Precision, calculated as relative s

Precision, calculated as relative standard deviation (R.S.D., %), was obtained in two levels: intra- (10 injections/day, for 3 days) and inter-days (one injection/day, for 6 days). Approximately 50 mg of nicotinic acid; 50, 150 and 250 mg of topical formulations analyte-free; and 5, 15 and 25 mg of standard ascorbic acid were weighed precisely and dissolved, separately, in 50mL of the mobile phase, with subsequently mixing. Samples were centrifuged at 3000 rpm for 5 min at room temperature (24.0±2.0 ◦C). Supernatants were discarded.
To achieve accuracy/recovery, aliquots of samples were diluted to final concentrations of 2.0, 6.0 and 10.0 _gmL−1 of standard ascorbic acid and 20.0 _gmL−1 of nicotinic acid on the mobile phase. To obtain intra- and inter-run precision, samples were diluted to final concentration of ascorbic acid of 6.0, and 20.0_gmL−1 of nicotinic acid.
8. Limits of detection (LOD) and quantification (LOQ)
The limits of detection and quantification were determined by serial dilutions of ascorbic acid solutions in order to obtain signal/noise ratios of ≈3:1 for LOD and ≈10:1 for LOQ.
Approximately 25 mg of standard ascorbic acid were weighed precisely and dissolved in 50 mL of the mobile phase. Appropriate amounts of standard ascorbic acid solution were diluted to required concentrations of 0.03, 0.05, 0.1 and 1.0_gmL−1.Working standard solutions were prepared in replicates of three.
Results and discussion
1. Selection of mobile phase
Prior to performing the validation assay, chromatographic conditions for the HPLC stability-indicating method were studied in order to achieve appropriate system suitability.
Mobile phase composition was tested with methanol/ phosphate buffer + tetrabutylammonium (30:70 and 70:30, v/v) in C8 column (λ = 254 nm); and 0.2% metaphosphoric acid in water solution, 0.2% metaphosphoric acid/methanol (95:5 and 90:10, v/v), 0.2% metaphosphoric acid/acetonitrile (95:5 and
90:10, v/v) and 0.2% metaphosphoric acid/methanol/acetonitrile (90:5:5, v/v/v) inC18 column (λ = 254 nm). Those mobile phases have not presented adequate response for ascorbic acid quantitation since they were not able to identify the antioxidant glutathione, as a component of the pharmaceutical/cosmetic preparations, and provided unsuitable retention time for the active substance (≈1 min) .
The working mobile phase, 0.2% metaphosphoric acid/ methanol/acetonitrile (90:8:2, v/v/v), has elevated the retention time to ≈3.5 min, providing resolution of the ascorbic acid from the nicotinic acid, shown in Fig. 1, and other excipients from the topical formulations with sharp and symmetrical peaks, and avoided interferences from the equipment noise. In addition, this mobile phase has been reported to maintain the column life longer. The final experiment conditions were set as described in Sections 2.1 and 2.4.
2. Linearity
The linearity was studied over a concentration range of 1.0–12.0_gmL−1. To evaluate the influence of excipients from topical formulations, linearity was also studied with the presence of the o/w emulsion and aqueous gel analyte-free and no interference was found, maintaining the linear and proportional relationship. Replicates of three injections were performed for each sample.
A standard curve was constructed according to the ratio peaks of ascorbic acid/nicotinic acid versus peaks for ascorbic acid concentrations. The results demonstrated satisfactory and consistent behavior of the HPLC stability-indicating method.

Fig. 1. Chromatogram of standard ascorbic acid, glutathione, sodium metabisulfite, oxalic acid and internal standard nicotinic acid at 254 nm. Mobile phase was 0.2% metaphosphoric acid/ methanol/ acetonitrile (90:8:2, v/v/v).
Least-squares regression analysis was used to evaluate the concentration range data that showed excellent linearity over the interval studied, with r2 ≥0.99 . Linear regression was y = 0.0732x−0.0141, where y is the rate of ascorbic acid/nicotinic acid peak areas and x is the concentration of ascorbicacid (_gmL−1).
3. Specificity
The specificity of the HPLC stability-indicating method for ascorbic acid quantitation in pharmaceutical/cosmetic preparations was investigated in order to obtain an indication of the possible interferents from excipients of the topical preparations, the nicotinic acid and the degradation product of the active substance, the oxalic acid.
