Validation of a HPLC Method for the

Validation of a HPLC Method for the Determination of
Benzoic Acid and Sorbic Acid in Noodles
Jankana Burana-osot*
, Leelawan Arunsingkharat, Matsarin Naksuk, Supapan Naungnamjai
and Thanapon Saetun
Department of Pharmaceutical Chemistry, Faculty of Pharmacy, Silpakorn University,
Nakorn-pathom, 73000, Thailand.
*Author for correspondence; e-mail: [e-mail]
Received: 23 August 2012
Accepted: 26 December 2012
ABSTRACT
A simple, sensitive and specific HPLC method was validated for the simultaneous
determination of benzoic acid and sorbic acid in noodles. Sample preparation involved the
extraction with methanol and water (60:40, v/v). The separation was achieved on a GerminiC18
modified silica column (50 mm x 4.6 mm i.d., 5 μm particle diameter). The mobile phase
consisted of 0.05 M ammonium acetate (pH 4.4) and methanol in the ratio of 60:40 (% v/v)
at a flow rate of 1 mL/min and detection was performed at 234 nm using a diode-array
detector (DAD). The method was validated with respect to specificity, linearity, accuracy,
precision, limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ) and robustness. The calibration
curve for benzoic acid and sorbic acid was found to be linear in the concentration range of
5-200 μg/mL (r2
0.9998) and 1-50 μg/mL (r2
0.9998), respectively. The values of LOD and
LOQ were 0.42 and 1.14 μg/mL and 0.32 and 0.99 μg/mL for benzoic acid and sorbic acid,
respectively. The accuracy determined by spike recovery measurement was 85.61-102.04%
for benzoic acid and 83.62-102.47% for sorbic acid. The method and intermediate precision
for benzoic acid and sorbic acid were demonstrated by the relative standard deviation of
1.84% and 2.40% and 1.41% and 2.80%, respectively. The validation acceptance criteria were
met in all cases. The proposed method was successively applied for monitoring of benzoic
acid and sorbic acid in 5 different kinds of noodles.
Keywords: benzoic acid, sorbic acid, noodles, HPLC-DAD
1. INTRODUCTION
Noodles (Kuy-Teaw) are generally
consumed in Thailand as oriental cultures and
have been exported to international markets.
One of the most popular and favorite dish
worldwide is Stir-fried rice noodle (Pad-Thai).
Almost Thai noodles are made from rice;
however, some kinds are made from wheat
flour (Ramen or Ba-mee) and starches derived
from mung bean (Mung bean vermicelli or
Wun Sen). Rice noodles are presented in
various size, shape and thickness such as Rice
spaghettini (Sen lek), Rice fettuccine (Sen yai)
and Rice vermicelli (Sen mee). The main
ingredients are rice flour and water. Corn
Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2) 371
starch is also added in order to increase the
gelatinous and chewy texture of the noodles
[1]. All types of noodles are accessible fresh,
semi-dried and dried. The moisture content
of fresh and semi-dried noodles leads to
sensory deterioration during handling and
storage, producing loss of quality and limiting
shelf-life [2].
Benzoic acid (C6
H5
COOH) and sorbic
acid (C5
H7
COOH), organic acids, are
preservatives widely employed in food,
pharmaceutical and cosmetic products
(Figure 1). Benzoic acid and sorbic acid
exhibit inhibitory activity against a wide
variety of fungi, yeasts, molds and bacteria
[3]. A broader spectrum of microbicidal
activity is achieved by using a combination
of them, which inhibit several bacterial
strains better than either of them alone [4].
Under the notification of the Ministry of
Public Health of Thailand ((No.281) B.E.2547
(2004)) and announcement of the Thai Food
and Drug Administration (Thai FDA),
the maximum level (ML) of benzoic acid
and sorbic acid for noodles permitted by
law is 1,000 parts per million (ppm) or
1,000 mg/kg. According to international
standards adopted Codex Alimentarius
Commission (CAC), the ML of benzoic acid
for noodles is 1000 mg/kg while sorbic acid
is not allowed. The acceptable daily intake
(ADI) values determined by the Joint FAO/
WHO Expert Committee on Food Additives,
for benzoic acid and sorbic acid are 0-5 and
0-25 mg/kg body mass, respectively. A small
amount of benzoic acid is naturally excreted
by the human body through the normal
metabolic processes as hippuric acid or
benzoyl glucuronide. Nevertheless, there is an
evidence of health risks for consuming high
amount of benzoic acid such as asthma,
rhinitis, urticaria and anaphylactic shock
in sensitive individuals. Cases of nausea,
headache, weakness, burning and irritation
of oesophagus have been reported as well
[5]. Sorbic acid has a very low level of
mammalian toxicity. Few cases of nonimmunological
contact urticaria and pseudoallergy
have been reported [6,7]. A validated
quantification method for both acids is
subsequently needed to facilitate consumer
protection and the production of good quality
noodles [8].
Various methods are available for the
determination of benzoic and sorbic acid in
foods products including the use of
lanthanide-sensitized luminescence [9],
potentiometric [10], spectrophotometric [11],
capillary zone electrophoresis [12,13],
high performance thin layer chromatography
(HPTLC) [14], micellar electrokinetic
chromatography (MECC) [15], gas
chromatography (GC) [16-18] and high
performance liquid chromatography (HPLC)
[19-26]. The official AOAC GC method
requires derivatization reaction. Some GC and
HPLC methods use harmful organic solvent
for extraction that can cause environmental
pollution and human health risk. In addition,
almost of these methods are applied for
foods, fruits, beverages and drinks which are
Figure 1. Structure of benzoic acid and sorbic
acid.
