมือนกันทำหน้าที่เป็น
"ควบคุม" ที่มีพื้นผิวและ ALDH diethylaminobenzaldehyde
(DEAB) เฉพาะยับยั้งเอนไซม์ ALDH1.
ทั้งการทดสอบและตัวอย่างการควบคุมถูกบ่ม
เป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เรืองแสง ALDH-แสดง
เซลล์ถูกตรวจพบในช่องสีเขียวเรืองแสง
(515-535 นาโนเมตร) ของ Cytotomics เอฟซี 500 (Beckman Coulter,
เบรีย, CA) ไหล cytometer วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้
FlowJo cytometry ไหลวิเคราะห์ข้อมูลซอฟต์แวร์ (สตาร์รี,
แอชแลนด์, OR) การเปลี่ยนแปลงร้อยละระหว่างเหตุการณ์รั้วรอบขอบชิดใน
การทดสอบเมื่อเทียบกับตัวอย่างควบคุมที่คำนวณได้; มากขึ้น
แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงจำนวนมากของ ALDH เซลล์ในเชิงบวกใน
ตัวอย่างที่กำหนด.
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ของนักเรียนเสื้อทดสอบถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ทั้งหมดยกเว้น
การรักษารวมกันที่สองทาง ANOVA กับ
การทดสอบการโพสต์เฉพาะกิจ Bonferroni ถูกนำมาใช้ p-value <0.05 ได้รับการ
พิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ.
ผลการ
หนึ่งกลไกที่สำคัญของความต้านทานเคมีบำบัดคือ
การปรากฏตัวของเอทีพีขึ้นอยู่กับปั๊มไหลในการควบคุม
อัตราที่ยาเคมีบำบัดจะ effluxed
ออกจากเซลล์และควบคุมปริมาณของยาเสพติดที่เหลืออยู่
ภายในเซลล์ [10] ผ่านการวิเคราะห์ microarray ของเรา
ในห้องปฏิบัติการก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการแสดงออก ABCG2
ถูกควบคุมลงในนมเมาส์ APC-กลายพันธุ์
ในช่วงให้นมต่อม [11]; แต่ MDR1
การแสดงออกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (รูป. 1a) MDR1 เป็น
หนึ่งในปั๊มไหลพบมากที่สุดที่ฟาโรห์เคมีบำบัด
ความต้านทานและได้รับการแสดงที่จะควบคุมการ
ไหลของยา paclitaxel และ doxorubicin [12] สอดคล้อง
กับการศึกษาการพัฒนา (รูปที่ 1a.) เซลล์ที่แยก
จาก MMTV-PyMT; ApcMin / + เนื้องอกอย่างมีนัยสำคัญที่แสดงให้เห็น
การเพิ่มขึ้นของการแสดงออก MDR1 เมื่อเทียบกับการควบคุม
MMTV-PyMT; Apc + / + เซลล์ (Fig. 1 ขแฟ้มเพิ่มเติม 1)
การรักษาด้วยยา paclitaxel และ doxorubicin แต่ไม่ cisplatin,
การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นต่อไปของ MDR1 ใน
MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์ (Fig. 1 ขแฟ้มเพิ่มเติม 1).
การรักษา Doxorubicin เพิ่มขึ้นด้วยโปรตีน MDR1
แสดงออกใน MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์ (รูป. 1 d และ e,
แฟ้มเพิ่มเติม 1) เราสังเกตเห็นการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกไม่มี
ของ ABCG2 หลังการรักษาด้วยเคมีบำบัด
ตัวแทน (รูป. 1c, แฟ้มเพิ่มเติม 1) อย่างไรก็ตาม MMTVPyMT; Apc + / +
มีการแสดงออกมากขึ้นของโปรตีน ABCG2
เมื่อเทียบกับ MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์ (Fig. 1 d และฉ
. แฟ้มเพิ่มเติม 1)
ได้รับการเพิ่มขึ้นของการแสดงออก MDR1 เราตั้งสมมติฐาน
ว่าการกลายพันธุ์ Apc จึงอาจหารือ เคมีบำบัด
ต้านทาน เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้เราวัด
การแพร่กระจายของเซลล์และการตายหลังการรักษาตลอด 24 ชั่วโมง
ด้วยพลายา paclitaxel หรือ doxorubicin การรวมตัวกัน BrdU
แสดงให้เห็นว่าในขณะที่การรักษายา paclitaxel ไม่ได้
เปลี่ยนแปลงการเพิ่มจำนวนเซลล์ผลกระทบของ cisplatin และ doxorubicin
ในการขยายก็เพิ่มขึ้นอย่างสุภาพใน
MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์ (Fig. 2a, แฟ้มเพิ่มเติม 1).
ได้รับกลไกการออกฤทธิ์ของยาเคมีบำบัด
ตัวแทนและการขาดของผลเจริญที่แข็งแกร่งที่เรา
ใช้ตัดเซ่ 3 ถ้าการตรวจสอบว่าการกลายพันธุ์ Apc
ลดลงของอัตราการตายหลังจากเคมีบำบัด
