2.7. Phagocytic Activity Assay. Pha

2.7. Phagocytic Activity Assay. Phagocytic activity of blood
leukocytes was determined by using the method of Seeley
et al. [17] with some modification. One mL of leukocyte
suspension was mixed with 2mL of the Congo red-stained
Saccharomyces cerevisiae cell suspension (providing a yeast
cell : leukocyte ratio of 20 : 1). The mixtures were incubated
at room temperature for 1 h. Following incubation, 1mL of
ice-cold HBSS was added and 1mL of histopaque (1.077) was
injected into the bottom of each sample tube. The samples
were centrifuge at 850 ×g for 5min to separate leukocytes
fromyeast cells. Leukocyteswere harvested andwashed twice
in HBSS. The cells were then resuspended in 1mL trypsin-
EDTA solution (5.0 g/L trypsin and 2.0 g/L EDTA, Sigma-
Aldrich) and incubated at 37∘C overnight. The absorbance of
the samples was measured at 510nmusing trypsin-EDTA as
a blank.
Congo red-stained S. cerevisiae cells were prepared as
follows. Three mL of a 0.87% (w/v) Congo red in phosphate
buffer saline (PBS) pH 7.2 was added to yeast cell suspension
(1.5 g). After incubated at room temperature for 15min, the
mixture was thoroughly mixed with 7mL of distilled water.
The resulting mixture was autoclaved for 15 min, washed
three times in HBSS, and stored at 4∘C until use. Prior to
use, the cell concentration of was adjusted to 108 cells/mL in
HBSS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 กิจกรรม phagocytic วิเคราะห์ กิจกรรม phagocytic เลือดกำหนด โดยใช้วิธีของ Seeley leukocytesal. ร้อยเอ็ด [17] พร้อมปรับเปลี่ยนบาง ML หนึ่งของ leukocyteระงับได้ผสมกับของคองโกแดงสี 2mLระงับเซลล์ saccharomyces cerevisiae (ยีสต์ให้เซลล์: leukocyte อัตราส่วน 20: 1) น้ำยาผสมจะถูก incubatedที่อุณหภูมิห้องใน 1 ชั่วโมง คณะทันตแพทยศาสตร์ 1mL ของต่อไปนี้เพิ่ม HBSS ฉ่ำ และ 1mL ของ histopaque (1.077) ได้ฉีดเข้าไปในด้านล่างของหลอดแต่ละตัวอย่าง ตัวอย่างมีเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 850 × g สำหรับ 5 นาทีแยก leukocytesมีเซลล์ fromyeast Andwashed Leukocyteswere เก็บเกี่ยวสองใน HBSS เซลล์ได้แล้ว resuspended ในทริปซิน 1mL-เพิ่ม EDTA (ทริปซิน 5.0 g/L และ 2.0 g/L EDTA ซิก-Aldrich) และ incubated ที่ 37∘C ค้างคืน Absorbance ของตัวอย่างที่วัดถูกทริปซิน 510nmusing-EDTA เป็นว่างเปล่าสีคองโกเรด S. cerevisiae เซลล์ถูกเตรียมไว้เป็นต่อไปนี้ 3 mL ของ 0.87% (w/v) เรดคองโกในฟอสเฟตเพิ่มบัฟเฟอร์ saline (PBS) pH 7.2 การระงับเซลล์ยีสต์(1.5 กรัม) หลังจาก incubated ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 15 นาที การผสมได้อย่างละเอียดผสมกับน้ำกลั่น 7mLส่วนผสมได้ถูก autoclaved สำหรับ 15 นาที เครื่องซักผ้าครั้งที่สามใน HBSS และเก็บไว้ที่ 4∘C จนใช้ ก่อนที่จะมีการปรับปรุงใช้ เซลล์ความเข้มข้นของการ 108 เซลล์/มล.ในHBSS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 Assay กิจกรรม phagocytic กิจกรรม phagocytic
เลือดเม็ดเลือดขาวถูกกำหนดโดยการใช้วิธีการของซีลีย์
et al, [17] ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง หนึ่งมิลลิลิตรของเม็ดเลือดขาวระงับผสมกับ 2mL คองโกสีแดงสี Saccharomyces cerevisiae เซลล์แขวนลอย (ให้ยีสต์เซลล์: เม็ดเลือดขาวของอัตราส่วน 20: 1) ผสมถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ต่อไปนี้การบ่ม 1 mL ของเย็นHBSS ถูกบันทึกและ 1 mL ของ Histopaque (1.077) ได้รับการฉีดเข้าไปในด้านล่างของแต่ละหลอดตัวอย่าง กลุ่มตัวอย่างที่มีการหมุนเหวี่ยงที่ 850 ×กรัมสำหรับ 5 นาทีที่จะแยกเม็ดเลือดขาว fromyeast เซลล์ Leukocyteswere เก็บเกี่ยว andwashed สองครั้งในHBSS เซลล์ที่ถูก resuspended แล้วใน 1 mL trypsin- แก้ปัญหา EDTA (5.0 g / L trypsin และ 2.0 กรัม / ลิตร EDTA, Sigma- ดิช) และบ่มที่37∘Cในชั่วข้ามคืน การดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างได้รับการวัดที่ 510nmusing trypsin-EDTA เป็นเปล่า. คองโกสีแดงสี S. cerevisiae เซลล์ได้จัดทำขึ้นเป็นดังต่อไปนี้ สามมิลลิลิตรของ 0.87% (w / v) คองโกสีแดงในฟอสเฟตน้ำเกลือบัฟเฟอร์(PBS) pH 7.2 ถูกบันทึกอยู่ในการระงับยีสต์เซลล์(1.5 กรัม) หลังจากบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาทีที่ส่วนผสมที่ถูกผสมกับ7ml น้ำกลั่น. ผสมทำให้ได้รับการอบไอน้ำเป็นเวลา 15 นาทีล้างสามครั้งในHBSS และเก็บไว้ที่4∘Cจนถึงการใช้งาน ก่อนที่จะใช้ความเข้มข้นของเซลล์ที่ถูกปรับถึง 108 เซลล์ / มิลลิลิตรใน HBSS