372 Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2)
not specific to noodle matrices. Only one
previous non-validated HPLC method is
operated for noodle samples [21]. However,
the lengthy sample preparation by stream
distillation is used. Hence, the present work
was conducted in order to develop a simple
and rapid HPLC-DAD method for the
determination of benzoic acid and sorbic acid
in noodles simultaneously. A simple extraction
procedure was applied in order to extract both
preservatives and clean up samples in single
step. The established method was validated
with respect to specificity, linearity, precision,
accuracy and robustness.
2. MATERIALS AND METHODS
2.1 Chemicals and Reagents
Standards of benzoic acids and sorbic
acid with purity greater than 99% were
purchased from Sigma/Fluka (Schnelldorf,
Germany). Ammonium acetate and acetic acid
was from Univar Ajax Finechem (Australia).
The HPLC-grade methanol and acetonitrile
were purchased from Merck (Darmstadt,
Germany). Other chemicals used were of
analytical grade. High purity water was
prepared by using Milli-Q RO system
(Millipore, Bedford, MA, USA).
2.2 Noodle Samples
Five kinds of noodles; Rice spaghettini,
Rice fettuccine, Rice vermicelli, Mung bean
vermicelli and Ramen, were purchased from
6 noodle shops around Silpakorn University
in Amphur Muang, Nakorn prathom
province, Thailand. A total of 150 samples
were collected incessantly for 5 weeks and
kept at 4°C in a refrigerator.
2.3 Instrumention and Chromatographic
Conditions
The HPLC-DAD system consisted of an
Agilent 1100 series pump, an on-line solvent
degasser, an autosampler, a diode-array
detector (DAD) and a Chemstation software
version A.08.01 (Agilent Technologies, USA).
A reversed-phase column, 50 mm × 4.6 mm
packed with 5 μm, Germini-C18 modified
silica (Phenomenex, USA) and a guard
column, 20 mm × 3.9 mm packed with
5 μm, C18 were used. The column was
operated at ambient temperature. The
separation was carried out under isocratic
elution with 0.05 M ammonium acetate
buffer (pH 4.4 with acetic acid) and methanol
in the ratio of 60:40 (% v/v). The flow rate
was 1 mL/min and the wavelength was
monitored at 234 nm. The injection volume
was 10 μL. The mobile phase was filter
through 0.45 mm Chrom Tech Nylon-66
filter and degassed in an ultrasonic bath
prior to use. The samples were analyzed
using a DAD detector in scan mode covering
the range of 200-400 nm.
2.4 Preparation of Stock and Standard
Solutions
Stock solutions of benzoic acid and
sorbic acid in methanol were prepared at a
concentration of 2.5 and 1.25 mg/mL,
respectively. A series of standard mixture
solutions was prepared by the appropriate
dilution of the stock standard solutions with
methanol to concentration range of 5-200 μg/
mL for benzoic acid and 1-50 μg/mL for
sorbic acid.
2.5 Preparation of Analytical Sample
Noodle samples were cut into small
pieces and dried in a hot air oven at 50°C
for 30 min. The dried samples were then
homogenized to fine powder. One gram of
powdered sample was accurately weighed
into a 10 mL volumetric flask and added a
part of extraction solvent; methanol: water
(60:40, v/v). The mixture solution was shaken
vigorously for 1 min by vortex mixing and
made up to volume with extraction solvent.
Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2) 373
The mixture solution was then placed in
a sonicator bath for 30 min to affect
complete extraction. The extracted solution
was centrifuged for 5 min at 4,000 rpm.
An aliquot supernatant was filtered through a
0.45 μm nylon membrane filter and subjected
into HPLC column. For concentrated
samples, further dilution with mobile phase
was performed.