รักษา เป็นที่คาดหวังไม่แตกต่างกันพบว่าใน
ร้อยละของการตายของเซลล์ในการควบคุม (รถที่ได้รับ) MMTVPyMT; ApcMin / +
เมื่อเทียบกับ MMTV-PyMT; Apc + / + เซลล์ (. รูปที่ 2b
และ C, แฟ้มเพิ่มเติม 1) อย่างไรก็ตาม MMTV-PyMT; ApcMin / +
เซลล์ลดลงหรือ cisplatin- doxorubicin เหนี่ยวนำให้เกิด
การตายของเซลล์เมื่อเทียบกับ MMTV-PyMT; Apc + / + (. รูปที่ 2b และ
C, แฟ้มเพิ่มเติม 1) ไม่มีความแตกต่างจากยาที่เกิด
การตายพบว่าในสองสายพันธุ์เซลล์.
เราแสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ว่า Apc กลายพันธุ์ใน
MMTV-PyMT เมาส์รูปแบบการขยายเพิ่มขึ้น
และการแสดงออกของ pFAK, PSRC และ pJNK และการยับยั้งที่
ของ Src หรือ JNK ลด APC- เซลล์
งอก [23] ได้รับผลกระทบจากสถานะ Apc ใน
cisplatin- และการตายของเซลล์ doxorubicin พึ่ง (รูป. 2b,
แฟ้มเพิ่มเติม 1) และเข้าใจว่า Src /
เส้นทางการส่งสัญญาณอาจส่งผลกระทบ JNK เคมีบำบัด
ต้านทานเราวัด apoptosis ในเซลล์รับการรักษาด้วย
ระบบการปกครองที่รวมกัน เซลล์ได้รับการรักษาด้วย
cisplatin หรือ doxorubicin ในการรวมกันกับทั้ง
ยับยั้งการ Src (PP2) หรือ JNK (SP600125) นอกจาก
ของ PP2 หรือ SP600125 cisplatin จะเพิ่มขึ้นอย่างมาก
เมื่อเทียบกับการตายของเซลล์ cisplatin คนเดียวใน MMTVPyMT; ApcMin / + เซลล์
. (. รูปที่ 3a และ C, แฟ้มเพิ่มเติม 1)
ดังนั้นการตาย cisplatin พึ่งจะกลายเป็น
เทียบเท่าในสองสายมือถือที่มีการยับยั้ง หรือ Src
หรือ JNK นอกจากนี้ยังเห็นว่า cisplatin และ doxorubicin
มีโหมดที่แตกต่างกันของการดำเนินการเพราะ doxorubicinmediated
apoptosis ใน MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์
ไม่ได้รับผลกระทบจากการเพิ่มขึ้นของ PP2 หรือ SP600125
. (. รูปที่ 3b, แฟ้มเพิ่มเติม 1)
tics ได้รับ การแสดงที่มีระดับสูงของเอบีซี
ขนส่งหรือปั๊มไหลที่แตกต่างเมื่อเทียบกับปกติ
เซลล์ [12] และส่งผลกระทบต่อความต้านทานต่อยาเคมีบำบัด.
VanKlompenberg et al, BMC มะเร็ง (2015) 15: 457 หน้า 4 จาก 14
รูป 1 (ดูตำนานในหน้าถัดไป.)
VanKlompenberg et al, BMC มะเร็ง (2015) 15: 457 หน้า 5 จาก 14
ในคำอื่น ๆ เซลล์ที่มักจะยังคงอยู่หลังจากการรักษา
และดังนั้นจึงก่อให้เกิดการกำเริบของเนื้องอกมักจะสำบัดสำนวน
กลไกในการวัด tics จะผ่านการใช้
ทดสอบของ ALDEFLUOR ใช้มาซึ่งที่ 23 จาก 33
สายพันธุ์เซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์พบว่ามีการบวก
[24] ดังนั้นเราจึงใช้การทดสอบ ALDEFLUOR เพื่อตรวจสอบ
ประชากรสำบัดสำนวน เซลล์ที่ถูกบ่มกับ
สารตั้งต้นในการปรากฏตัว ALDH (ควบคุม) หรือไม่มี (ทดสอบ)
ของ ALDH ยับยั้งเอนไซม์ diethylaminobenzaldehyde
(DEAB) รั้วรอบขอบชิด (ALDH-
) ประชากรในการควบคุม
สภาพไม่เปลี่ยนแปลงใน APC-กลายพันธุ์เมื่อเทียบกับ wildtype
เซลล์ (รูป. 4a, 97.7% เมื่อเทียบกับ 95.5%) แต่
ในกรณีที่ไม่มีการยับยั้ง ALDH ประชากรรั้วรอบขอบชิด
เปลี่ยนจาก 77.8% ใน MMTV-PyMT; Apc + / + เซลล์
เพียง 20.3% ใน MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์แสดงให้เห็น
ว่าการกลายพันธุ์ Apc เพิ่ม TIC ประชากร (รูปที่. 4)
และข.
ในการแปลผลของเราจากเซลล์เมาส์เพื่อมนุษย์
สายพันธุ์ของเซลล์เราหันไป MDA-MB-157 เซลล์ซึ่ง
เป็นเซลล์มะเร็งเต้านมสามเชิงลบมาจาก
ปอดไหลจาก โรคมะเร็งเต้านมของมนุษย์ metaplastic
[25] สายพันธุ์ของเซลล์นี้เฉพาะที่ได้รับเลือกเพราะ
เนื้องอก metaplastic เหมือนที่พัฒนาใน MMTVPyMT; ApcMin / +
รูปแบบ [23] ขณะที่ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ-MB-157 เซลล์มี
APC ชนิดป่า [26-27] เราใช้ lentiviral พึ่ง
shRNA ที่จะล้มลง APC และสังเกตเห็นการลดลง 60%
ในการแสดงออกของยีน APC (รูป. 5a) immunofluorescence ใช้
ที่เราตั้งข้อสังเกตว่า APC เซลล์ล้มลง
