2. Materials and methods2.1. Plant

2. Materials and methods
2.1. Plant material and DNA isolation
Given its geography, six representative M. wufengensis populations
were selected based on field investigations and their distribution
in and around Wufeng in Hubei (Fig. 1). The largest population,
i.e., Dushuping (DSP), was further divided into five subpopulations on
the basis of slope aspect and elevation. A range of 18–33 samples of
each population were collected for analysis for a total sample size of
252 (Table 1). During spring blooming, twigs from adult trees, at least
30 to 50 years old, with buds were cut and cultured in 25°C water at
our laboratory. Young, 3 to 5 cm long leaves were spread out and
selected for DNA isolation.
Genomic DNA of single individuals was extracted following the
improved CTAB protocol [7]. The concentration and quality of DNA
samples were checked on 0.8% agarose gel by a comparison with
lambda DNA standards and with UV spectroscopy. The DNA samples
were diluted to approximately 10 ng/μL with a 0.1% TE buffer.
2.2. ISSR analysis
The sequence and codes of 56 ISSR primers followed by NAPS
Standard Unit Primers (UBC, Canada) were screened. Of these, 10
primers with clear and polymorphic bands were used for amplification
of all 252 accessions from the six populations. The annealing
temperature of each primer was optimized by a gradient PCR (Table 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2. Materials and methods
2.1. Plant material and DNA isolation
Given its geography, six representative M. wufengensis populations
were selected based on field investigations and their distribution
in and around Wufeng in Hubei (Fig. 1). The largest population,
i.e., Dushuping (DSP), was further divided into five subpopulations on
the basis of slope aspect and elevation.ช่วงที่ 18 – 33 ตัวอย่าง
แต่ละจำนวนรวบรวมเพื่อการวิเคราะห์สำหรับขนาดตัวอย่างรวม
252 ( ตารางที่ 1 ) ในช่วงฤดูใบไม้ผลิบาน กิ่งไม้จากต้นไม้ผู้ใหญ่อย่างน้อย
30 ถึง 50 ปี ตาถูกตัดและที่เพาะเลี้ยงในน้ำที่ 25 ° C
ปฏิบัติการของเรา หนุ่ม 3 - 5 ซม. ใบยาวถูกแพร่กระจายออกไปและ

เลือกสำหรับการแยกดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอของบุคคลเดียวสกัดดังต่อไปนี้
ปรับปรุง ctab โปรโตคอล [ 7 ] ปริมาณและคุณภาพของตัวอย่างดีเอ็นเอ
ถูกตรวจสอบ 0.8% เจลโดยการเปรียบเทียบกับดีเอ็นเอติดตาม
มาตรฐานและสเปกโทรสโกปี UV ตัวอย่างดีเอ็นเอ
ลดประมาณ 10 ng / μฉันกับบัฟเฟอร์ TE 0.1% .
2.2 . issr การวิเคราะห์
ลำดับและรหัส 56 issr ไพรเมอร์ ตามด้วยไพรเมอร์ naps
หน่วยมาตรฐาน ( UBC , แคนาดา ) มีมุ้งลวด ของเหล่านี้ 10
primers with clear and polymorphic bands were used for amplification
of all 252 accessions from the six populations. The annealing
temperature of each primer was optimized by a gradient PCR (Table 2).