3. RESULTS AND DISCUSSION
3.1 Sample Preparation
Several types of extraction solvent; 100%
methanol, 100% acetonitrile, methanol: water
(60:40, (v/v)), acetonitrile: 20 mM sodium
acetate (50:50, (v/v)) and 1.0 N NaOH were
investigated. A blank noodle sample was
spiked with a standard mixture solution
containing 50 μg/mL of benzoic acid
and 10 μg/mL of sorbic acid, mixed and
prepared as previous above. The recovery
and standard deviation were calculated and
compared. The average recovery rate for
benzoic acid ranged from 66-78% using
100% methanol, 100% acetonitrile, acetonitrile:
20 mM sodium acetate (50:50, (v/v)) and
1.0 N NaOH while for sorbic acid ranged
from 89-105%. The mixture of methanol and
water (60:40, v/v) was found to be the most
suitable extracting solvent in this stud

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบวิธี HPLC สำหรับกำหนดการกรด Benzoic และกรด Sorbic ในก๋วยเตี๋ยวJankana ราษฎร์บูรณะ-osot *, Leelawan Arunsingkharat, Matsarin Naksuk, Supapan Naungnamjaiและธนภร Saetunวิชาเคมีภาควิชาเภสัชกรรม คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยศิลปากร-นครปฐม 73000 ประเทศไทย* ผู้เขียนสำหรับการโต้ตอบ อีเมล์: [e-mail]รับ: 23 2012 สิงหาคมยอมรับ: 26 2012 ธันวาคมบทคัดย่อวิธี HPLC ง่าย มีความสำคัญ และการถูกตรวจสอบในที่เกิดกำหนดกรด benzoic และกรด sorbic ในก๋วยเตี๋ยว เกี่ยวข้องกับการเตรียมตัวอย่างการสกัด ด้วยเมทานอลและน้ำ (60:40, v/v) แยกสำเร็จบน GerminiC18 การซิลิก้าแก้ไขคอลัมน์ (ประชาชน 50 มม. x 4.6 มม. ขนาดอนุภาค μm 5) ระยะเคลื่อนประกอบด้วย 0.05 M แอมโมเนีย acetate (pH 4.4) และเมทานอลในอัตราส่วนของ 60:40 (% v/v)ในขั้นตอนการ ทำอัตราของ 1 mL/min และตรวจพบที่ 234 nm โดยใช้ไดโอดอาร์เรย์เครื่องตรวจจับ (พ่อ) วิธีการถูกตรวจสอบกับ specificity แบบดอกไม้ ถูก ต้องความแม่นยำ ขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด), ขีดจำกัดของการวิเคราะห์หาปริมาณ (LOQ) และเสถียรภาพ การปรับเทียบเส้นโค้งการกรด benzoic sorbic กรดพบเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้นของ5-200 μg/mL (r2 0.9998) และ 1-50 μg/mL (r2 0.9998), ตามลำดับ ค่าของลอด และLOQ ได้ 0.42 และ 1.14 μg/mL และ$ 0.32 และ μg 0.99 mL สำหรับกรด benzoic sorbic กรดตามลำดับ ความถูกต้องตามวัดกู้ชั่วถูก 85.61 102.04%for benzoic acid and 83.62-102.47% for sorbic acid. The method and intermediate precisionfor benzoic acid and sorbic acid were demonstrated by the relative standard deviation of1.84% and 2.40% and 1.41% and 2.80%, respectively. The validation acceptance criteria weremet in all cases. The proposed method was successively applied for monitoring of benzoicacid and sorbic acid in 5 different kinds of noodles.Keywords: benzoic acid, sorbic acid, noodles, HPLC-DAD1. INTRODUCTIONNoodles (Kuy-Teaw) are generallyconsumed in Thailand as oriental cultures andhave been exported to international markets.One of the most popular and favorite dishworldwide is Stir-fried rice noodle (Pad-Thai).Almost Thai noodles are made from rice;however, some kinds are made from wheatflour (Ramen or Ba-mee) and starches derivedfrom mung bean (Mung bean vermicelli orWun Sen). Rice noodles are presented invarious size, shape and thickness such as Ricespaghettini (Sen lek), Rice fettuccine (Sen yai)and Rice vermicelli (Sen mee). The mainingredients are rice flour and water. CornChiang Mai J. Sci. 2014; 41(2) 371starch is also added in order to increase thegelatinous and chewy texture of the noodles[1]. All types of noodles are accessible fresh,semi-dried and dried. The moisture contentof fresh and semi-dried noodles leads tosensory deterioration during handling andstorage, producing loss of quality and limitingshelf-life [2].Benzoic acid (C6H5COOH) and sorbicacid (C5H7COOH), organic acids, arepreservatives widely employed in food,pharmaceutical and cosmetic products(Figure 1). Benzoic acid and sorbic acidexhibit inhibitory activity against a widevariety of fungi, yeasts, molds and bacteria[3]. A broader spectrum of microbicidalactivity is achieved by using a combinationof them, which inhibit several bacterialstrains better than either of them alone [4].Under the notification of the Ministry ofPublic Health of Thailand ((No.281) B.E.2547(2004)) and announcement of the Thai Foodand Drug Administration (Thai FDA),the maximum level (ML) of benzoic acidand sorbic acid for noodles permitted bylaw is 1,000 parts per million (ppm) or1,000 mg/kg. According to internationalstandards adopted Codex AlimentariusCommission (CAC), the ML of benzoic acidfor noodles is 1000 mg/kg while sorbic acidis not allowed. The acceptable daily intake(ADI) values determined by the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives,for benzoic acid and sorbic acid are 0-5 and0-25 mg/kg body mass, respectively. A smallamount of benzoic acid is naturally excretedby the human body through the normalmetabolic processes as hippuric acid orbenzoyl glucuronide. Nevertheless, there is anevidence of health risks for consuming highamount of benzoic acid such as asthma,rhinitis, urticaria and anaphylactic shockin sensitive individuals. Cases of nausea,headache, weakness, burning and irritation
of oesophagus have been reported as well
[5]. Sorbic acid has a very low level of
mammalian toxicity. Few cases of nonimmunological
contact urticaria and pseudoallergy
have been reported [6,7]. A validated
quantification method for both acids is
subsequently needed to facilitate consumer
protection and the production of good quality
noodles [8].