ลดลงการแสดงออกของโปรตีน APC ที่เยื่อหุ้ม
นิวเคลียส (รูป. 5b) การเพิ่มจำนวนเซลล์พื้นฐานไม่ได้
เปลี่ยนแปลงในเซลล์ APC ล้มลง (ไม่ได้แสดงข้อมูล).
การรักษาด้วย cisplatin doxorubicin หรือยา paclitaxel ไม่
ไม่ส่งผลกระทบในการขยายสาย APC ล้มลง
เมื่อเทียบกับสายแม่ (รูป. 5c, แฟ้มเพิ่มเติม 1)
คล้ายกับ ผลกระทบในรูปแบบ PyMT มา (รูปที่. 2).
APC ล้มลง MDA-MB-157 เซลล์ลดลงแสดง
การตายหลังการรักษาด้วยยา paclitaxel หรือ cisplatin
(รูป. 5d และ e, แฟ้มเพิ่มเติม 1) ในขณะที่ยา paclitaxel
การตอบสนองไม่ได้แสดงให้เห็นว่าก่อนหน้านี้จะขึ้นอยู่กับ
สถานะของ APC (รูป. 2b) ผลกระทบของ APC กับการตอบสนอง cisplatin
(รูป. 2b และ 5d) มีความสอดคล้องระหว่างสอง
ระบบรูปแบบ ในทางตรงกันข้ามกับผลใน PyMT
แบบจำลองระบบ (มะเดื่อ. 2b) apoptosis doxorubicin พึ่ง
ไม่ได้ถูกเปลี่ยนแปลงโดย APC-สถานะในภาคตะวันออกเฉียงเหนือ-MB-157 มือถือ
ระบบ (รูป. 5d).
การอภิปราย
การกำเริบของโรคมะเร็งเต้านมที่บัญชี สำหรับ 90%
ของการเสียชีวิตที่เกี่ยวข้องกับมะเร็งเต้านม [13], มักจะมาพร้อม
ความต้านทานเคมีบำบัด [28] ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญ
ในการตรวจสอบตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่เกี่ยวข้องกับการนี้
กระบวนการ กลไกหลายคนได้รับการบันทึกให้
การพัฒนาของความต้านทานเคมีบำบัด; แต่
หนึ่งในที่สุดที่รู้จักกันดีคือความต้านทาน multidrug
ทฤษฎี การแสดงออกของปั๊มไหลที่ควบคุม
อัตราการที่ยาเสพติดจะยังคงอยู่ในเซลล์และเพิ่ม
การแสดงออกหรือกิจกรรมของปั๊มเหล่านี้นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของ
ความต้านทานต่อยาเคมีบำบัด สำบัดสำนวนหรือเซลล์ต้นกำเนิดมะเร็ง
แสดงระดับสูงของเอบีซี transporters [12, 29] และมีความ
ทนต่อยาเคมีบำบัดกว่าที่อื่น ๆ
เซลล์มะเร็ง [30] ผลของเราในรูปแบบมือถือเมาส์สนับสนุน
การเรียกร้องนี้เพราะ MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์มี
เพิ่มขึ้นสำบัดสำนวนและระดับที่สูงขึ้นของการแสดงออก MDR1 เรา
ก่อนหน้านี้มีรายงานว่า Apc กลายพันธุ์ใน MMTV-PyMT
รูปแบบยืนยันการใช้งานที่เพิ่มขึ้น FAK [23] ลบ FAK ได้
รับการแสดงเพื่อลดจำนวนสำบัดสำนวนในปัจจุบัน
ทั้งมะเร็งเต้านม [31-33] และโรคมะเร็งผิวหนัง [34] ดังนั้น
กฎระเบียบของ FAK โดย APC อาจจะเอื้อต่อ
การเปลี่ยนแปลงในจำนวน tics ผ่านการปิดกั้น
กระบวนการของตัวเองต่ออายุ.
เซลล์ ALDH บวกมีการแพร่กระจายมากกว่า ALDHnegative
เซลล์ [24] และกิจกรรม ALDH ที่เพิ่มขึ้นจะนำไปสู่
​​การวินิจฉัยโรคทางคลินิกที่ไม่ดี [35] cisplatin และ paclitaxel ทน
เซลล์ได้เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับการแสดงออก ALDH
ไปยังเซลล์ปกครอง [36, 37] ALDH เซลล์บวกได้
เพิ่มขึ้นการแสดงออกของ STAT3 (ตัวแปลงสัญญาณและสัญญาณ
กระตุ้นการถอดความ 3) [38] ซึ่งทำให้ STAT3
เป้าหมายที่เหมาะสำหรับการลดลงของประชากรใน TIC
-MMTV PyMT; ApcMin / + เซลล์ นอกเหนือจากการใช้ในเชิงพาณิชย์
ที่มีอยู่โปรตีน STAT3 [39], miR-337-3p, ผู้ใหญ่
ลำดับของ miR-337 ยังสามารถยับยั้ง STAT3,
sensitizing เซลล์มะเร็งปอดการรักษายา paclitaxel [40].
(ดูรูปในหน้าก่อนหน้า.)
รูปที่ . 1 การแสดงออกของยีนของเอทีพีที่ขึ้นอยู่กับการขนส่งเทปคาสเซ็ทที่มีผลผูกพัน การวิเคราะห์ Microarray ของต่อมน้ำนมจาก ApcMin / + และ Apc + / +
ไมค์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แอนติบอดี และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง blots
ถูกพัฒนามีความชัดเจน ECL รีเจ้นท์ ( ไบโอ ราด ) และ
chemidoc MP Imaging System ( ไบโอ ราด ) densitometry
ปริมาณการใช้ ImageJ ซอฟต์แวร์
( NIH ) blots เป็นตัวแทนสามวิ่ง aldefluor )

