Lipid peroxidation by Ferric thiocy

Lipid peroxidation by Ferric thiocyanate method (Mistuda et al., 1996)
Cell membrane is more susceptible to free radicals that reacts rapidly with the unsaturated fatty acids (like linoleic acid and arachidonic acid) embedded in the membrane resulting in lipid peroxidation. In this assay, linoleic acid is used as the model system for measuring the levels of lipid peroxidation. This was used to determine the amount of peroxide formed during the lipid peroxidation, in which peroxide will react with ferrous chloride and form ferric ions. Ferric ions will then unite with ammonium thiocyanate and produce a ferric thiocyanate complex whose colour is measured at 500nm. A mixture containing 10 ml of 0.05 M-phosphate buffer (pH 7.0), 5.9ml of water, 0.1 ml of plant extract and 4 ml of 2.5% linoleic acid in absolute ethanol was placed in a vial with a screw cap and then placed
3 International Journal of Research in Cosmetic Science 2012; 2 (1) : 1-7
in a dark oven at 40 degree centigrade overnight. To 0.1ml of this incubation mixture, added 9.7ml of 75% ethanol and 0.1 ml of 0.02M ferrous chloride in 3.5% HCl. Add 0.1ml of 30% ammonium thiocyanate, precisely 3 minutes after the addition of ferrous chloride. The absorbance of the red colour was measured at 500nm. A mixture without the plant sample was used as the negative control. (Note: Instead of plant extract, use 0.1 ml of water/ethanol/ petroleum ether as control). Ferric reducing power assay The reducing antioxidant power of the plant extracts were determined by the method of Oyaizu (1986). Different concentrations of plant extracts in 1 ml of distilled water were mixed with phosphate buffer (2.5 ml, 0.2 M, pH 6.6) and potassium ferricyanide [K3Fe(CN)6] (2.5 ml, 1%). The mixture was incubated at 50oC for 20 min. Then, 2.5 ml of trichloroacetic acid (10%) was added to mixture, which was then centrifuged for 10 min at 3000 rpm. The upper layer of solution (2.5 ml) was mixed with distilled water (2.5 ml) and FeCl3 (0.5 ml, 0.1%). The absorbance was measured at 700 nm against a blank using UV-Vis spectrophotometer after 30 mins. Increased absorbance of the reaction mixture indicates increase in reducing power. The redcuing power of the plant material was expressed in terms mg of gallic acid equivalents/g of plant material. Determination of total phenolics (Mallick and Singh, 1980) Phenols react with phosphomolybdic acid in Folin-ciocalteau reagent in alkaline medium and produce a blue colored complex (molybdenum blue) that can be estimated colorimetrically at 650 nm. Pipetted out different aliquots (0.2 to 2 ml) into test tubes. Made up the volume in each tube to 3.0 ml with water. Added 0.5 ml of Folin-Ciocalteau reagent. After 3 minutes, added 2.0 ml of 20% sodium carbonate solution to each tube. Mixed thoroughly, placed the tubes in a boiling water bath for exactly 1 minute, cooled and measured the absorbance at 650nm against reagent blank. The amount of phenols present is expressed as mg catechol equivalents/g of plant material.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Peroxidation ของไขมัน โดยวิธี thiocyanate เฟอร์ (Mistuda et al., 1996)