Various methods are available for the
determination of benzoic and sorbic acid in
foods products including the use of
lanthanide-sensitized luminescence [9],
potentiometric [10], spectrophotometric [11],
capillary zone electrophoresis [12,13],
high performance thin layer chromatography
(HPTLC) [14], micellar electrokinetic
chromatography (MECC) [15], gas
chromatography (GC) [16-18] and high
performance liquid chromatography (HPLC)
[19-26]. The official AOAC GC method
requires derivatization reaction. Some GC and
HPLC methods use harmful organic solvent
for extraction that can cause environmental
pollution and human health risk. In addition,
almost of these methods are applied for
foods, fruits, beverages and drinks which are
Figure 1. Structure of benzoic acid and sorbic
acid.
372 Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2)
not specific to noodle matrices. Only one
previous non-validated HPLC method is
operated for noodle samples [21]. However,
the lengthy sample preparation by stream
distillation is used. Hence, the present work
was conducted in order to develop a simple
and rapid HPLC-DAD method for the
determination of benzoic acid and sorbic acid
in noodles simultaneously. A simple extraction
procedure was applied in order to extract both
preservatives and clean up samples in single
step. The established method was validated
with respect to specificity, linearity, precision,
accuracy and robustness.
2. MATERIALS AND METHODS
2.1 Chemicals and Reagents
Standards of benzoic acids and sorbic
acid with purity greater than 99% were
purchased from Sigma/Fluka (Schnelldorf,
Germany). Ammonium acetate and acetic acid
was from Univar Ajax Finechem (Australia).
The HPLC-grade methanol and acetonitrile
were purchased from Merck (Darmstadt,
Germany). Other chemicals used were of
analytical grade. High purity water was
prepared by using Milli-Q RO system
(Millipore, Bedford, MA, USA).
2.2 Noodle Samples
Five kinds of noodles; Rice spaghettini,
Rice fettuccine, Rice vermicelli, Mung bean
vermicelli and Ramen, were purchased from
6 noodle shops around Silpakorn University
in Amphur Muang, Nakorn prathom
province, Thailand. A total of 150 samples
were collected incessantly for 5 weeks and
kept at 4°C in a refrigerator.
2.3 Instrumention and Chromatographic
Conditions
The HPLC-DAD system consisted of an
Agilent 1100 series pump, an on-line solvent
degasser, an autosampler, a diode-array
detector (DAD) and a Chemstation software
version A.08.01 (Agilent Technologies, USA).
A reversed-phase column, 50 mm × 4.6 mm
packed with 5 μm, Germini-C18 modified
silica (Phenomenex, USA) and a guard
column, 20 mm × 3.9 mm packed with
5 μm, C18 were used. The column was
operated at ambient temperature. The
separation was carried out under isocratic
elution with 0.05 M ammonium acetate
buffer (pH 4.4 with acetic acid) and methanol
in the ratio of 60:40 (% v/v). The flow rate
was 1 mL/min and the wavelength was
monitored at 234 nm. The injection volume
was 10 μL. The mobile phase was filter
through 0.45 mm Chrom Tech Nylon-66
filter and degassed in an ultrasonic bath
prior to use. The samples were analyzed
using a DAD detector in scan mode covering
the range of 200-400 nm.
2.4 Preparation of Stock and Standard
Solutions
Stock solutions of benzoic acid and
sorbic acid in methanol were prepared at a
concentration of 2.5 and 1.25 mg/mL,
respectively. A series of standard mixture
solutions was prepared by the appropriate
dilution of the stock standard solutions with
methanol to concentration range of 5-200 μg/
mL for benzoic acid and 1-50 μg/mL for
sorbic acid.
2.5 Preparation of Analytical Sample
Noodle samples were cut into small
pieces and dried in a hot air oven at 50°C
for 30 min. The dried samples were then
homogenized to fine powder. One gram of
powdered sample was accurately weighed
into a 10 mL volumetric flask and added a
part of extraction solvent; methanol: water
(60:40, v/v). The mixture solution was shaken
vigorously for 1 min by vortex mixing and
made up to volume with extraction solvent.
Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2) 373
The mixture solution was then placed in
a sonicator bath for 30 min to affect
complete extraction. The extracted solution
was centrifuged for 5 min at 4,000 rpm.
An aliquot supernatant was filtered through a
0.45 μm nylon membrane filter and subjected
into HPLC column. For concentrated
samples, further dilution with mobile phase
was performed.
