Multiple fluorescence labeling and

Multiple fluorescence labeling and CLSM
observation
Following existing literatures (Chen et al., 2006, 2007; Yu et al.,
2011), Concanavalin A (ConA), Calcofluor white (CW), Fluorescein
isothiocyanate (FITC) and SYTO 63 were used to label
the a- and b-D-glucopyranose polysaccharides, proteins and
total cells, respectively, in the biofouling layer in this study.
The fouled FO membranes were taken out from the OMBR
systems at predetermined time (on days 3, 8 and 25), and then
three pieces with size of about 0.5  0.5 cm were randomly cut
from each fouled FO membrane. As shown in Fig. 2, the fouled
membrane samples were first stained with SYTO 63 (20 mM),
and then the FITC solution (10 g L1) was dripped onto the
samples after 1 M sodium bicarbonate (NaHCO3) buffer was
applied for keeping the amine group in a non-protonated
form. Subsequently, the ConA (0.25 g L1) and CW (0.3 g L1)
solutions were added to the samples, respectively. After each
stage of the labeling process, the samples were incubated for
30 min at room temperature in the dark, and then were
washed twice with phosphate buffered saline (PBS) solution to
remove the extra probes.
The stained FO membrane samples were characterized by
CLSM (ZEISS LSM 710, ZEISS, Germany). The CLSM images
were generated in multi track mode, and the excitation and
emission wavelengths of each dye are listed in Table 1. Threedimensional
reconstructions were obtained with ZEISS
confocal software (ZEN 2012), and the images were analyzed
by the softwares of PHLIP (Version 0.7) and Image J (NIH,
Bethesda, MD, U.S.A.) to calculate the quantitative parameters
such as biovolume, mean thickness and area coverage

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ติดฉลาก fluorescence และ CLSM หลายสังเกตดูอาการต่อไปนี้อยู่ literatures (Chen et al., 2006, 2007 Yu et al.,2011), Concanavalin A (ConA), Calcofluor สีขาว (ตามน้ำหนักจริง), Fluoresceinisothiocyanate (FITC) และ SYTO 63 ใช้กับป้ายชื่อa - และ b-D-glucopyranose polysaccharides โปรตีน และเซลล์ทั้งหมด ตามลำดับ ในชั้น biofouling ในการศึกษาสารโฟ fouled ถูกนำออกมาจาก OMBRระบบในเวลาที่กำหนดไว้ (ในวันที่ 3, 8 และ 25), และจากนั้นชิ้นสาม มีขนาดประมาณ 0.5 0.5 ซม.ถูกตัดสุ่มจาก fouled โฟเมมเบรน ตามที่แสดงใน Fig. 2 ที่ fouledตัวอย่างเยื่อมีสีครั้งแรกกับ SYTO 63 (20 mM),แล้ว โซลูชัน FITC (10 g L 1) ถูก dripped ไปมีตัวอย่างหลังจากบัฟเฟอร์โซเดียมไบคาร์บอเนต (NaHCO3) 1 Mใช้สำหรับรักษากลุ่ม amine ในไม่ใช่-protonatedแบบฟอร์มการ ในเวลาต่อมา ConA (0.25 g L 1) และตามน้ำหนักจริง (0.3 g L 1)โซลูชั่นเพิ่มเข้าไปตัวอย่าง ตามลำดับ หลังจากแต่ละขั้นตอนของการติดฉลากกระบวนการ ตัวอย่างการถูก incubated สำหรับ30 นาทีที่อุณหภูมิห้องในมืด และจากนั้นล้างสองครั้ง ด้วยฟอสเฟต buffered saline (PBS) แก้ไขเอาคลิปปากตะเข้พิเศษมีลักษณะตัวอย่างเยื่อโฟทิ้งคราบCLSM (ZEISS ทต้า 710, ZEISS เยอรมนี) ภาพ CLSMสร้างขึ้นในโหมดติดตามหลาย และการในการกระตุ้น และความยาวคลื่นที่ปล่อยก๊าซของแต่ละสีจะแสดงในตารางที่ 1 Threedimensionalศึกษาที่ได้รับกับ ZEISSวิเคราะห์ซอฟต์แวร์ confocal (2012 เซน), และรูปภาพโดยซอฟต์แวร์ PHLIP (เวอร์ชัน 0.7) และภาพ J (NIHเบเทสดา MD สหรัฐอเมริกา) การคำนวณพารามิเตอร์เชิงปริมาณเช่น biovolume หมายถึง ความครอบคลุมความหนาและพื้นที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การติดฉลากสารเรืองแสงที่หลากหลายและ CLSM
สังเกตดังต่อไปนี้วรรณกรรมที่มีอยู่ (Chen et al, 2006, 2007;.. ยูเอตอัล 2011) Concanavalin A (CONA) Calcofluor สีขาว (CW) Fluorescein isothiocyanate (FITC) และ SYTO 63 ถูกนำมาใช้ ป้ายa- และ polysaccharides BD-glucopyranose โปรตีนและเซลล์รวมตามลำดับในชั้นbiofouling ในการศึกษานี้. เปื้อน FO เยื่อหุ้มถูกนำออกมาจาก OMBR ระบบเวลาที่กำหนดไว้ (ในวันที่ 3, 8 และ 25) และ แล้วสามชิ้นมีขนาดประมาณ0.5? 0.5 ซม. ถูกตัดสุ่มจากกันเปื้อนเมมเบรน FO ดังแสดงในรูป 2, ชนกลุ่มตัวอย่างเมมเบรนมีการย้อมครั้งแรกกับSYTO 63 (20 มิลลิเมตร) แล้วการแก้ปัญหา FITC (10 กรัม L? 1) ถูกหยดลงบนตัวอย่างหลังวันที่1 M โซเดียมไบคาร์บอเนต (NaHCO3) บัฟเฟอร์ถูกนำมาใช้ในการรักษากลุ่มเอในที่ไม่ใช่โปรโตเนตรูปแบบ ต่อจากนั้น CONA (0.25 กรัม L? 1) และ CW (0.3 กรัม L? 1) การแก้ปัญหาที่ถูกเพิ่มเข้าไปในกลุ่มตัวอย่างตามลำดับ หลังจากที่แต่ละขั้นตอนของกระบวนการการติดฉลากตัวอย่างที่ถูกบ่มเป็นเวลา30 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืดและจากนั้นได้รับการล้างครั้งที่สองที่มีฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ(PBS) วิธีการลบโพรบพิเศษ. เปื้อน FO ตัวอย่างเมมเบรนมีลักษณะCLSM (ZEISS LSM 710 ZEISS, เยอรมนี) ภาพ CLSM ถูกสร้างขึ้นในโหมดมัลติแทร็คและการกระตุ้นและความยาวคลื่นที่ปล่อยก๊าซเรือนกระจกของแต่ละสีย้อมมีการระบุไว้ในตารางที่ 1 Threedimensional ไทปันได้รับกับ ZEISS ซอฟต์แวร์ confocal (ZEN 2012) และภาพที่ถูกนำมาวิเคราะห์โดยโปรแกรมของPHLIP นี้ (รุ่น 0.7) และภาพ J (NIH, Bethesda, MD, USA) ในการคำนวณค่าพารามิเตอร์เชิงปริมาณเช่นbiovolume หมายถึงความหนาและพื้นที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลายเรือง การติดฉลากและ