The presence of the excipients of the o/w emulsion and aqueous gel (Fig. 2), including the antioxidants glutathione and sodium metabisulfite, and the oxalic acid did not cause any interference with the ascorbic acid peak. Under these conditions, ascorbic acid was observed to be well resolved from components of formulations and the potential degradation product of the Vitamin C.
4. Accuracy/recovery and precision
Accuracy/recovery was calculated for nine runs of each solution, involving both o/w emulsion and aqueous gel. The results, recorded in Table 1, indicated an adequate percentage of accuracy/recovery (oil-in-water emulsion 98.97 to 100.84%; aqueous gel 95.46 to 101.54%) of the HPLC stabilityindicating method for ascorbic acid quantitation from the pharmaceutical/ cosmetic preparations.
To calculate the precision, intra- and inter-days tests were performed and results were expressed as relative standard deviation (R.S.D., %) in terms of area ratio of ascorbic acid/nicotinic acid. The low percentage values of R.S.D. (0.38 and 1.22%) were an evidence of the appropriate precision of this stabilityindicating method which provided an irrelevant variability of the data assayed in 3 (mean of the 10 injections) and 6 days (mean of 6 injections) .

Fig. 2. Chromatogram of pharmaceutical/cosmetic formulations (o/w emulsion and aqueous gel) analyte-free at 254 nm. Mobile phase was 0.2% metaphosphoric acid/methanol/acetonitrile (90:8:2, v/v/v).
5. Limits of detection (LOD) and quantification (LOQ)
The LOD is defined as the lowest active substance concentration which can be determined by the method, however not calculated precise and accurately. LOQ is the concentration of the sample in analysis that is obtained with adequate precision and accuracy . An estimation of the limits can be achieved by the determination of the signal/noise ratios of 3:1 (LOD) and 10:1 (LOQ). For this HPLC stabilityindicating method, the LOD and LOQ values were found to ≈0.05 and ≈0.17_gmL−1, respectively. Table 2 summarized the experimental data for the HPLC stability-indicating method parameters.
4. Conclusion
The HPLC stability-indicating method of ascorbic acid quantitation in semisolid pharmaceutical/ cosmetic preparations containing glutathione and sodium metabisulfite, as antioxidants,