เซลล์เมมเบรนจะอ่อนแอมากขึ้นจากอนุมูลอิสระที่ทำปฏิกิริยากับกรดไขมันในระดับที่สม (เช่นกรด linoleic และกรด arachidonic) อย่างรวดเร็วในเมมเบรนเกิด peroxidation ของไขมัน ในการทดสอบนี้ กรด linoleic ใช้เป็นระบบจำลองสำหรับวัดระดับของ peroxidation ของไขมัน นี้ถูกใช้เพื่อกำหนดจำนวนของเปอร์ออกไซด์ที่เกิดขึ้นระหว่าง peroxidation ไขมัน เปอร์ออกไซด์ซึ่งจะทำปฏิกิริยากับคลอไรด์เหล็ก และประจุเฟอร์ฟอร์ม ประจุเฟอร์แล้วจะดามกับ thiocyanate แอมโมเนีย และผลิตเป็นเฟอร์ thiocyanate ซับซ้อนสีซึ่งเป็นวัดที่ 500nm ส่วนผสมที่ประกอบด้วย 10 ml 0.05 M-ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), 5.9ml น้ำ 01 ml ของโรงงานสกัด และ ml 4 ของ 2.5% กรด linoleic ในเอทานอลนอนถูกวางในคอนแทคกับฝาครอบสกรูแล้ว วาง
สมุดนานาชาติ 3 งานวิจัยในวิทยาศาสตร์เครื่องสำอางปี 2012 2 (1): 1-7
ในเตาอบที่ 40 ดีกรีเซนติเกรดมืดนอน 0.1 มล.ของผสมนี้คณะทันตแพทยศาสตร์ เพิ่ม 9.7ml 75% เอทานอล และ 0.1 มล.ของ 0.02M เหล็กคลอไรด์ 3.5% HCl เพิ่ม 0มล. 1 ของ thiocyanate แอมโมเนีย 30% แม่นยำ 3 นาทีหลังจากการเพิ่มของคลอไรด์เหล็ก มีวัด absorbance ของสีแดงที่ 500nm ส่วนผสมไม่ มีตัวอย่างพืชถูกใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ (หมายเหตุ: แทนพืชแยก ใช้ 0.1 ml ของน้ำ/เอทานอล/ปิโตรเลียมอีเทอร์เป็นตัวควบคุม) เฟอร์ลดพลังงานวิเคราะห์การลดอนุมูลอิสระของสารสกัดจากพืชถูกกำหนด โดยวิธีการของ Oyaizu (1986) ความเข้มข้นต่าง ๆ สารสกัดจากพืชใน 1 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ผสม ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 2.5 ml, 0.2 M, 6.6) และโพแทสเซียม ferricyanide [K3Fe (CN) 6] (2.5 ml, 1%) ส่วนผสมคือ incubated ที่ 50oC สำหรับ 20 นาที แล้ว 25 ml ของกรด trichloroacetic (10%) ถูกเพิ่มเข้าไปผสม ซึ่งถูก centrifuged แล้วใน 10 นาทีที่ 3000 รอบต่อนาที ชั้นบนของโซลูชัน (2.5 ml) ที่ผสมกับน้ำกลั่น (2.5 ml) และ FeCl3 (0.5 ml, 0.1%) มีที่วัด absorbance ที่ 700 nm กับช่องว่างโดยใช้ UV-Vis เครื่องทดสอบกรดด่างหลังจาก 30 นาที Absorbance ที่เพิ่มขึ้นของผสมปฏิกิริยาบ่งชี้เพิ่มขึ้นในการลดใช้พลังงาน พลังงาน redcuing วัสดุโรงงานถูกแสดงในเงื่อนไขมก.เทียบเท่ากรด gallic/g ของพืชวัสดุ กำหนดรวม phenolics (Mallick และสิงห์ 1980) ทำปฏิกิริยากับรีเอเจนต์ Folin-ciocalteau ในด่างกรด phosphomolybdic Phenols และผลิตเป็นสีน้ำเงินสีซับซ้อน (บลูโมลิบดีนัม) ที่สามารถประมาณ colorimetrically ที่ 650 nm Pipetted ออก aliquots ต่าง ๆ (0.2-2 ml) ลงในหลอดทดสอบ ได้ค่าระดับเสียงในแต่ละหลอดกับ 3.0 ml ด้วยน้ำ เพิ่ม 0.5 ml ของรีเอเจนต์ Folin-Ciocalteau หลังจาก 3 นาที เพิ่ม 2.0 ml ของ 20% โซเดียมคาร์บอเนตแต่ละหลอด ผสมอย่างละเอียด วางหลอดในน้ำน้ำเดือด 1 นาทีแน่นอน ระบายความร้อนด้วย และวัด absorbance ที่ 650nm กับรีเอเจนต์ที่ว่างเปล่า จำนวน phenols อยู่จะแสดงเป็นมิลลิกรัม catechol เทียบ เท่า/g ของพืชวัสดุ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเกิด lipid peroxidation โดยใช้ไทโอไซยาเนตเฟอร์ ( mistuda et al . , 1996 )