3. RESULTS AND DISCUSSION
3.1 Sample Preparation
Several types of extraction solvent; 100%
methanol, 100% acetonitrile, methanol: water
(60:40, (v/v)), acetonitrile: 20 mM sodium
acetate (50:50, (v/v)) and 1.0 N NaOH were
investigated. A blank noodle sample was
spiked with a standard mixture solution
containing 50 μg/mL of benzoic acid
and 10 μg/mL of sorbic acid, mixed and
prepared as previous above. The recovery
and standard deviation were calculated and
compared. The average recovery rate for
benzoic acid ranged from 66-78% using
100% methanol, 100% acetonitrile, acetonitrile:
20 mM sodium acetate (50:50, (v/v)) and
1.0 N NaOH while for sorbic acid ranged
from 89-105%. The mixture of methanol and
water (60:40, v/v) was found to be the most
suitable extracting solvent in this stud

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบของวิธี HPLC
สำหรับการกำหนดเบนโซอิกและกรดซอร์บิคแอซิดในก๋วยเตี๋ยว
Jankana บูรณะ-โอสถ
*, Leelawan Arunsingkharat, Matsarin Naksuk, สุภา Naungnamjai
และธนพล Saetun
ภาควิชาเภสัชเคมีคณะเภสัชศาสตร์มหาวิทยาลัยศิลปากรนครนครปฐม, 73000 ประเทศไทย. * สำหรับผู้เขียนจดหมาย; E-mail: [e-mail] ที่ได้รับ: 23 สิงหาคม 2012 ได้รับการยอมรับ: 26 ธันวาคม 2012 บทคัดย่อง่ายวิธี HPLC เฉพาะที่สำคัญและถูกตรวจสอบพร้อมกันสำหรับการตัดสินใจของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกในก๋วยเตี๋ยว การเตรียมตัวอย่างที่เกี่ยวข้องกับการสกัดด้วยเมทานอลและน้ำ (60:40, v / v) แยกก็ประสบความสำเร็จใน GerminiC18 ปรับเปลี่ยนคอลัมน์ซิลิกา (50 mm x 4.6 มมรหัส 5 เส้นผ่าศูนย์กลางอนุภาคไมครอน) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตท (pH 4.4) และเมทานอลในอัตราส่วน 60:40 (% ต่อ v / v) ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาทีและการตรวจสอบได้รับการดำเนินการที่ 234 นาโนเมตรโดยใช้ไดโอดอาร์เรย์ตรวจจับ(DAD) วิธีการที่ถูกตรวจสอบด้วยความเคารพต่อความจำเพาะเชิงเส้นความถูกต้องแม่นยำของการตรวจสอบการ จำกัด (LOD) ขีด จำกัด ของปริมาณ (LOQ) และความทนทาน สอบเทียบโค้งสำหรับกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกพบว่าเป็นเชิงเส้นในช่วงความเข้มข้นของ5-200 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (r2 0.9998) และ 1-50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (r2 0.9998) ตามลำดับ ค่า LOD และLOQ เป็น 0.42 และ 1.14 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ 0.32 และ 0.99 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสำหรับกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิค, ตามลำดับ ความถูกต้องถูกกำหนดโดยการวัดการกู้คืนเข็มเป็น 85.61-102.04% สำหรับกรดเบนโซอิกและ 83.62-102.47% สำหรับกรดซอร์บิ วิธีการและความแม่นยำกลางสำหรับกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิคได้รับการแสดงให้เห็นถึงค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ของ1.84% และ 2.40% และ 1.41% และ 2.80% ตามลำดับ เกณฑ์การยอมรับการตรวจสอบที่ถูกพบในทุกกรณี วิธีการที่นำเสนอถูกนำมาใช้อย่างต่อเนื่องสำหรับการตรวจสอบของเบนโซอิกกรดซอร์บิกและกรดใน 5 ชนิดที่แตกต่างกันของบะหมี่. คำสำคัญ: กรดเบนโซอิกกรดซอร์บิก, บะหมี่, HPLC-DAD 1 บทนำก๋วยเตี๋ยว (Kuy-เที่ยว) โดยทั่วไปจะมีการบริโภคในประเทศไทยเป็นวัฒนธรรมตะวันออกและได้รับการส่งออกไปยังตลาดต่างประเทศ. หนึ่งในจานที่นิยมมากที่สุดและชื่นชอบทั่วโลกผัดเส้นก๋วยเตี๋ยว (ผัดไทย). ก๋วยเตี๋ยวไทยเกือบจะทำจาก ข้าวแต่บางชนิดที่ทำจากข้าวสาลีแป้ง (ราเมนหรือ Ba-หมี่) และแป้งที่ได้มาจากถั่วเขียว(วุ้นเส้นถั่วเขียวหรือWun Sen) ก๋วยเตี๋ยวถูกนำเสนอในหลายขนาดรูปร่างและความหนาเช่นข้าวspaghettini (Sen เล็ก) ข้าว Fettuccine (Sen ใหญ่) และข้าววุ้นเส้น (Sen หมี่) หลักส่วนผสมแป้งข้าวเจ้าและน้ำ ข้าวโพดเชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) 371 แป้งยังมีการเพิ่มเพื่อเพิ่มพื้นผิวและเมือกเหนียวนุ่มของเส้นบะหมี่[1] ทุกประเภทก๋วยเตี๋ยวสามารถเข้าถึงสดกึ่งแห้งและแห้ง ความชื้นของบะหมี่สดและกึ่งแห้งนำไปสู่การเสื่อมสภาพทางประสาทสัมผัสในระหว่างการจัดการและการจัดเก็บข้อมูลการผลิตการสูญเสียคุณภาพและการจำกัดอายุการเก็บรักษา [2]. กรดเบนโซอิค (C6 H5 COOH) และซอร์บิคกรด(C5 H7 COOH) กรดอินทรีย์ เป็นสารกันบูดจ้างงานกันอย่างแพร่หลายในอาหารยาและผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง(รูปที่ 1) กรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกแสดงฤทธิ์ยับยั้งกว้างหลากหลายของเชื้อรายีสต์เชื้อราและแบคทีเรีย[3] สเปกตรัมที่กว้างขึ้นของ microbicidal กิจกรรมจะประสบความสำเร็จโดยใช้การรวมกันของพวกเขาซึ่งยับยั้งแบคทีเรียหลายสายพันธุ์ที่ดีกว่าทั้งของพวกเขาเพียงอย่างเดียว[4]. ภายใต้การประกาศของกระทรวงสาธารณสุขแห่งประเทศไทย ((ฉบับที่ 281) พ.