2.7. Sample analysis by NanoCerac
Tea samples were assembled in the first column of three
96-well plates, allowing twenty-four samples to be analyzed at
once. Bags 1–3 of one brew for eight different teas at a time were
analyzed side by side in this manner. All samples were diluted 11
times (3:1 ratio, sample:water), using a multichannel pipette, leaving
the last of 12 columns filled with water only, as a blank. Using
another multichannel pipette, 2.5 lL of all samples were pipetted
in triplicate, directly onto the 10 cm ceria sensors. Two columns
of six samples, pipetted in triplicate, were arranged on each sensing
disk. Sample spots were circled using the large end of a pipette
tip and a stamp pad. All sensors were scanned into a computer
using default settings (200 dpi), saved as a .bmp image, and
uploaded to a shared Dropbox folder, which was accessed by a
MatLab user in another location. Images were then analyzed for
antioxidant capacity with reference to a gallic acid standard.
A unique MatLab algorithm was created that facilitated analysis
of the ceria sensors. The program identifies stamped black circles
on the page, and takes an average of RGB color intensities in
the center area of the circle. The program then creates calibration
curves using blue color intensity (BCI) vs. log of the concentration
(g/L) of each tea. A series of rules was input into the program that
allowed it to remove outliers and create a graph of the linear range
for each calibration curve, with R-squared values nearing 0.99 for
each. Outliers were removed using the standard Grubbs Method
(Hodge and Austin, 2004) for removal of outliers from a calibration
curve; and the Q-test (Lobato, Nanverkis, & Savin, 2001) for
removal of outliers from a dataset. The slope of each of four hundred
and thirty-two calibration curves (three bags of 24 teas,
brewed six times) were then exported to one excel file for comparison
to the slope of a gallic acid standard. The equation (slope sample/
slope GA) = (mmol GAE/g tea) was used to determine
antioxidant capacity in terms of gallic acid equivalents, where
slopes represent (BCI/g tea/L) and (BCI/mmol Trolox/L).
2.8. Determination of factors influencing antioxidant properties
After measuring the ORAC and NanoCerac of all teas, subgroup
analyses were performed on all teas according to: growing location,
harvest season, drying method, and whether the tea was loose leaf
or bagged, price, caffeine content, and growing practice, i.e.,
organic vs. conventionally raised. All teas in this study were
brewed six times facilitating analysis of a novel parameter, which
we refer to as ‘‘total inherent’’ (TI) antioxidant capacity. This refers
to the summative antioxidant capacity extracted from one serving
of tealeaves after a set number of infusions. Here, we compare
TI-AOX and first-brew AOX capacities of all teas. JMP software
was used to perform one-way ANOVA, and Student T-tests to
determine statistically significant differences between each tea
and each subgroup of tea with respect to first-brew and TI-AOX
capacities. Subgroups that included only one representative tea
were excluded from statistical analyses.
3. Results and discussion
3.1. Effect of brewing conditions and re-infusion on the antioxidant
capacity of green tea
Fig. 1 compares first-brew antioxidant capacity to total inherent
(TI) antioxidant capacity for twenty-four varietal green teas, analyzed
using the ORAC and NanoCerac assays. Significant variability
was seen between teas for both first-brew and TI antioxidant
capacity, as seen in Fig. 2, depicting results of ANOVA and pairwise
analyses. In many cases, more than twice the antioxidant capacity
of the first brew can be attained through re-steeping the tea
(Fig. 1). For example, the first brew of sencha fukamushi, with
0.5 mmol TE/g (ORAC) and 0.52 mmol GAE/g (NanoCerac) comprises
just 23% of the TI-ORAC and 19% of the TI-NanoCerac. On
the other hand, the first brew of Salada green tea, with
0.75 mmol GAE/g and 1.34 mmol TE/g, comprises 59% of the
TI-NanoCerac and 83% of the TI-ORAC. It was found that the
first-brew ORAC values ranged from 0.50 to 1.64 mmol TE/g tea
and averaged 1.02 mmol TE, CV 30%. The first-brew NanoCerac values
ranged from 0.52 mmol GAE/g to 0.92 mmol GAE/g and averaged
0.73 mmol GAE/g, CV 15%. TI-ORACs ranged from 0.72 to
3.5 mmol TEA and averaged 2.14 mmol TE (CV 34%).