described in the present study was validated by linearity, sufficient accuracy/recovery and precision, as well as low values of limits of detection and quantification, presenting the sensitivity of this analytical tool. The simplicity of the low cost non-consuming time technique and the high specificity to ascorbic acid, even in the presence of the variety of excipients and its possible degradation product, the oxalic acid, provided this stability-indicating method to be particularly attractive for the determination of ascorbic acid on these o/w emulsion and aqueous gel or in other similar pharmaceutical/cosmetic formulations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความแม่นยำ การคำนวณเป็นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (R.S.D. %), ได้รับในระดับที่สอง: ภายใน- (10 ฉีดวัน 3 วันและระหว่างวัน (หนึ่งฉีดวัน 6 วัน ประมาณ 50 มิลลิกรัมของกรด nicotinic 50, 150 และ 250 มิลลิกรัมของ analyte ฟรี สูตรเฉพาะ และ 5, 15 และ 25 มิลลิกรัมของกรดแอสคอร์บิคมาตรฐานน้ำหนักแม่นยำ และ ละลาย แยก ใน 50mL ของเฟสเคลื่อนที่ มีมาผสม ตัวอย่างที่ centrifuged ที่ 3000 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง (24.0±2.0 ◦C) Supernatants ได้ถูกยกเลิก เพื่อให้บรรลุความแม่นยำ/กู้คืน aliquots อย่างถูกผสมให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 2.0, 6.0 และ 10.0 _gmL−1 มาตรฐานกรดแอสคอร์บิคและ _gmL−1 20.0 ของกรด nicotinic ในเฟสเคลื่อนที่ รับ run อินทรา และ inter ความแม่นยำ ตัวอย่างถูกทำให้เจือจางให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ ascorbic acid 6.0 และ 20.0_gmL−1 ของกรด nicotinic8. ข้อจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) และนับ (LOQ) ขีดจำกัดของการตรวจจับและนับถูกกำหนด โดย dilutions ประจำของกรดแอสคอร์บิคโซลูชั่นเพื่อให้ได้อัตราส่วนสัญญาณ/สัญญาณรบกวนของ ≈3:1 ลอดและ ≈10:1 สำหรับ LOQ. ประมาณ 25 มิลลิกรัมของกรดแอสคอร์บิคมาตรฐานมีน้ำหนักแม่นยำ และละลายใน 50 mL ของเฟสเคลื่อนที่ จำนวนมาตรฐานกรดแอสคอร์บิคโซลูชั่นที่เหมาะสมได้ยกเว้นจะต้องใช้ความเข้มข้น 0.03, 0.05, 0.1 และโซลูชั่นมาตรฐาน 1.0_gmL−1.Working ได้เตรียมในเหมือนกับสามผลและการสนทนา1. การเลือกระยะเคลื่อน ก่อนที่จะดำเนินการตรวจสอบวิเคราะห์ เงื่อนไข chromatographic สำหรับวิธีบ่งชี้เสถียรภาพ HPLC ได้ศึกษาเพื่อความเหมาะสมของระบบที่เหมาะสม องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ทดสอบกับเมทานอล / ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ + tetrabutylammonium (30:70 และ 70:30, v/v) ในคอลัมน์ C8 (λ = 254 nm); และกรดแก้ปัญหาน้ำ 0.2% กรด metaphosphoric/เม ทานอล (95:5 และ 90:10, v/v) 0.2% กรด metaphosphoric/acetonitrile metaphosphoric 0.2% (95:5 และ90:10, v/v) และ 0.2% กรด metaphosphoric/เม ทานอ ล/acetonitrile (90:5:5, v/v/v) คอลัมน์ inC18 (λ = 254 nm) ระยะที่เคลื่อนมีไม่แสดงการตอบสนองที่เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์หาปริมาณกรดแอสคอร์บิคเนื่องจากพวกเขาไม่สามารถระบุกลูตาไธโอนต้านอนุมูลอิสระ เป็นส่วนประกอบของการเตรียมยา/เครื่องสำอาง และให้เวลาเก็บรักษาไม่เหมาะสมสำหรับสารใช้งานอยู่ (≈1 นาที) มือถือทำงาน ระยะ กรด 0.2% metaphosphoric / acetonitrile เมทานอล (90:8:2, v/v/v), มีเวลา ≈3.5 นาที ให้ความละเอียดของกรดแอสคอร์บิคจากกรด nicotinic แสดงใน Fig. 1 และอื่น ๆ excipients จากสูตรเฉพาะมียอดเขาที่คมชัด และสมมาตร เงินประกันผลงานสำหรับการยกระดับ และหลีกเลี่ยง interferences จากอุปกรณ์เสียง นอกจากนี้ ระยะนี้มือถือมีการรายงานเพื่อรักษาชีวิตคอลัมน์อีกต่อไป เงื่อนไขการทดลองสุดท้ายถูกตั้งค่าตามที่อธิบายไว้ในส่วน 2.1 และ 2.42. แบบดอกไม้ แบบดอกไม้ที่ถูกศึกษาช่วงความเข้มข้นของ 1.0 – 12.0_gmL−1 ประเมินอิทธิพลของ excipients จากสูตรเฉพาะ แบบดอกไม้ถูกยังเรียน มีอิมัลชัน o/w และเจอควีฟรีการ analyte และสัญญาณรบกวนที่ พบ รักษาความสัมพันธ์เชิงเส้น และสัดส่วน เหมือนกับของสามฉีดถูกดำเนินการสำหรับแต่ละตัวอย่าง เส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นตามยอดอัตราส่วนของกรด nicotinic/กรด แอสคอร์บิคและยอดสำหรับความเข้มข้นของกรดแอสคอร์บิค ผลลัพธ์แสดงพฤติกรรมน่าพอใจ และสอดคล้องของวิธีบ่งชี้เสถียรภาพ HPLC Fig. 1 Chromatogram ของกรดแอสคอร์บิคมาตรฐาน กลูตาไธโอน เป็นโซเดียม กรดออกซาลิก และกรด nicotinic ภายในมาตรฐานที่ 254 nm ระยะเคลื่อน 0.2% กรด metaphosphoric / เมทานอล / acetonitrile (90:8:2, v/v/v) วิเคราะห์การถดถอยแบบกำลังสองน้อยสุดที่ใช้ประเมินข้อมูลช่วงความเข้มข้นที่พบแบบดอกไม้ดีกว่าช่วงที่ศึกษา กับ r2 ≥0.99 ถดถอยเชิงเส้นคือ y = 0.0732x−0.0141, y คือ อัตราของพื้นที่สูงกรด nicotinic/กรด แอสคอร์บิค และ x เป็นความเข้มข้นของ ascorbicacid (_gmL−1) ที่3. specificity Specificity HPLC เสถียรภาพระบุวิธีการสำหรับการวิเคราะห์หาปริมาณกรดแอสคอร์บิคในการเตรียมยา/เครื่องสำอางถูกตรวจสอบเพื่อให้ได้ตัวบ่งชี้ของ interferents ได้จาก excipients เตรียมเฉพาะ กรด nicotinic และผลิตภัณฑ์ย่อยสลายของสารใช้งานอยู่ กรดออกซาลิก ของ excipients อิมัลชัน o/w และอควีเจล (Fig. 2), รวมทั้งกลูตาไธโอนสารต้านอนุมูลอิสระเป็นโซเดียม และกรดออกซาลิกไม่ทำให้เกิดสัญญาณรบกวนใด ๆ กับพีคกรดแอสคอร์บิค ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ กรดแอสคอร์บิคได้สังเกตให้ดีแก้ไขจากส่วนประกอบของสูตรและ C. วิตามินผลิตภัณฑ์ย่อยสลายเป็นไปได้4. ความถูกต้องสำหรับกู้คืนและความแม่นยำ ความถูกต้อง/กู้คืนถูกคำนวณสำหรับทำเก้าของแต่ละ o/w อิมัลชันและเจอควี ผล บันทึกไว้ในตารางที่ 1 ระบุเปอร์เซ็นต์ความเพียงพอของความถูกต้อง/กู้คืน (อิมัลชันน้ำในน้ำมัน 98.97-100.84% เจอควี 95.46-101.54%) วิธี stabilityindicating HPLC ในการวิเคราะห์หาปริมาณกรดแอสคอร์บิคจากเตรียมยา / เครื่องสำอาง ในการคำนวณแม่นยำ days อินทรา และ inter ได้ดำเนินการทดสอบ และผลลัพธ์ถูกแสดงเป็นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (R.S.D. %) ในอัตราส่วนพื้นที่ของกรด nicotinic/กรด แอสคอร์บิค ค่าเปอร์เซ็นต์ต่ำสุดของ R.S.D. (0.38 และ 1.22%) ไม่มีหลักฐานของความเหมาะสมของวิธีการนี้ stabilityindicating ซึ่งให้ความแปรผันที่เกี่ยวข้องกับข้อมูล assayed 3 (ค่าเฉลี่ยของฉีด 10) และ 6 วัน (ค่าเฉลี่ยของ 6 ฉีด) Fig. 2 Chromatogram ของยา/เครื่องสำอางสูตร (o/w อิมัลชันและเจอควี) ฟรี analyte ที่ 254 nm ระยะเคลื่อน 0.2% กรด metaphosphoric/เม ทานอ ล/acetonitrile (90:8:2, v/v/v)5. ข้อจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) และนับ (LOQ) ลอดถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นของสารต่ำสุดที่สามารถถูกกำหนด โดยวิธี อย่างไรก็ตาม ไม่มีคำนวณอย่างแม่นยำ และถูกต้อง LOQ เป็นความเข้มข้นของตัวอย่างในการวิเคราะห์ที่ได้รับ มีความแม่นยำเพียงพอและความถูกต้อง การประเมินขีดจำกัดสามารถทำได้ โดยกำหนดอัตราส่วนสัญญาณ/สัญญาณรบกวนของ 3:1 (ลอด) และ 10:1 (LOQ) สำหรับวิธีนี้ stabilityindicating HPLC ค่าลอดและ LOQ พบ ≈0.17_gmL−1 และ ≈0.05 ตามลำดับ ตารางที่ 2 สรุปข้อมูลทดลองสำหรับ HPLC บ่งชี้เสถียรภาพวิธีพารามิเตอร์4. บทสรุป วิธีการระบุเสถียรภาพ HPLC การวิเคราะห์หาปริมาณกรดแอสคอร์บิคใน semisolid ยา / เครื่องสำอางเตรียมประกอบด้วยกลูตาไธโอนและโซเดียมเป็น เป็นสารต้านอนุมูลอิสระในปัจจุบันการศึกษาได้ถูกตรวจสอบ โดยแบบดอกไม้ กู้เพียงพอถูกต้อง และความแม่นยำ ตลอดจนค่าต่ำสุดของขีดจำกัดของการตรวจจับและนับ การนำเสนอความไวของเครื่องมือวิเคราะห์ ความเรียบง่ายของต้นทุนต่ำไม่ใช้เวลาเทคนิคและ specificity สูงกับกรดแอสคอร์บิค แม้ในต่อหน้าของหลากหลายผลิตภัณฑ์ย่อยสลายได้ กรดออกซาลิก และ excipients ให้วิธีนี้บ่งชี้ความมั่นคงเพื่อให้น่าสนใจโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับความมุ่งมั่นของกรดแอสคอร์บิค o/w อิมัลชันและเจอควีเหล่านี้ หรือ ในสูตรยา/เครื่องสำอางอื่น ๆ คล้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แม่นยำคำนวณเป็นค่าความเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD,%) ที่ได้รับในสองระดับทั้งใน (10 ฉีด / วันเป็นเวลา 3 วัน) และวันที่ระหว่าง (ฉีดหนึ่ง / วันเป็นเวลา 6 วัน) ประมาณ 50 มิลลิกรัมของกรด nicotinic; 50, 150 และ 250 มิลลิกรัมของสูตรเฉพาะที่วิเคราะห์ฟรี; และ 5, 15 และ 25 มิลลิกรัมของวิตามินซีมาตรฐานได้รับการชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและละลายแยกต่างหากใน 50mL ของเฟสเคลื่อนที่ที่มีต่อการผสม ตัวอย่างหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง (24.0 ± 2.0 ◦C) supernatants ถูกโยนทิ้ง
เพื่อให้เกิดความถูกต้อง / กู้คืน aliquots ของตัวอย่างถูกเจือจางความเข้มข้นสุดท้ายของ 2.0, 6.0 และ 10.0 _gmL-1 ของวิตามินซีมาตรฐานและ 20.0 _gmL-1 ของกรด nicotinic ในเฟสเคลื่อนที่ เพื่อให้ได้ความแม่นยำทั้งในและระหว่างวิ่งตัวอย่างถูกเจือจางความเข้มข้นสุดท้ายของวิตามินซี 6.0 และ 20.0_gmL-1 ของกรด nicotinic
8 ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) และปริมาณ (LOQ)
ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบและปริมาณถูกกำหนดโดยเจือจางอนุกรมของโซลูชั่นวิตามินซีเพื่อให้ได้อัตราส่วนสัญญาณ / เสียงของ≈3: 1 สำหรับ LOD และ≈10: 1 สำหรับ LOQ