ศ. 2547 (2004 )) และการประกาศของอาหารและยา(FDA ไทย) ในระดับสูงสุด (ML) ของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิก๋วยเตี๋ยวได้รับอนุญาตตามกฎหมาย1,000 ส่วนในล้านส่วน (ppm) หรือ1,000 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ตามที่ต่างประเทศมาตรฐาน Codex Alimentarius นำมาใช้คณะกรรมการ(CAC) ที่ ML ของกรดเบนโซอิกก๋วยเตี๋ยวเป็น1,000 มก. / กก. ในขณะที่กรดซอร์บิไม่ได้รับอนุญาต บริโภคประจำวันได้รับการยอมรับ(ADI) ค่าที่กำหนดโดยร่วม FAO / WHO คณะกรรมการผู้เชี่ยวชาญในวัตถุเจือปนอาหาร, สำหรับกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกเป็น 0-5 และ0-25 มก. / กก. มวลกายตามลำดับ ขนาดเล็กปริมาณของกรดเบนโซอิกถูกขับออกมาตามธรรมชาติโดยร่างกายมนุษย์ผ่านปกติกระบวนการเผาผลาญอาหารเป็นกรดหรือhippuric glucuronide ออกไซด์ อย่างไรก็ตามมีหลักฐานของความเสี่ยงต่อสุขภาพสำหรับการบริโภคสูงปริมาณของกรดเบนโซอิกเช่นโรคหอบหืด, โรคจมูกอักเสบลมพิษและช็อกในบุคคลที่มีความละเอียดอ่อน กรณีของการคลื่นไส้, ปวดหัว, อ่อนแอ, การเผาไหม้และการระคายเคืองของหลอดอาหารได้รับรายงานเช่นกัน[5] กรดซอร์บิมีระดับที่ต่ำมากของความเป็นพิษเลี้ยงลูกด้วยนม บางกรณีของ nonimmunological ผื่นลมพิษและ pseudoallergy ได้รับรายงาน [6,7] ตรวจสอบวิธีการหาปริมาณกรดทั้งสองจำเป็นต่อมาเพื่ออำนวยความสะดวกผู้บริโภคการป้องกันและการผลิตที่มีคุณภาพที่ดีก๋วยเตี๋ยว[8]. วิธีการต่างๆที่มีอยู่สำหรับการตัดสินใจของเบนโซอิกและกรดซอร์บิกในผลิตภัณฑ์อาหารรวมถึงการใช้แสงเรืองlanthanide ไว [9 ] potentiometric [10], สเปก [11], อิเลคโซนฝอย [12,13] ที่มีประสิทธิภาพสูงชั้นบางโค(HPTLC) [14], micellar electrokinetic โค (MECC) [15], แก๊สโครมาโต(GC) [16 -18] สูงของเหลวchromatography ประสิทธิภาพ (HPLC) [19-26] วิธี AOAC GC อย่างเป็นทางการต้องมีปฏิกิริยาอนุพันธ์ บาง GC และวิธีHPLC ใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ที่เป็นอันตรายในการสกัดที่สามารถทำให้เกิดสิ่งแวดล้อมมลพิษและความเสี่ยงต่อสุขภาพของมนุษย์ นอกจากนี้เกือบวิธีการเหล่านี้จะถูกนำมาใช้สำหรับอาหาร, ผลไม้, เครื่องดื่มและเครื่องดื่มที่มีรูปที่1 โครงสร้างของกรดเบนโซอิกและซอร์บิคกรด. 372 เชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) ไม่เฉพาะการฝึกอบรมก๋วยเตี๋ยว เพียงหนึ่งวิธี HPLC ที่ไม่ได้ผ่านการตรวจสอบก่อนหน้านี้จะดำเนินการสำหรับตัวอย่างก๋วยเตี๋ยว[21] อย่างไรก็ตามการจัดทำตัวอย่างที่มีความยาวโดยกระแสการกลั่นจะใช้ ดังนั้นการทำงานในปัจจุบันได้ดำเนินการเพื่อที่จะพัฒนาง่ายวิธีHPLC-DAD และรวดเร็วสำหรับการตัดสินใจของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกในก๋วยเตี๋ยวพร้อมกัน การสกัดง่ายขั้นตอนที่ถูกนำมาใช้ในการสั่งซื้อที่จะดึงทั้งสารกันบูดและทำความสะอาดตัวอย่างเดียวในขั้นตอน วิธีการจัดตั้งถูกตรวจสอบด้วยความเคารพต่อความจำเพาะเชิงเส้นที่มีความแม่นยำ, ความถูกต้องและความทนทาน. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 สารเคมีและการวิเคราะห์สารมาตรฐานกรดเบนโซอิกของซอร์บิกและกรดที่มีความบริสุทธิ์มากกว่า99% ได้รับการสั่งซื้อจากซิกม่า/ Fluka (Schnelldorf, เยอรมนี) แอมโมเนียมอะซิเตทและกรดอะซิติกมาจากอาแจ็กซ์ Univar Finechem (ออสเตรเลีย). เมทิลแอลกอฮอล์ HPLC เกรดและ acetonitrile ที่ซื้อมาจากเมอร์ค (ดาร์มสตัด, เยอรมนี) สารเคมีอื่น ๆ ที่ใช้เป็นของชั้นประถมศึกษาวิเคราะห์ น้ำมีความบริสุทธิ์สูงได้รับการจัดทำขึ้นโดยใช้ระบบ Milli-Q RO (คฟอร์ด, MA, USA). 