TAIL-PCR amplification was conducte

TAIL-PCR amplification was conducted using a random combination of the three nested
specific primers, SP1 to SP3, with one of the four random primers, AP1 to AP4. A single 1710 bp
specific band was obtained when SP1 to SP3 were paired with AP3 in the third round of amplification;
no specific bands were obtained if SP1 to SP3 were paired with AP1, AP2, or AP4 (Figure 2a). As
the sequence of the 1710 bp band matched that of the 5'-end of the peanut chitinase gene, the
amplification product was considered to be the upstream promoter sequence for the peanut chitinase
gene and was named Ah-Chi-Pro. A 1650 bp band was generated using primers Chi-F and Chi-R,
and named Ah-Chi-P. This amplification product was inserted into the pMD18-T vector to obtain
the recombinant plasmid pMD18-T-Ah-Chi-P; construction of the plasmid was verified by PCR and
double-digestion with BamHI and NcoI, which produced the 1650 bp construct (Figure 2b,c).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธี PCR หางขยายใช้สามซ้อนสุ่มเฉพาะไพรเมอร์ SP1 ถึง SP3 กับหนึ่งในสี่สุ่มไพรเมอร์ AP1 ไป AP4 Bp 1710 เดียวเฉพาะวงได้รับเมื่อ SP1 ถึง SP3 ถูกจับคู่กับ AP3 ในรอบสามของขยายวงการไม่ได้รับถ้า SP1 ถึง SP3 ถูกจับคู่กับ AP1, AP2 หรือ AP4 (รูป 2a) เป็นลำดับของวงการ bp 1710 ตรงที่ 5'-สิ้นถั่วลิสง chitinase ยีน การขยายผลิตภัณฑ์ที่ถือเป็นลำดับขั้นต้นน้ำโปรโมเตอร์สำหรับ chitinase ถั่วลิสงยีน และชื่อว่า Ah-ชี-Pro วง 1650 bp โดยไพรเมอร์ชี-F และ R ชีและชื่อ Ah-ชีพี ขยายผลิตภัณฑ์นี้ถูกแทรกลงในเวกเตอร์ pMD18 T รับrecombinant plasmid pMD18-ทีอา ชี-P ก่อสร้างของ plasmid จะถูกตรวจสอบ โดย PCR และ ใหญ่ย่อยอาหาร BamHI และ NcoI ซึ่งผลิตสร้าง 1650 bp (รูปที่ 2b, c)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยายหาง-PCR
ได้ดำเนินการโดยใช้การรวมกันแบบสุ่มของสามซ้อนไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงที่จะSP1 SP3 กับหนึ่งในสี่ของไพรเมอร์แบบสุ่ม AP1 ไป AP4 เดียว 1,710 bp
วงเฉพาะที่ได้รับเมื่อ SP1 SP3 จะถูกจับคู่กับ AP3 ในรอบที่สามของการขยาย;
วงดนตรีที่เฉพาะเจาะจงไม่ได้รับถ้า SP1 SP3 จะถูกจับคู่กับ AP1, AP2 หรือ AP4 (รูปที่ 2a) ในฐานะที่เป็นลำดับของวง bp 1710 จับคู่ของ 5'-ท้ายของยีนไคติเนสถั่วลิสงที่สินค้าที่ได้รับการพิจารณาขยายให้เป็นลำดับโปรโมเตอร์ต้นน้ำสำหรับไคติเนสถั่วลิสงยีนและเป็นชื่ออาจิ-Pro วง 1650 bp ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์จิ-F และ Chi-R, และตั้งชื่ออาจิ-P ผลิตภัณฑ์นี้ได้รับการขยายแทรกลงในเวกเตอร์ pMD18-T ที่จะได้รับพลาสมิดrecombinant pMD18-T-Ah-Chi-P; การก่อสร้างของพลาสมิดที่ถูกตรวจสอบโดยวิธี PCR และการย่อยอาหารคู่กับBamHI และ NcoI ซึ่งผลิตสร้าง bp 1650 (รูปที่ 2b ค)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

tail-pcr ขยายจำนวนการสุ่มของทั้งสามซ้อนกัน
โดยเฉพาะ SP1 SP3 กับหนึ่งใน สี่ สุ่ม ไพรเมอร์ ap1 เพื่อ ap4 . เดียว 1710 BP
เฉพาะกลุ่มได้เมื่อ SP1 SP3 ถูกจับคู่กับ ap3 ในรอบที่สามของการขยาย ;
ไม่มีแถบที่เฉพาะเจาะจงได้ว่า SP1 SP3 ถูกจับคู่กับ ap1 ap2 , หรือ ap4 ( รูปที่ 2A ) โดย
การเรียงลำดับของ 1710 BP วงตรงกับที่ของ 5 ' - สิ้นสุดของถั่วลิสง ( ยีนผลิตภัณฑ์
( ถือเป็นลำดับการขั้นต้นสำหรับถั่วลิสงยีนไคติเนสและ ชื่อ อาจิ
Pro วงดนตรี 1650 BP ถูกสร้างขึ้นและใช้ไพรเมอร์ chi-f chi-r
ชื่อนี้ ( ah-chi-p. , และผลิตภัณฑ์ที่ถูกแทรกลงในเวกเตอร์ pmd18-t ขอรับ
การ pmd18-t-ah-chi-p รีคอมบิแนนท์พลาสมิด ; การก่อสร้างของพลาสมิดและตรวจสอบโดยวิธี PCR และการย่อยด้วย BamHI
คู่ ncoi ซึ่งผลิต 1650 BP สร้าง ( รูปที่ 2B , C )