TI-NanoCeracs ranged from 1.3 mmol GAE/g to 3.7 mmol GAE/g
and averaged 2.4 mmol GAE (CV 29%). The ORAC of the first brew
of each tea constituted an average of 52% (CV 40%) of its TI-ORAC
while the NanoCerac of the first brew of each tea constituted an
average of 33% (CV 35%) of its TI-NanoCerac. Comparing the coefficient
of variances, a greater difference is seen in the change in
antioxidant capacity from initial brew to total capacity after serial
brews (40% CV, ORAC; and 35% CV, NanoCerac), than is seen in the
actual antioxidant capacity values of the first brew of each tea (30%
CV, ORAC; 15% CV, NanoCerac), indicating that the reusability of
teas vary much more than the antioxidant capacity of their first
infusion.
Fig. S1 in Supplemental information shows how TI-AOX capacities
are constituted for each tea, in terms of six successive infusions
of each green tea, the sum of which determines TI-AOX
values. Here, it can be observed that certain teas do not release significant
levels of active antioxidants beyond their first brew.
However, some teas continue to release active catechins throughout
six or more brews. The factors that affect the ability to be
reused were investigated in detail.
3.2. Understanding differences in antioxidant capacity between green
tea varieties
The factors making each tea unique are outlined in Table S1 in
the Supplemental information. Factors that changed among the
varieties studied were: growing location (eight teas from China;
seven from Japan; four from Kenya; three blended from various
countries including India, China, Sri Lanka, Belarus, Kenya, and
2.7 ตัวอย่างวิเคราะห์ โดย NanoCeracตัวอย่างชาถูกรวบรวมในคอลัมน์แรกของสามแผ่น 96-ดี ยี่สิบสี่ตัวอย่างที่จะวิเคราะห์ที่ช่วยให้ครั้ง มีกระเป๋า 1 – 3 ของ brew หนึ่งสำหรับชื่นแปดครั้งวิเคราะห์เคียงข้างในลักษณะนี้ ตัวอย่างทั้งหมดมี 11 แตกออกเวลา (3:1 อัตราส่วน ตัวอย่าง: น้ำ), ใช้เปตต์รับ ออกจากสุดท้ายของคอลัมน์ 12 เต็มไป ด้วยน้ำเท่านั้น เป็นความว่างเปล่า โดยใช้อีกแบบเปตต์ 2.5 จะตัวอย่างทั้งหมดถูก pipettedใน triplicate โดยตรงไปยังเซ็นเซอร์ ceria 10 ซม คอลัมน์ที่สองตัวอย่าง 6, pipetted ใน triplicate ถูกจัดเรียงในแต่ละการตรวจดิสก์ จุดตัวอย่างถูกจัดใช้เปตต์กับปลายใหญ่คำแนะนำและแผ่นแสตมป์ เซนเซอร์ทั้งหมดถูกสแกนเข้าเครื่องคอมพิวเตอร์ใช้ค่าเริ่มต้น (200 dpi), บันทึกเป็นรูปแบบ.bmp และอัพโหลดไปยังโฟลเดอร์ Dropbox ใช้ร่วมกัน การเข้าถึงโดยการผู้ใช้ MatLab ในตำแหน่งอื่น ภาพแล้วมีวิเคราะห์ความหม่อนมีการกรด gallic มาตรฐานอ้างอิงอัลกอริทึม MatLab เฉพาะขึ้นที่วิเคราะห์สภาพปานกลางของเซ็นเซอร์ ceria โปรแกรมระบุวงแสตมป์สีดำบนหน้า และใช้เวลา โดยเฉลี่ยของ RGB