อัลดีไฮด์ ดีไฮโดรจีเนส ( aldh ) เอนไซม์คือ
กำหนดใช้ aldefluor ™ Kit ( ก้านเทคโนโลยีเซลล์
,แวนคูเวอร์ , บริติชโคลัมเบีย , แคนาดา )
ตามขั้นตอนของผู้ผลิต สั้น 2.0x105
mmtv pymt ; APC / หรือ mmtv pymt ; apcmin / เซลล์
หยุดชั่วคราวใน aldefluor ™ในบัฟเฟอร์ที่มีพื้นผิว ( bodipy aminoacetaldehyde aldh

) ซึ่งทำหน้าที่เป็น " ทดสอบ " ตัวอย่าง ตัวอย่างที่เหมือนกันในฐานะ
" ควบคุม " ที่มี aldh ( diethylaminobenzaldehyde
( deab )เฉพาะ aldh1 ตัวยับยั้งเอนไซม์ .
ทั้งตรวจสอบและควบคุมจำนวนเชื้อ
60 นาทีที่ 37 ° C ฟลูออเรสเซนต์ aldh การแสดง
เซลล์พบว่าช่องทางการเรืองแสงสีเขียว
( 515 ) 535 nm ) ของ cytotomics FC 500 ( Beckman Coulter
เบรีย , แคลิฟอร์เนีย ) การใช้โมโน . วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้การวิเคราะห์ข้อมูลการไหล (
flowjo ซอฟต์แวร์ ( ต้นไม้ดาว
แอชแลนด์ , หรือ )เปอร์เซ็นต์การเปลี่ยนระหว่าง gated เหตุการณ์ใน
ทดสอบกับตัวอย่างควบคุมคำนวณ ; เปลี่ยนมากกว่า
หมายถึงจำนวนเซลล์ในตัวอย่างให้บวก aldh
.

นักเรียนสถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลใช้การทดสอบค่าที วิเคราะห์ทั้งหมดยกเว้น
รวมกันรักษาที่การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางกับ
บอนเฟอร์โรนี Post Hoc Test ที่ใช้ p < 0.05 คือ


ผลพิจารณาที่สำคัญกลไกหนึ่งที่สำคัญของชนิดความต้านทาน
การแสดงตนของเอทีพี ขึ้นอยู่กับการปั๊มเพื่อควบคุม
อัตราที่อาจ effluxed
ยาออกจากเซลล์และควบคุมปริมาณของยา
เหลืออยู่ภายในเซลล์ [ 10 ] ผ่านการวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการของเรา

abcg2 ก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกถูกลง ระเบียบในเมาส์ต่อมน้ำนม
APC กลายพันธุ์ต่อมในช่วงการให้น้ำนม [ 11 ] อย่างไรก็ตาม การแสดงออก mdr1
เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ( รูปที่ 1A )
mdr1 เป็นหนึ่งที่พบมากที่สุด การปั๊มที่เกี่ยวข้องอาจต้านทาน และมีการแสดง

และ การควบคุมยารั doxorubicin [ 12 ] สอดคล้องกับการศึกษาพัฒนาการ
( รูปที่ 1A ) , เซลล์ที่แยกได้จาก mmtv pymt
; apcmin / เนื้องอก พบสถิติ
เพิ่มการแสดงออกของ mdr1 เมื่อเทียบกับการควบคุม
mmtv pymt ; APC / เซลล์ ( รูปที่ 1A , ไฟล์เพิ่มเติม 1 ) .
การรักษาด้วยเคมีบำบัดและเป็น doxorubicin , แต่ไม่ , การแสดงออกของ mdr1 ปรับปรุงต่อไป

mmtv ใน pymt ; apcmin / เซลล์ ( รูปที่ 1A , ไฟล์เพิ่มเติม 1 ) .
doxorubicin รักษายังเพิ่มการแสดงออกของโปรตีน
mdr1 ใน mmtv pymt ; apcmin / เซลล์ ( รูปที่ ดี และอี
เพิ่มเติมไฟล์ 1 )เราพบว่าไม่มีการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ abcg2 หลังจากการรักษาด้วย

( รูปอาจตัวแทนในแฟ้มอีก 1 ) อย่างไรก็ตาม mmtvpymt ; APC /
มีการแสดงออกมากขึ้นของโปรตีน abcg2
เมื่อเทียบกับ mmtv pymt ; apcmin / เซลล์ ( ภาพ 1D และ F ,
เพิ่มเติมไฟล์ 1 )
ให้เพิ่มการแสดงออก mdr1 เราตั้งสมมติฐานว่า APC การกลายพันธุ์จึงอาจหารือ