2.2 ตัวอย่างบะหมี่ห้าชนิดของก๋วยเตี๋ยว; spaghettini ข้าวFettuccine ข้าวข้าววุ้นเส้นถั่วเขียววุ้นเส้นและราเมนที่ถูกซื้อมาจาก6 ร้านค้าก๋วยเตี๋ยวรอบมหาวิทยาลัยศิลปากรในอำเภอเมืองนครปฐมจังหวัดประเทศไทย ทั้งหมด 150 ตัวอย่างที่ถูกเก็บรวบรวมอย่างไม่หยุดหย่อนเป็นเวลา5 สัปดาห์และเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสในตู้เย็น. 2.3 Instrumention และโครมาสภาพระบบHPLC-DAD ประกอบด้วยของAgilent 1100 ปั๊มชุดตัวทำละลายในบรรทัดdegasser, ฉีดตัวอย่างอัตโนมัติา, ไดโอดอาร์เรย์เครื่องตรวจจับ(DAD) และซอฟแวร์ ChemStation รุ่น A.08.01 (Agilent Technologies, USA). คอลัมน์เฟสกลับ 50 มม× 4.6 มมเต็มไปด้วย5 ไมครอน Germini-C18 ปรับเปลี่ยนซิลิกา(Phenomenex สหรัฐอเมริกา) และ ยามคอลัมน์20 มิลลิเมตร× 3.9 มมเต็มไปด้วย5 ไมครอน C18 ถูกนำมาใช้ คอลัมน์ที่ได้รับการดำเนินการที่อุณหภูมิห้อง แยกได้ดำเนินการภายใต้ isocratic ชะ 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตตบัฟเฟอร์(pH 4.4 ที่มีกรดอะซิติก) และเมทานอลในอัตราส่วน60:40 (% ต่อ v / v) อัตราการไหล1 มิลลิลิตร / นาทีและความยาวคลื่นได้รับการตรวจสอบที่234 นาโนเมตร ปริมาณการฉีด10 ไมโครลิตร ขั้นตอนถือเป็นตัวกรองผ่าน 0.45 มม Chrom เทคไนล่อน-66 กรองและ degassed ในห้องอาบน้ำล้ำก่อนที่จะใช้ กลุ่มตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้เครื่องตรวจจับ DAD ในโหมดการสแกนครอบคลุมช่วง200-400 นาโนเมตร. the 2.4 การจัดทำหุ้นและมาตรฐานโซลูชั่นโซลูชั่นตลาดหลักทรัพย์แห่งกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกในเมทานอลได้จัดทำที่มีความเข้มข้นของ2.5 และ 1.25 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับ ชุดของส่วนผสมมาตรฐานการแก้ปัญหาที่ถูกจัดทำขึ้นโดยความเหมาะสมการลดสัดส่วนของหุ้นโซลูชั่นมาตรฐานที่มีเมทานอลในช่วงความเข้มข้นของ5-200 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสำหรับกรดเบนโซอิกและ 1-50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสำหรับกรดซอร์บิก. 2.5 การจัดทำตัวอย่างการวิเคราะห์ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวถูกตัดเป็นขนาดเล็กชิ้นและแห้งในเตาอบลมร้อนที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา30 นาที กลุ่มตัวอย่างแห้งจากนั้นก็หดหายไปผงละเอียด หนึ่งกรัมตัวอย่างผงถูกชั่งน้ำหนักอย่างถูกต้องลงไปในขวด10 มิลลิลิตรปริมาตรและเพิ่มส่วนหนึ่งของตัวทำละลายสกัด; เมทานอล: น้ำ(60:40, v / v) วิธีการแก้ปัญหาส่วนผสมที่ถูกเขย่าอย่างจริงจังเป็นเวลา 1 นาทีโดยการผสมน้ำวนและสร้างขึ้นมาจากปริมาณที่มีตัวทำละลายสกัด. เชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) 373 การแก้ปัญหาส่วนผสมที่ถูกวางไว้ในห้องอาบน้ำคลื่นเสียงเป็นเวลา 30 นาทีจะมีผลต่อการสกัดสมบูรณ์ วิธีการแก้ปัญหาที่สกัดได้ปั่นเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4,000 รอบต่อนาที. ใส aliquot ถูกกรองผ่านตัวกรองเมมเบรนไนลอน0.45 ไมโครเมตรและยัดเยียดลงในคอลัมน์HPLC สำหรับความเข้มข้นตัวอย่างเจือจางต่อกับเฟสเคลื่อนที่ได้ดำเนินการ. 3 และการอภิปรายผล3.1 การเตรียมสารตัวอย่างหลายชนิดของตัวทำละลายสกัด; 100% เมทานอล acetonitrile 100% เมทานอล: น้ำ(60:40 (v / v)) acetonitrile: 20 มิลลิโซเดียมอะซิเตท(50:50 (v / v)) และ 1.0 ไม่มี NaOH ถูกตรวจสอบ ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวว่างเปล่าถูกแทงด้วยโซลูชั่นส่วนผสมมาตรฐานมี50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรของกรดเบนโซอิกและ10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรของกรดซอร์บิผสมและเตรียมเป็นก่อนหน้าดังกล่าวข้างต้น การฟื้นตัวของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานจะถูกคำนวณและเปรียบเทียบ อัตราเฉลี่ยสำหรับการกู้คืนกรดเบนโซอิกอยู่ในช่วง 66-78% โดยใช้เมทานอล100% acetonitrile 100% acetonitrile: 20 มิลลิโซเดียมอะซิเตท (50:50 (v / v)) และ1.0 ไม่มี NaOH ในขณะที่สำหรับกรดซอร์บิตั้งแต่จาก89 -105% ส่วนผสมของเมทานอลและน้ำ (60:40, v / v) พบว่าส่วนใหญ่ที่เหมาะสมในการสกัดด้วยตัวทำละลายสตั๊ดนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบของ HPLC วิธีการหาปริมาณกรดเบนโซอิก และกรดซอร์บิคใน


ก๋วยเตี๋ยวจรรบูรณะโอสถ , arunsingkharat leelawan matsarin เลนะนันท์ , สุภาพรรณ , ธนภร เปรี้ยวนิ่มและ naungnamjai

ภาควิชาเภสัชเคมี คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยศิลปากร ,
นครปฐม 73000 ประเทศไทย .
