The Gibberellin Stimulated-Like (GS

The Gibberellin Stimulated-Like (GSL) or Snakin peptides from higher plants are cysteine-rich, with broad spectrum activity against a range of bacterial and fungal pathogens. To detect GSL peptides in applications such as western blot analysis and enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), specific antibodies that recognise GSL peptides are required. However, the intrinsic antimicrobial activity of these peptides is likely to prevent their expression alone in bacterial or yeast expression systems for subsequent antibody production in animal hosts.
RESULTS:
To overcome this issue we developed an Escherichia coli expression strategy based on the expression of the GSL1 peptide as a His-tagged thioredoxin fusion protein. The DNA sequence for the mature GSL1 peptide from potato (Solanum tuberosum L.) was cloned into the pET-32a expression vector to produce a construct encoding N-terminally tagged his6-thioredoxin-GSL1. The fusion protein was overexpressed in E. coli to produce soluble non-toxic protein. The GSL1 fusion protein could be easily purified by using affinity chromatography to yield ~1.3 mg of his6-thioredoxin-GSL1 per L of culture. The fusion protein was then injected into rabbits for antibody production. Western blot analysis showed that the antibodies obtained from rabbit sera specifically recognised the GSL1 peptide that had been expressed in a wheat germ cell-free expression system.
CONCLUSION:
We present here the first report of a GSL1 peptide expressed as a fusion protein with thioredoxin that has resulted in milligram quantities of soluble protein to be produced. We have also demonstrated that a wheat germ system can be used to successfully express small quantities of GSL1 peptide useful as positive control in western blot analysis. To our knowledge this is the first report of antibodies being produced against GSL1 peptide. The antibodies will be useful for analysis of GSL1peptides in western blot, localization by immunohistochemistry (IHC) and quantitation by ELISA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกระตุ้น เช่น จิบเบอเรลลิน ( GSL ) หรือ snakin เปปไทด์จากพืชมีกรดอะมิโนสูงอุดมด้วยกิจกรรมที่หลากหลายกับช่วงของเชื้อแบคทีเรียและเชื้อราเชื้อโรค เพื่อตรวจหา GSL เปปไทด์ในการใช้งาน เช่น การวิเคราะห์ Western blot และ enzyme-linked immunosorbent assays ( ELISA ) แอนติบอดีที่จำ GSL เปปไทด์จะต้อง อย่างไรก็ตามกิจกรรมต้านแท้จริงของเปปไทด์เหล่านี้มีแนวโน้มที่จะป้องกันไม่ให้ความรู้สึกโดดเดี่ยวในแบคทีเรียหรือยีสต์ เพื่อการผลิตแอนติบอดีต่อการแสดงออกในโฮสต์ของสัตว์ ผลการศึกษา :

เพื่อเอาชนะปัญหานี้ เราได้พัฒนากลยุทธ์ใน Escherichia coli สีหน้าการแสดงออกของเปปไทด์ gsl1 เป็นของเขาแท็ก thioredoxin ผสมโปรตีนลำดับ DNA สำหรับผู้ใหญ่ gsl1 เปปไทด์จากมันฝรั่ง ( ไม่สามารถจะยอมรับได้ tuberosum L . ) ถูกโคลนเข้าไปใน pet-32a นิพจน์เวกเตอร์ผลิตสร้าง n-terminally แท็ก his6-thioredoxin-gsl1 การเข้ารหัส ฟิวชั่นกับโปรตีนในเชื้อ E . coli ผลิตที่ปลอดสารพิษของโปรตีน การ gsl1 ของโปรตีนบริสุทธิ์สามารถได้อย่างง่ายดายโดยใช้ขี้รังแคผลผลิต ~ 13 มิลลิกรัมต่อลิตรเหรอ his6-thioredoxin-gsl1 กระทรวงวัฒนธรรม ส่วนของโปรตีนถูกฉีดเข้าไปในกระต่ายเพื่อผลิตแอนติบอดี การวิเคราะห์ Western blot พบว่าแอนติบอดีที่ได้จากกระต่าย ( โดยเฉพาะได้รับการยอมรับ gsl1 เปปไทด์ที่ถูกแสดงในข้าวสาลีการสังเคราะห์ระบบ :

สรุปสำนวน .ที่เรานำเสนอที่นี่รายงานแรกของ gsl1 เปปไทด์แสดงเป็นโปรตีนที่มี thioredoxin ที่ส่งผลให้ปริมาณโปรตีนที่ละลายน้ำได้เป็นมิลลิกรัม ที่ผลิต นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นว่าระบบจมูกข้าวสาลีสามารถใช้เรียบร้อยแล้วแสดงปริมาณขนาดเล็กของ gsl1 เปปไทด์ที่มีประโยชน์เป็นบวกควบคุมในการวิเคราะห์ Western blot .เพื่อความรู้ของเรานี้เป็นรายงานแรกของแอนติบอดีที่ผลิตจาก gsl1 เปปไทด์ . ดังนั้นจะเป็นประโยชน์สำหรับการวิเคราะห์ gsl1peptides ใน Western blot , ภาษาท้องถิ่น โดยหลอด ( งานวิจัยและเซลล์โดยวิธี ELISA ) และ