อาจต้านทานเพื่อทดสอบสมมติฐานนี้เราวัด
proliferation เซลล์และเซลล์หลังการรักษาด้วยเคมีบำบัด
บริการยุโรปหรือ doxorubicin . brdu ประสาน
แสดงให้เห็นว่าในขณะที่ชนิดรักษาไม่ได้
เปลี่ยนเซลล์ proliferation ผลกระทบของเคมีบำบัด และในการเป็นด๊อกโซรูบิซิน

mmtv เจียมปรับปรุง pymt ; apcmin / เซลล์ ( รูปที่ 2A , ไฟล์เพิ่มเติม
1 )ให้กลไกของการกระทำของชนิด
ตัวแทน และขาดความแข็งแรง proliferative เรา
ใช้ของแคสเปส 3 ถ้าพิจารณาว่า APC การกลายพันธุ์
ลดลงอัตราการตายแบบ apoptosis อาจ
หลังจากการรักษา ตามที่คาดไว้ , ไม่แตกต่างจากใน
เปอร์เซ็นต์ของ apoptosis ในการควบคุมรถยนต์ได้รับการรักษา ) mmtvpymt ; apcmin /
เมื่อเทียบกับ mmtv pymt ; APC / เซลล์ ( รูปที่ 2B
และซีแฟ้มเพิ่มเติม 1 ) อย่างไรก็ตาม mmtv pymt ; apcmin /
เซลล์ลดลงเคมีบำบัดหรือการเกิด apoptosis doxorubicin
เมื่อเทียบกับ mmtv pymt ; APC ( รูปที่ 2B /
c และไฟล์เพิ่มเติม ( 1 ) ไม่มีความแตกต่างในชนิดเหนี่ยว
( พบว่าเซลล์มะเร็ง 2 .
เราก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่ากลายพันธุ์ APC ใน
mmtv pymt เมาส์รูปแบบการเพิ่มขึ้น
และการแสดงออกของ pfak psrc pjnk , และ ,และการยับยั้ง
ของ src หรือ jnk จีบ APC ( proliferation เซลล์
[ 23 ] ได้รับผลของ APC สถานะ
เคมีบำบัด - ด๊อกโซรูบิซิน ( ) ( รูปที่ 2B
เพิ่มเติมไฟล์ 1 ) และเพื่อให้เข้าใจว่า src /
jnk ส่งสัญญาณทางอาจส่งผลกระทบชนิด
ต้านทานที่เราวัด apoptosis ในเซลล์รักษาด้วย
รวมกันกฎเกณฑ์ เซลล์จะถูกด้วย
doxorubicin ร่วมกับเคมีบำบัด หรือทั้ง
ยับยั้งกับ SRC ( pp2 ) หรือ jnk ( sp600125 ) นอกจากนี้ของหรือ sp600125 ให้เคมีบำบัด pp2

( เพิ่มขึ้นอย่างมากเมื่อเทียบกับซิสพลาตินคนเดียวใน mmtvpymt ; apcmin / เซลล์
( รูปที่ 3A และ C แฟ้มเพิ่มเติม 1 )

( cisplatin ) จึงกลายเป็นเทียบเท่าในเซลล์ 2 เส้น ด้วยการยับยั้งหรือ SRC
หรือ jnk .นอกจากนี้ยังพบว่าเนื้องอกมีโหมดที่แตกต่างกันและการกระทำของดอกโซรูบิซิน

( เพราะ doxorubicinmediated ใน mmtv pymt ;
apcmin / เซลล์ ได้รับผลกระทบ โดยนอกเหนือจาก pp2 หรือ sp600125
( รูปที่ 3B , ไฟล์เพิ่มเติม 1 ) .
tics ได้รับการแสดงที่มีระดับที่สูงขึ้นของตัว ABC
หรือการปั๊ม เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ปกติที่แตกต่าง
[ 12 ]และผลกระทบที่อาจต้านทาน .
vanklompenberg et al . มะเร็ง BMC ( 2015 ) 15:457 หน้า 4 จาก 14
รูปที่ 1 ( ดูตำนานในหน้าถัดไป )
vanklompenberg et al . มะเร็ง BMC ( 2015 ) 15:457 หน้า 5 จาก 14
ในคำอื่น ๆเซลล์ที่มักจะยังคงอยู่หลังการรักษา และการเกิดเนื้องอก
จึงมักจะเกร็ง . เป็นกลไกปกติ
วัด tics จะใช้ในการ facs
ของ aldefluor ,