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . สิ่งแปลกปลอมกิจกรรมการทดสอบ กิจกรรมสิ่งแปลกปลอมของเลือด
เม็ดเลือดขาวถูกกำหนดโดยการใช้วิธีซีลีย์
et al . [ 17 ] กับการปรับเปลี่ยน หนึ่งมิลลิลิตรผสมกับ 2ml 2
ช่วงล่างของคองโกสีแดงเปื้อน
Saccharomyces cerevisiae เซลล์แขวนลอย ( ให้เซลล์ยีสต์
: อัตราส่วนเม็ดโลหิตขาว 20 : 1 ) ส่วนผสมถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงต่อไปนี้ระยะเวลาของน้ำแข็ง 1ml
hbss เย็นเพิ่มและ 1ml ของ histopaque ( 1.077 ) คือ
ฉีดเข้าไปในด้านล่างของแต่ละหลอดตัวอย่าง . ตัวอย่าง
เป็นเครื่อง 850 × G สำหรับ 5 นาทีแยกเม็ดเลือดขาว
fromyeast เซลล์ leukocyteswere เก็บเกี่ยว andwashed สองครั้ง
ใน hbss . เซลล์แล้ว resuspended ใน 1ml ซิน -
EDTA โซลูชั่น ( 5.0 กรัม / ลิตรและ 2.0 กรัมต่อลิตรตามลำดับเอนไซม์ , Sigma -
อัลดริช ) บ่มที่ 37 ∘ C ในชั่วข้ามคืน ส่วนค่า
ตัวอย่างถูกวัดที่ 510nmusing EDTA เป็นทริป

ว่าง . คองโกสีแดงเปื้อนเชื้อ S . cerevisiae เซลล์เตรียมเป็น
1 3 มล. ของ 0.87 % ( w / v ) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( คองโกแดง
( PBS ) pH 7.2 เพิ่ม

เซลล์แขวนลอยยีสต์ ( 1.5 กรัม ) หลังจากบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที
ผสมส่วนผสมให้ละเอียดผสมกับ 7ml น้ำกลั่น .
ซึ่งส่วนผสมสังเคราะห์ 15 นาที ล้าง hbss
3 ครั้ง และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 ∘ C จนใช้ ก่อน

ใช้เซลล์เข้มข้นปรับ 108 เซลล์ / มล. ใน
hbss .