สีปลดปล่อยก๊าซในบริเวณศูนย์กลางของวงกลม โปรแกรมจะสร้างการปรับเทียบเส้นโค้งที่ใช้ความเข้มของสีน้ำเงิน (BCI) เทียบกับล็อกของความเข้มข้น(g/L) ของแต่ละชา ชุดของกฎที่ถูกป้อนข้อมูลลงในโปรแกรมที่อนุญาตให้เอา outliers และสร้างกราฟของเส้นตรงสำหรับแต่ละการปรับเทียบโค้ง ใกล้ถึง 0.99 สำหรับค่าลอการิทึมแต่ละ Outliers ถูกเอาออกโดยใช้วิธี Grubbs(Hodge และ Austin, 2004) สำหรับลบ outliers จากเทียบเส้นโค้ง และ Q-ทดสอบ (Lobato, Nanverkis, & Savin, 2001)เอาของ outliers จากการชุดข้อมูล ความชันของแต่ละสี่ร้อยและเส้นโค้งเทียบสามสิบสอง (สามถุงชา 24รับการต้มกลั่น 6 ครั้ง) จากนั้นถูกส่งออกไป excel แฟ้มสำหรับการเปรียบเทียบกับความชันของกรด gallic มาตรฐาน สมการที่ (ความชันตัวอย่าง /ความชันที่ GA) = (mmol ชา GAE/g) ใช้ในการกำหนดกำลังการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระในเทียบเท่ากรด gallic ที่แสดงถึงลาด (ชา BCI/g L) และ (Trolox BCI/mmol L)2.8 การกำหนดปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระหลังจากวัด ORAC และ NanoCerac ชาทั้งหมด กลุ่มย่อยวิเคราะห์ดำเนินในชาทั้งหมดตาม: ตำแหน่ง การเจริญเติบโตฤดูกาลเก็บเกี่ยว วิธี แห้ง และว่าชาถูกถอดออกหรือ bagged ราคา คาเฟอีนเนื้อหา แบบฝึกหัด การเจริญเติบโตเช่นเกษตรอินทรีย์เปรียบเทียบกับดีขึ้น ชาทั้งหมดในการศึกษานี้ได้6 เวลาอำนวยความสะดวกในการวิเคราะห์พารามิเตอร์นวนิยาย สตรอเบอรี่ซึ่งเราอ้างอิงถึงเป็น ''รวมโดยธรรมชาติ '' (ตี้) หม่อน หมายถึงการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระ summative สกัดจากบริการหนึ่งของ tealeaves จากชุดจำนวน infusions ที่นี่ เราเปรียบเทียบตี้ AOX และ brew แรก AOX ผลิตชาทั้งหมด ซอเจใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียว และ T-ทดสอบกับนักเรียนกำหนดความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติระหว่างแต่ละชาและแต่ละกลุ่มย่อยของชากับ brew แรกและ AOX ตี้กำลังการผลิต กลุ่มย่อยที่พนักงานทีเดียวถูกแยกออกจากการวิเคราะห์ทางสถิติ3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. ผลของการทำการหมักเงื่อนไขและคอนกรีตอีกครั้งในการต้านอนุมูลอิสระกำลังการผลิตของชาเขียวFig. 1 เปรียบเทียบแรก brew หม่อนการรวมโดยธรรมชาติความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ (ตี้) ยี่สิบสี่พันธุ์ชาเขียว วิเคราะห์ใช้ assays ORAC และ NanoCerac อย่างมีนัยสำคัญสำหรับความผันผวนได้เห็นชาสำหรับทั้งแรก brew และตี้ต้านอนุมูลอิสระกำลังการผลิต กับ Fig. 2 แสดงผลลัพธ์ ของการวิเคราะห์ความแปรปรวน และ pairwiseวิเคราะห์ ในหลายกรณี มากกว่าสองกำลังต้านอนุมูลอิสระครั้งแรก brew ที่สามารถจะบรรลุถึง steeping ชาใหม่(Fig. 1) ตัวอย่าง ชงครั้งแรกของเซนฉะ fukamushi กับTE/g (ORAC) 0.5 mmol และ 0.52 mmol GAE/g (NanoCerac) ประกอบด้วยเพียง 23% ของ ORAC ตี้และ 19% ของ NanoCerac ตี้ บนมืออื่น ๆ brew แรกของ Salada เขียวชา ด้วย0.75 mmol GAE/g และ 1.34 mmol TE/g ประกอบด้วย 