* เขียนอีเมลสำหรับการติดต่อ ; : จรร @ ซู โดยได้รับ 23 สิงหาคม 2012

:ได้รับการยอมรับ : 26 ธันวาคม 2012

เป็นนามธรรม ง่าย ไว และเฉพาะวิธี HPLC ได้ตรวจสอบกำหนดพร้อมกัน
ของกรดเบนโซอิก กรดซอร์บิคในบะหมี่ การเตรียมสารตัวอย่างที่สกัดด้วยเมทานอลและน้ำ
( 60 : 40 , v / v ) การทำใน germinic18
แก้ไขคอลัมน์ซิลิกา ( 50 มม. x 4.6 มม. บัตร 5 μเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางอนุภาค )
เฟสเคลื่อนที่จำนวน 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตท ( pH 4.4 ) และเมทานอล ในอัตราส่วน 60 : 40 ( % v / v )
ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาที และการกระทำที่ 234 nm ใช้ไดโอดเรย์
ตรวจจับ ( พ่อ ) วิธีตรวจสอบตามวิธีเส้นตรง ความถูกต้อง ความแม่นยำ ขีดจำกัดของการตรวจหา (
, LOD ) , ขีด จำกัด ของเซลล์ ( loq ) และความทนทาน . สอบเทียบ
กรดเบนโซอิก และกรดซอร์บิคโค้ง พบเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้น
5-200 μ g / ml ( R2
0.9998 ) และ 10-30 μ g / ml ( R2
0.9998 ) ตามลำดับ ค่า LOD และ
loq เท่ากับ 0.42 และ 1.14 μ g / ml และ 0.32 และ 0.99 μ g / ml กรดเบนโซอิก และกรดซอร์บิค ,
) ความถูกต้องกำหนดโดยการวัดการกู้คืนชั่วคราวคือ 85.61-102.04 %
สำหรับกรดเบนโซอิก 83.62-102 .47 % กรดซอร์บิค . วิธีการและกรดเบนโซอิก
แม่นยำกลาง และกรดซอร์บิคถูกแสดงโดยค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ของ
1.84 % และ 2.40 % และ 1.41 % และ 2.80 บาท การตรวจสอบการยอมรับเท่ากับเกณฑ์
พบกันในทุกกรณี วิธีการคือใช้กรดเบนโซอิก ติดตามอย่างต่อเนื่อง และกรดซอร์บิค
5 ชนิดที่แตกต่างกันของ
คำสำคัญ : ก๋วยเตี๋ยวกรดเบนโซอิก , กรดซอร์บิค ก๋วยเตี๋ยว hplc-dad
1 ก๋วยเตี๋ยวแนะนำ
( คุยเที่ยว ) โดยทั่วไปจะใช้ในไทย

เป็นวัฒนธรรมตะวันออกและได้ถูกส่งออกไปยังตลาดต่างประเทศ
หนึ่งของความนิยมมากที่สุดและที่ชื่นชอบอาหาร
ทั่วโลกคือผัดหมี่ข้าว ( ผัดไทย ) .
เกือบก๋วยเตี๋ยวไทยที่ทำจากข้าว ;
แต่บางชนิดที่ทำจากข้าวสาลี
แป้ง ( ราเมงหรือบาหมี่ ) และแป้งจากถั่วเขียว ( ได้มา

วุ้นเส้นถั่วเขียวหรือวุ้นเส้น ) ก๋วยเตี๋ยวนำเสนอ
ขนาดต่างๆรูปร่างและความหนา เช่น ข้าว
spaghettini ( เส้นเล็ก ) ข้าว เฟตตูชินี่ ( เส้นใหญ่ และเส้นหมี่ )
( Sen Mee ) ส่วนผสมหลัก
แป้งข้าวเจ้าและน้ำ ข้าวโพด
เชียงใหม่ J . Sci . 2014 ; 41 ( 2 ) 371
แป้งยังเพิ่มเพื่อเพิ่ม