In the present study MAMAs were des

In the present study MAMAs were designed and tested to detect the nt367 and nt629 SNPs
in the obg gene of M. synoviae. The genome locations, primer sequences, annealing and melting
temperatures for these assays can be found in Tables 1 and 2. Melt-MAMA PCR reactions
were performed in 10 μl total volume, containing 1μl target DNA diluted in 2 μl 5X Color-less
GoTaq Flexi Buffer (Promega Inc., Madison, WI), 1 μl MgCl2 (25mM), 0.3 μl dNTP (10 mM,
Qiagen Inc., Valencia, CA), 0.5 μl EvaGreen (Biotium Inc., Hayward, CA), primers (10 pmol/μl) according to Table 1 and 0.08 μl GoTaq DNA polymerase (5 U/μl; Promega). MeltMAMAs were performed on an Applied Biosystems Step-One Plus real-time PCR system with
StepOne Softwarev2.2.2. Thermocycling parameters were 95°C for 10 min, followed by 39
cycles of 95°C for 15 sec and 58°C for 1 min. Endpoint PCR products were subjected to melt
analysis using a dissociation protocol comprising 95°C for 15 sec, followed by incremental temperature ramping (0.2°C) from 58°C to 95°C. EvaGreen fluorescent intensity was measured at
525 nm at each ramp interval and plotted against temperature.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษา มาม๊าถูกออกแบบ และทดสอบเพื่อตรวจหา SNPs nt367 และ nt629ในยีน obg ของ M. synoviae สถานที่ตั้งกลุ่ม ลำดับรองพื้น การหลอม และการละลายอุณหภูมิสำหรับ assays เหล่านี้สามารถพบได้ในตารางที่ 1 และ 2 ปฏิกิริยา PCR มาม่าละลายดำเนินการใน 10 μl ปริมาตรรวม 1μl ดีเอ็นเอเป้าหมายที่เจือจางใน μl 2 5 X น้อยกว่าสีที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ Flexi GoTaq (Promega Inc. เมดิสัน WI), 1 μl MgCl2 (25mM), 0.3 μl dNTP (10 mMQiagen Inc. วาเลนเซีย CA), 0.5 μl EvaGreen (Biotium Inc. เฮย์เวิร์ด CA), ไพรเมอร์ (10 pmol μl) ตามตารางที่ 1 และ 0.08 μl GoTaq ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (5 U μl Promega) MeltMAMAs ดำเนินการประยุกต์ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพขั้นหนึ่งบวกแบบเรียลไทม์ PCR ระบบด้วยStepOne Softwarev2.2.2 เทอร์โม゚พารามิเตอร์ได้ 95° C 10 นาที ตาม ด้วย 39รอบ 95° c สำหรับ 15 วินาที และ 58° C สำหรับผลิตภัณฑ์ปลายทาง PCR 1 นาทีถูกละลายวิเคราะห์โดยใช้โพรโทคอ dissociation ประกอบ 95° C เป็นเวลา 15 วินาที ตาม ด้วยการเพิ่มอุณหภูมิกระโจน (0.2° C) จาก 58° C ถึง 95 องศาเซลเซียส หลอดฟลูออเรสเซนต์ความเข้มซึ่งวัดได้ที่ EvaGreen525 nm ที่แต่ละช่วงทางลาด และพล็อตเทียบกับอุณหภูมิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใน Mamas การศึกษาปัจจุบันได้รับการออกแบบและทดสอบเพื่อตรวจสอบและ nt367 nt629 SNPs
ยีน obg เอ็ม synoviae สถานที่จีโนมลำดับไพรเมอร์หลอมละลายและ
อุณหภูมิสำหรับการตรวจเหล่านี้สามารถพบได้ในตารางที่ 1 และ 2 ปฏิกิริยา Melt-MAMA PCR
ได้ดำเนินการใน 10 ไมโครลิตรปริมาณรวมที่มี1μlกำหนดเป้าหมายดีเอ็นเอเจือจางใน 2 ไมโครลิตร 5X สีน้อย
GoTaq Flexi บัฟเฟอร์ (Promega อิงค์ Madison, WI) 1 ไมโครลิตร MgCl2 (25mm) 0.3 ไมโครลิตร dNTP (10 มิลลิ,
Qiagen อิงค์วาเลนเซีย, CA) 0.5 ไมโครลิตร EvaGreen (Biotium อิงค์เฮย์เวิร์ด CA) ไพรเมอร์ (10 pmol / ไมโครลิตร) ตามตารางที่ 1 และ 0.08 ไมโครลิตร GoTaq DNA Polymerase (5 U / ไมโครลิตร; Promega) MeltMAMAs ได้ดำเนินการในระบบ PCR Applied Biosystems ขั้นตอนหนึ่งพลัสเวลาจริงกับ
StepOne Softwarev2.2.2 พารามิเตอร์ Thermocycling 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วย 39
รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 วินาทีและ 58 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที ผลิตภัณฑ์ Endpoint PCR ถูกยัดเยียดให้ละลาย
การวิเคราะห์โดยใช้โปรโตคอลแยกออกจากกันประกอบด้วย 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 วินาทีตามด้วยอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นกระโจน (0.2 ° C) จาก 58 ° C ถึง 95 ° C EvaGreen เข้มเรืองแสงวัดที่
525 นาโนเมตรในแต่ละช่วงเวลาทางลาดและพล็อตกับอุณหภูมิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการศึกษาครั้งนี้ คือ แม่ออกแบบ และทดสอบเพื่อตรวจหา และ nt629 snps nt367ใน OBG ) ของม. synoviae . จีโนมที่ตั้งเมอร์ลำดับ การอบและละลายอุณหภูมิสำหรับวิธีเหล่านี้สามารถพบได้ในตารางที่ 1 และ 2 ละลายเทคนิคปฏิกิริยา มาม่าจำนวน 10 μ L ปริมาณรวม ประกอบด้วย 1 μเป้าหมายลิตรดีเอ็นเอเจือจางใน 2 μผม 5x สีน้อยgotaq Flexi บัฟเฟอร์ ( promega อิงค์ , Madison , WI ) 1 ชุดμ L ( 25mm ) , 0.3 μผม dntp ( 10 มม.QIAGEN อิงค์ , วาเลนเซีย , แคลิฟอร์เนีย ) , 0.5 μผม evagreen ( biotium อิงค์ , เฮย์เวิร์ด , แคลิฟอร์เนีย ) , ไพรเมอร์ ( 10 pmol / μ L ) ตามตารางที่ 1 และ 0.08 μผม gotaq DNA polymerase ( 5 U / μ l ; promega ) meltmamas จำนวนเป็น Applied Biosystems ขั้นตอนหนึ่งบวกระบบ PCR แบบเรียลไทม์สแตปวัน softwarev2.2.2 . ผื่นแดงค่า 95 องศา C นาน 10 นาที ตามด้วย 39รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 15 วินาทีและ 58 องศา C เป็นเวลา 1 นาที ทั้งนี้ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกละลายการวิเคราะห์การใช้โปรโตคอลการประกอบด้วย 95 องศา C เป็นเวลา 15 วินาที ตามด้วย เพิ่มอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้น ( 0.2 ° C ) จาก 58 องศา C ถึง 95 องศา วัดที่ความเข้ม evagreen เรืองแสง525 nm ในแต่ละช่วงเวลาและทางลาดงัดข้อกับอุณหภูมิ