59% ของการNanoCerac ตี้และ 83% ของ ORAC ตี้ พบว่าการค่า ORAC brew แรกอยู่ในช่วงจาก 0.50 ถึง 1.64 mmol ชา ติ/gและ averaged 1.02 mmol TE, CV 30% ค่า NanoCerac brew แรกอยู่ในช่วงจาก 0.52 mmol GAE/g กับ 0.92 mmol GAE/g และ averaged0.73 mmol GAE/g, CV 15% มา 0.72 การ ORACs ตี้mmol 3.5 ชาและเฉลี่ย 2.14 mmol TE (CV 34%)อยู่ในช่วงจาก 1.3 mmol GAE/g ไป 3.7 mmol GAE/g NanoCeracs ตี้และ averaged 2.4 mmol GAE (CV 29%) ORAC ของ brew แรกแต่ละชาทะลักโดยเฉลี่ย 52% (CV 40%) ของ ORAC ตี้ของNanoCerac ของ brew แรกของชาแต่ละทะลักในขณะค่าเฉลี่ย 33% (CV 35%) ของ NanoCerac ตี้ของ เปรียบเทียบค่าสัมประสิทธิ์ของผลต่าง ความแตกต่างมากขึ้นจะเห็นได้ในการเปลี่ยนแปลงสารต้านอนุมูลอิสระจาก brew เริ่มต้นกำลังการผลิตรวมกำลังการผลิตหลังจากประจำbrews (40% CV, ORAC และ 35% CV, NanoCerac), กว่าที่เห็นในการค่ากำลังการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระที่เกิดขึ้นจริงของ brew แรกของแต่ละชา (30%ประวัติ ORAC 15% CV, NanoCerac), ซึ่งแสดงที่ reusability ของชาแตกต่างกันมากมากกว่ากำลังการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระของครั้งแรกของพวกเขาคอนกรีตฟิก S1 ในแสดงข้อมูลเพิ่มเติมวิธีกำลัง AOX ตี้ทะลักสำหรับชาละ infusions 6 ต่อเนื่องในของแต่ละชาเขียว ผลรวมซึ่งกำหนด AOX ตี้ค่า ที่นี่ มันจะสังเกตได้จากที่บางไม่ปล่อยชาอย่างมีนัยสำคัญระดับของสารต้านอนุมูลอิสระใช้งานเกิน brew แรกของพวกเขาอย่างไรก็ตาม ชาบางยังคงปล่อย catechins ที่ใช้งานอยู่ตลอดbrews 6 หรือมากกว่า ปัจจัยที่มีผลต่อความสามารถที่จะนำกำลังตรวจสอบรายละเอียด3.2. เข้าใจความแตกต่างในหม่อนระหว่างสีเขียวพันธุ์ชาปัจจัยที่ทำให้ชาแต่ละเฉพาะระบุไว้ในตาราง S1 ในข้อมูลเพิ่มเติม ปัจจัยที่เปลี่ยนแปลงระหว่างการมีสายพันธุ์ที่ศึกษา: ตำแหน่ง (8 ชาจากประเทศจีน การเจริญเติบโตเซเว่นจากญี่ปุ่น 4 จากเคนยา สามผสมผสานจากหลากหลายประเทศรวมทั้งอินเดีย จีน ศรีลังกา เบลารุส เคนยา และ
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.7 . การวิเคราะห์ตัวอย่าง โดยตัวอย่างชา nanocerac
ถูกประกอบในคอลัมน์แรกของ 3
96 ดีจาน ให้ตัวอย่าง 24 จะหา
ครั้ง กระเป๋า 1 – 3 ของชาชง 8 แตกต่างกันในเวลาถูก
แบบเคียงข้างกันในลักษณะนี้ ตัวอย่างทั้งหมดจะถูกเจือจาง 11
ครั้ง ( 3 : 1 อัตราส่วน ตัวอย่าง : น้ำ ) ใช้หลอดหลายช่อง ออกจาก
สุดท้ายของ 12 คอลัมน์ที่เต็มไปด้วยน้ำ เป็นช่องว่าง ใช้
อีกหลายช่องเปต 2.5 จะของตัวอย่าง pipetted
ทั้งสามใบ , โดยตรงบน 10 ซม. ซีเรียเซ็นเซอร์ สองคอลัมน์
6 ตัวอย่าง pipetted ทั้งสามใบถูกจัดในแต่ละสัมผัส
ดิสก์ จำนวนวงกลมโดยใช้จุดปลายใหญ่ปลายปิเปต
และตรายาง . เซ็นเซอร์ทั้งหมดถูกสแกนลงในคอมพิวเตอร์
การตั้งค่าเริ่มต้น ( 200 จุดต่อนิ้ว ) บันทึกเป็นภาพ BMP และอัปโหลดไปยัง Dropbox
ใช้ร่วมกันโฟลเดอร์ที่ถูกเข้าถึงได้โดย
Matlab ผู้ใช้ในตำแหน่งอื่น ภาพวิเคราะห์สำหรับ
สารต้านอนุมูลอิสระความจุที่มีการอ้างอิงถึงมาตรฐานกรดแกลลิค .