สังเกต clsm ตามวรรณกรรมที่มีอยู่ ( Chen et al . , 2006 , 2007 ; ยู et al . ,
( 2011 ) , ถูก cona ) , แคลโคฟลู ร์สีขาว ( CW ) , ี่
ไอโซไทโอไซยาเนต ( fitc ) และ syto 63 ใช้ป้าย
- b-d-glucopyranose พอลิแซ็กคาไรด์และโปรตีน
รวมและเซลล์ ตามลำดับ ใน biofouling
ชั้นในการศึกษานี้และสิ่งสกปรกสำหรับเมมเบรนถูกนำออกมาจาก ombr
ระบบที่กำหนดไว้ล่วงหน้า ( ในวันที่ 3 , 8 และ 25 ) แล้ว
3 ชิ้น มีขนาดประมาณ 0.5  0.5 เซนติเมตร ตัด
สุ่มจากแต่ละสิ่งสกปรกสำหรับเมมเบรน ดังแสดงในรูปที่ 2 , สิ่งสกปรก
เยื่อจำนวนแรกที่เปื้อน syto 63 ( 20 มม. ) ,
แล้ว fitc โซลูชั่น 10 กรัมต่อลิตร  1 ) คือหยดบน
ตัวอย่างหลังจากที่โซเดียมไบคาร์บอเนต ( NaHCO3 ) บัฟเฟอร์ให้ 1 m
ประยุกต์เพื่อรักษากลุ่มเอมีนในไม่ protonated
แบบฟอร์ม โดย cona ( 0.25 กรัม ผม  1 ) และ CW ( 0.3 g l  1 )
โซลูชั่นเพิ่มตัวอย่าง ตามลำดับ หลังจากแต่ละขั้นตอนของการติดฉลาก
กระบวนการจำนวน 20% โดย
30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง ในที่มืด แล้วมี
ล้างสองครั้งกับฟอสเฟตในสารละลายเกลือ ( PBS )


เอาฟิวส์ที่พิเศษ สำหรับเยื่อเปื้อนจำนวนลักษณะ
clsm ( Zeiss และ 710 Zeiss , เยอรมัน ) ภาพที่ clsm
ถูกสร้างขึ้นในโหมดติดตามหลาย และกระตุ้นการปล่อยความยาวคลื่นและ
ของแต่ละสีอยู่ในตารางที่ 1 เกี่ยวกับการสร้างใหม่ที่ได้รับกับ Zeiss

ด้วยซอฟต์แวร์ของเซน ( 2012 )และภาพที่นำมาวิเคราะห์
โดยซอฟต์แวร์ของ phlip ( รุ่น 7 ) และภาพ ( NIH
J , Bethesda , MD , USA ) เพื่อคำนวณหาค่าปริมาณ
เช่น biovolume ค่าเฉลี่ยความหนาและพื้นที่