เยื่อหุ้มเซลล์เป็นอ่อนแอมากขึ้นเพื่อการเกิดอนุมูลอิสระที่ตอบสนองอย่างรวดเร็ว ด้วยกรดไขมันไม่อิ่มตัว ( เช่นกรดไลโนเลนิก และกรดอะราคิโดนิก ) ที่ฝังตัวในเยื่อที่เกิด lipid peroxidation ในการทดสอบนี้ กรดไขมันที่ใช้เป็นแบบจำลองระบบวัดระดับของ lipid peroxidationนี้ถูกใช้เพื่อกำหนดปริมาณเปอร์ออกไซด์ที่เกิดขึ้นในระหว่างการเกิด lipid peroxidation ซึ่งในเปอร์ออกไซด์จะทำปฏิกิริยากับโลหะและเฟอร์ริคคลอไรด์ไอออนรูปแบบ . เฟอริกไอออนแอมโมเนียมไทโอไซยาเนต และจะรวมกับการผลิตเฟอร์ Thiocyanate ซับซ้อนที่มีสีเป็นวัดที่ 500nm . ส่วนผสมที่ประกอบด้วย 10 มิลลิลิตร 0.05 m-phosphate บัฟเฟอร์ pH 7.0 ) , 5.9ml น้ำ 01 มิลลิลิตร สารสกัดจากพืชและ 4 ml 2.5% กรด linoleic ในสัมบูรณ์เอทานอลอยู่ในขวดด้วยสกรูฝาแล้ววาง
3 วารสารวิจัยวิทยาศาสตร์เครื่องสำอาง 2012 ; 2 ( 1 ) : 1-7
ในเตาอบที่มืดที่อุณหภูมิ 40 องศาเซนติเกรดค้างคืน เพื่อ 0.1ml นี้บ่มส่วนผสมเพิ่ม 9.7ml เอทานอล 75% และ 0.1 มิลลิลิตร 0.02m เฟอร์รัสคลอไรด์ใน 3.5 % HCL . เพิ่ม 01ml 30% แอมโมเนียมไทโอไซยาเนต แน่นอน 3 นาทีหลังจากเติมเฟอร์รัสคลอไรด์ ส่วนค่าสี แดง สี เป็นวัดที่ 500nm . ส่วนผสมปราศจากพืชตัวอย่างที่ใช้เป็นตัวควบคุมลบ ( หมายเหตุ : แทนที่จะใช้สารสกัดจากพืช , 0.1 มิลลิลิตรเอทานอล / น้ำ / ปิโตรเลียมอีเทอร์เป็นตัวควบคุม )เฟอริก การลดใช้พลังงานในการลดสารต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดพืชถูกกำหนดโดยวิธีการ oyaizu ( 1986 ) ที่แตกต่างกันและสารสกัดจากพืช 1 มล. น้ำกลั่นผสมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 2.5 มล. 0.2 M pH 6.6 ) และโพแทสเซียมเฟอร์ริกไซนาไนด์ [ k3fe ( CN ) 6 ] ( 2.5 ml 1 % ) ส่วนผสมที่ 50oc บ่มเป็นเวลา 20 นาทีจากนั้น 25 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก ( 10% ) ถูกเพิ่มลงในส่วนผสม ซึ่งเป็นระดับ 10 นาทีที่ 3 , 000 รอบต่อนาที ชั้นบนของสารละลาย ( 2.5 มิลลิลิตร ) ผสมกับน้ำกลั่น ( 2.5 มิลลิลิตร ) และ FeCl3 ( 0.1 0.5 ml ) นเป็นวัดที่ 700 nm กับว่างใช้ UV VIS Spectrophotometer หลังจาก 30 นาที เพิ่มค่าการดูดกลืนแสงของปฏิกิริยาผสมแสดงเพิ่มในการลดพลังงานการ redcuing พลังงานของวัสดุปลูกที่แสดงออกในแง่ปริมาณเพิ่มขึ้นเทียบเท่า / กรัมวัสดุพืช การหาปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด ( มัลลิก และ ซิงห์ , 1980 ) ฟีนอลมีปฏิกิริยากับฟอสโฟโมลิบดิกแอซิดใน folin ciocalteau รีเอเจนต์ในด่างปานกลาง และผลิตสีฟ้า คอมเพล็กซ์ ( Molybdenum สีฟ้า ) ที่สามารถประมาณ colorimetrically ที่ 650 nm .pipetted แตกต่างกันออกไปเฉยๆ ( 0.2 - 2 มล. ) ลงในหลอดทดสอบ ทำเสียงขึ้นในแต่ละหลอดจะ 3.0 มิลลิลิตร กับน้ำ เพิ่ม 0.5 มิลลิลิตร folin ciocalteau เกิดปฏิกิริยา หลังจากนั้น 3 นาที เพิ่มเป็น 2.0 มิลลิลิตร 20 % โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชั่นแต่ละหลอด ละเอียดผสม วางท่อในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 1 นาที , เย็นและวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 650nm กับสารเคมีว่างเปล่าปริมาณของฟีนอลปัจจุบันจะแสดงเป็นมิลลิกรัม / กรัมวัสดุเทียบเท่าแคติคอลของพืช