า MATLAB ขั้นตอนวิธีที่ถูกสร้างขึ้นที่อำนวยความสะดวกในการวิเคราะห์
ของซีเรียเซ็นเซอร์ โปรแกรมระบุประทับตราวงกลมสีดำ
บนหน้าและใช้ค่าเฉลี่ยของความเข้มสี RGB ใน
กลางพื้นที่วงกลม โปรแกรมสร้างเส้นโค้งสอบเทียบ
ใช้ความเข้มสี ฟ้า ( BCI ) กับ log ของความเข้มข้น
( g / l ) ของแต่ละชา ชุดของกฎที่ถูกป้อนลงในโปรแกรมที่อนุญาตให้เอา
ผิดปกติและสร้างกราฟของ
ช่วงเชิงเส้นแต่ละเส้นปรับเทียบกับ r-squared ค่าใกล้ 0.99 สำหรับ
แต่ละเมื่อถูกลบโดยใช้มาตรฐานที่กรับส์วิธี
( Hodge และออสติน , 2004 ) ในการกำจัดผิดปกติจากการสอบเทียบ
โค้ง และ q-test ( โลบาโต nanverkis & , , เก็บ , 2001 )
การกำจัดผิดปกติจากข้อมูล . ความชันของเส้นโค้งสอบเทียบและสี่ร้อย
สอง ( สามถุงของ 24 , ชาชง
6 ครั้ง ) แล้วส่งออกไปหนึ่งแฟ้ม Excel เปรียบเทียบ
กับความชันของมาตรฐานกรดแกลลิค . สมการ ( ตัวอย่าง /
GA ความลาดชัน ) = ( mmol / g ชาเก ) ศึกษา
สารต้านอนุมูลอิสระเพิ่มขึ้นในแง่ของวิธีที่
ลาดแทน ( BCI ) / g / L และชา ( BCI ) สาร / mmol / l )
2.8 . การศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระ
หลังจากวัด ORAC nanocerac ของชาและทุกกลุ่มย่อย
,จากจำนวนทั้งหมดตาม : การปลูกชาสถานที่
ฤดูเก็บเกี่ยว วิธีการอบแห้ง และไม่ว่าจะเป็นชาใบหลวมหรือถุง
, ราคา , กาเฟอีน และการฝึก เช่น
อินทรีย์ vs แต่เดิมยกขึ้น ชาทั้งหมดในการศึกษานี้
ต้มหกครั้งการวิเคราะห์พารามิเตอร์ของนวนิยาย ซึ่งเราเรียกว่า 'total
' แท้จริง ' ' ( Ti ) สารต้านอนุมูลอิสระ .นี้หมายถึง
ไปเพื่อความจุสารต้านอนุมูลอิสระสกัดจากการให้บริการหนึ่ง
ของใบชา ตามจำนวนชุดของช่วง . ที่นี่ เราเปรียบเทียบ
ti-aox ก่อนชงชนิดและความจุของชาทั้งหมด . เพลงซอฟต์แวร์
ถูกใช้เพื่อทำการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว และจำนวนนักเรียน
ตรวจสอบแตกต่างกันแต่ละชา
และแต่ละกลุ่มย่อยของชาด้วยความเคารพเค้าก่อน และ ti-aox
ความสามารถ กลุ่มย่อยที่ประกอบด้วยเพียงหนึ่งตัวแทนชา
ถูกแยกออกจากการวิเคราะห์ทางสถิติ .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ผลของเงื่อนไขที่ต้มและแช่ในสารต้านอนุมูลอิสระของชาเขียว
