Experimental
Preparation of Mobile Phase
A 50-mM phosphate buffer solution to use as the mobile phase was prepared by dissolving 6.82 g of potassium phosphate monobasic (Fisher) in deionized water. The pH of the buffer was then adjusted to 2.80 by adding concentrated phosphoric acid drop-wise while monitoring with a calibrated pH meter. The solution was then diluted to 1.00 L with deionized water. To obtain an HPLC grade mobile phase the solution was filtered through a 0.22-μm nylon membrane by vacuum filtration. HPLC grade methanol was used before and after the experiment to prevent phase collapse.
Standard Preparation
Citric acid standards of 100, 200, 300, 500, and 1000 ppm were prepared from granular citric acid (Fisher) and deionized water. These were then transferred to autosampler vials for HPLC analysis.
Preparation of Samples
Eight orange juices were purchased at local supermarkets. Four were 100% orange juice: Kemps, Langers, Minute Maid, and Tropicana. Two were orange flavored drinks: Sunny D and Tang, and one was 100% mixed fruit juice: Juicy Juice. A navel orange from California was also used.
From each bottled juice a 10.00-mL aliquot was transferred to a 50-mL volumetric flask. The Tang, which had to be dissolved, was prepared by dissolving 1.01 g into a 50-mL volumetric flask. This mass was equivalent to a 10-mL sample of Tang prepared according to the instructions on the label. The navel orange sample was prepared by juicing an orange and then pipetting 10 mL of the liquid into a 50-mL volumetric flask. All 50-mL flasks were diluted to volume with deionized water. All dilute samples were filtered through a 0.45-μm filter membrane before HPLC analysis.
After an initial analysis by HPLC, all of the juices were further diluted by transferring 10 mL of the once diluted samples into new 50-mL volumetric flasks and diluting to volume with deionized water. This provided peaks that would be more accurately analyzed than the more highly concentrated samples except for Juicy Juice, which was kept at the higher concentration level for final analysis.
Instrument Preparation
An isocratic elution was carried out on a Varian ProStar HPLC system with a 50-mm × 4.6-mm Kinetex XB-C18 column (Phenomenex) with a 2.6-μm particle size and 100-Å pore size. The mobile phase was 100% 50-mM phosphate buffer at pH 2.80. The HPLC system operated at a flow rate of 0.5 mL/min, the injection volume was 5 μL, and the
ทดลองการเตรียมความพร้อมของเฟสเคลื่อนที่
50 มม. สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเพื่อใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการละลาย 6.82 กรัมของโพแทสเซียมฟอสเฟต monobasic (ฟิชเชอร์) ในน้ำกลั่นปราศจากไอออน ph ของกันชนมีการปรับไปแล้ว 2.80 โดยการเพิ่มกรดเข้มข้นหล่นฉลาดในขณะที่การตรวจสอบด้วยเครื่องวัด ph สอบเทียบ การแก้ปัญหาที่ถูกเจือจางแล้วถึง 100 ลิตรที่มีน้ำกลั่นปราศจากไอออน ที่จะได้รับเฟสเคลื่อนที่เกรด hplc การแก้ปัญหาที่ถูกกรองผ่านเยื่อไนลอน 0.22 ไมครอนโดยการกรองสูญญากาศ เมทานอล hplc เกรดถูกนำมาใช้ก่อนและหลังการทดลองเพื่อป้องกันไม่ให้ขั้นตอนการยุบ.
มาตรฐานการจัดทำมาตรฐานกรดซิตริก 100, 200, 300, 500, และ 1,000 ppm ที่เตรียมจากกรดซิตริกเม็ด (ฟิชเชอร์) และน้ำกลั่นปราศจากไอออนเหล่านี้ถูกย้ายไป autosampler ขวดสำหรับการวิเคราะห์ hplc. เตรียม
ตัวอย่างน้ำผลไม้สีส้มแปดถูกซื้อได้ที่ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น สี่ 100% น้ำผลไม้สีส้ม: Kemps, langers สาวนาทีและทรอปิคานา สองคนเครื่องดื่มรสส้ม: แดดงและรสและเป็นหนึ่งในน้ำผลไม้ 100% ผสม: น้ำผลไม้ฉ่ำ สีส้มสะดือจากแคลิฟอร์เนียก็ใช้.
จากน้ำผลไม้บรรจุขวดแต่ละ 1000 มิลลิลิตรหารถูกย้ายไปขวดปริมาตร 50 มล. รสซึ่งต้องได้รับการละลายถูกจัดทำขึ้นโดยการละลาย 1.01 กรัมลงในขวดปริมาตร 50 มล. มวลนี้ก็เท่ากับตัวอย่าง 10 มิลลิลิตรของรสจัดทำตามคำแนะนำบนฉลาก ตัวอย่างสะดือสีส้มได้รับการจัดทำขึ้นโดยการคั้นน้ำสีส้มแล้วปิเปต 10 มล. ของของเหลวในขวดปริมาตร 50 มล.ทุกขวด 50 มล. ถูกปรับลดปริมาณการใช้น้ำกลั่นปราศจากไอออน ทั้งหมดเจือจางตัวอย่างถูกกรองผ่านเยื่อกรอง 0.45 ไมโครเมตรก่อนที่จะวิเคราะห์ hplc.
หลังจากเริ่มต้นการวิเคราะห์โดย hplc ทั้งหมดของน้ำผลไม้ที่ถูกปรับลดต่อไปโดยการโอน 10 มิลลิลิตรของสารตัวอย่างที่เจือจางครั้งใหม่ในขวดปริมาตร 50 มล. และเจือจางไป ปริมาณน้ำกลั่นปราศจากไอออนนี้ให้ยอดเขาที่จะมีมากขึ้นกว่าการวิเคราะห์อย่างถูกต้องมากขึ้นตัวอย่างที่มีความเข้มข้นสูงยกเว้นน้ำผลไม้ฉ่ำซึ่งถูกเก็บไว้ในระดับความเข้มข้นที่สูงขึ้นสำหรับการวิเคราะห์สุดท้าย. การเตรียมเครื่องมือ
elution isocratic ถูกหามออกในระบบ hplc prostar varian ด้วย 50 มม. × 4.6 มม. KINETEX คอลัมน์ XB-c18 (Phenomenex) ที่มีอนุภาคขนาด 2.6 ไมครอนและขนาดรูขุมขน 100 Åเฟสเคลื่อนที่เป็น 100% 50 มม. ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ ph 2.80 ระบบ hplc ดำเนินการที่อัตราการไหล 0.5 มล. / นาทีปริมาณการฉีดได้ 5 ไมโครลิตรและ
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)