รูปที่ 1 เปรียบเทียบก่อนชงสารต้านอนุมูลอิสระโดยแท้จริง
( Ti ) สารต้านอนุมูลอิสระสำหรับยี่สิบสี่ของชาเขียว , วิเคราะห์
ใช้ ORAC nanocerac ) และ .ความแปรปรวน
ที่เห็นระหว่างชาทั้งชงและ Ti ความจุสารต้านอนุมูลอิสระ
ดังที่เห็นในรูปที่ 2 แสดงผลของการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) และการวิเคราะห์คู่
. ในหลายกรณี , มากกว่าสองเท่าของความจุของสารต้านอนุมูลอิสระ
ชงแรกสามารถบรรลุผ่านเป็น steeping ชา
( รูปที่ 1 ) ตัวอย่างเช่น ร้านแรกของเซนชะ fukamushi กับ
0.5 มิลลิโมลเต้ / G ( ORAC ) และ 052 มิลลิโมลเก / G ( nanocerac ) ประกอบด้วย
แค่ 23 % ของ ti-orac และ 19% ของ Ti nanocerac . บน
มืออื่น ๆ , ชงแรกของซาลาด้า ชาเขียวกับ 0.75 มิลลิโมลเก
/ g และ 1.34 มิลลิโมลเต้ / กรัม ประกอบด้วย 59 %
nanocerac TI 83 % ของ ti-orac . พบว่าค่า ORAC แรก
ตั้งเค้าตั้งแต่ 0.50 1.64 mmol / g
te ชาและเฉลี่ย 1.02 มิลลิโมลเต้ , CV 30 % ครั้งแรกค่า
nanocerac ตั้งเค้าระหว่าง 0.52 มิลลิโมลเก / กรัม / กรัม และเฉลี่ย 0.92 มิลลิโมลเกเก
0.73 mmol / g , CV 15 % Ti oracs มีค่า 0.72
3.5 มิลลิโมลชาและเฉลี่ย 2.14 มิลลิโมลเต้ ( CV 34% ) .
Ti nanoceracs ตั้งแต่ 1.3 mmol / g ราคาเกเก / G
1 มิลลิโมลและ 2.4 มิลลิโมลเก ( 29 CV % ) และ ORAC จากเบียร์
ครั้งแรกของแต่ละชาขึ้นเฉลี่ยร้อยละ 52 ( CV 40 % ) ของ ti-orac
ในขณะที่ nanocerac จากเบียร์แรกของแต่ละชาที่ตั้งขึ้น
เฉลี่ย 33% ( CV 35% ) ของ TI nanocerac . การเปรียบเทียบสัมประสิทธิ์
ของความ ซึ่งความแตกต่างจะเห็นการเปลี่ยนแปลงใน
ความจุสารต้านอนุมูลอิสระจากเริ่มต้นตั้งเค้าความจุรวมหลังอนุกรม
brews ( 40 % CV ORAC และ 35 % CV nanocerac ) กว่าจะเห็นใน
ค่าความจุของสารต้านอนุมูลอิสระที่แท้จริงของเบียร์แรกของแต่ละชา ( 30 %
CV ORAC ; 15 % CV nanocerac ) แสดงว่าใช้
ชาแตกต่างกันมากกว่าความจุของสารต้านอนุมูลอิสระฉีดก่อน
.
รูปที่ S1 ในข้อมูลเพิ่มเติมแสดงให้เห็นว่า ti-aox ความจุ
เป็น constituted ของแต่ละชา ใน แง่ของหกต่อเนื่องช่วง
แต่ละชาเขียว , ผลรวมของ ti-aox
ซึ่งเป็นตัวกำหนด
การแปล กรุณารอสักครู่..