ประมาณ 25 มิลลิกรัมของวิตามินซีมาตรฐานได้รับการชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและละลายใน 50 มลของเฟสเคลื่อนที่ จำนวนเงินที่เหมาะสมของสารละลายกรดแอสคอบิมาตรฐานถูกเจือจางความเข้มข้นต้องการ 0.03, 0.05, 0.1 และ 1.0_gmL-1.Working โซลูชั่นมาตรฐานได้จัดทำขึ้นซ้ำสาม
ผลลัพธ์และการอภิปราย
1 ตัวเลือกของเฟสเคลื่อนที่
ก่อนที่จะมีการทดสอบการตรวจสอบเงื่อนไขโครมาสำหรับวิธีเสถียรภาพแสดง HPLC มีการศึกษาเพื่อให้บรรลุความเหมาะสมของระบบที่เหมาะสม
องค์ประกอบขั้นตอนการมือถือได้รับการทดสอบกับเมทานอล / ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ + tetrabutylammonium (30:70 และ 70:30 , v / v) ในคอลัมน์ C8 (λ = 254 นาโนเมตร); และ 0.2% กรด metaphosphoric ในการแก้ปัญหาน้ำ 0.2% metaphosphoric กรด / เมทานอล (95: 5 90:10, v / v) 0.2% metaphosphoric กรด / acetonitrile (95: 5
90:10, v / v) และ 0.2 % metaphosphoric กรด / เมทานอล / acetonitrile (90: 5: 5, v / v / v) คอลัมน์ inC18 (λ = 254 นาโนเมตร) ขั้นตอนที่มือถือยังไม่ได้นำเสนอการตอบสนองที่เพียงพอสำหรับปริมาณวิตามินซีเนื่องจากพวกเขาไม่สามารถที่จะระบุตัวตนของกลูตาไธโอนสารต้านอนุมูลอิสระเป็นส่วนประกอบของยา / การเตรียมเครื่องสำอางและให้เวลาการเก็บรักษาที่ไม่เหมาะสมสำหรับสารที่ใช้งานอยู่ (≈1นาที)
การทำงาน เฟสเคลื่อนที่ 0.2% metaphosphoric กรด / เมทานอล / acetonitrile (90: 8: 2, v / v / v), มีการยกระดับเวลาการเก็บรักษาเพื่อ≈3.5นาทีให้ความละเอียดของวิตามินซีจากกรดนิโคตินิ, แสดงในรูปที่ 1 และสารเพิ่มปริมาณอื่น ๆ จากสูตรเฉพาะที่มียอดคมชัดและสมมาตรและหลีกเลี่ยงการรบกวนจากเสียงอุปกรณ์ นอกจากนี้ขั้นตอนการมือถือนี้ได้รับการรายงานที่จะรักษาชีวิตของคอลัมน์อีกต่อไป เงื่อนไขในการทดลองขั้นสุดท้ายที่ตั้งอยู่ตามที่อธิบายไว้ในมาตรา 2.1 และ 2.4
2 เส้นตรง
เป็นเส้นตรงที่ได้รับการศึกษาในช่วงความเข้มข้นของ 1.0-12.0_gmL-1 เพื่อประเมินอิทธิพลของสารเพิ่มปริมาณจากสูตรเฉพาะที่เป็นเส้นตรงได้ศึกษายังมีการปรากฏตัวของ o / w อิมัลชันเจลและสารปราศจากน้ำและไม่มีการแทรกแซงที่พบการบำรุงรักษาเชิงเส้นและความสัมพันธ์ตามสัดส่วน ซ้ำสามฉีดได้ดำเนินการสำหรับตัวอย่างแต่ละ
กราฟมาตรฐานที่สร้างขึ้นตามยอดอัตราส่วนของวิตามินซี / กรด nicotinic เมื่อเทียบกับยอดสำหรับความเข้มข้นของวิตามินซี ผลแสดงให้เห็นถึงพฤติกรรมที่น่าพอใจและสอดคล้องกันของ HPLC เสถียรภาพแสดงให้เห็นวิธีการรูปที่ 1 Chromatogram ของกรดมาตรฐานวิตามินซี, กลูตาไธโอนโซเดียม metabisulfite กรดออกซาลิกและกรด nicotinic ภายในมาตรฐานที่ 254 นาโนเมตร เฟสเคลื่อนที่เป็น 0.2% metaphosphoric กรด / เมทานอล / acetonitrile (90: 8: 2, v / v / v) การวิเคราะห์การถดถอยอย่างน้อยสี่เหลี่ยมถูกใช้ในการประเมินข้อมูลความเข้มข้นที่แสดงให้เห็นเป็นเส้นตรงที่ดีกว่าช่วงเวลาที่ศึกษากับ r2 ≥ 0.99 การถดถอยเชิงเส้นคือ y = 0.0732x-0.0141, ที่ y เป็นอัตราของวิตามินซี / nicotinic พื้นที่สูงสุดกรดและ x คือความเข้มข้นของ ascorbicacid (_gmL-1) 3 ความจำเพาะเจาะจงของวิธี HPLC เสถียรภาพแสดงสำหรับซีปริมาณกรดในยา / การเตรียมเครื่องสำอางที่ได้รับการตรวจสอบเพื่อให้ได้บ่งบอกถึงความเป็นไปได้ interferents จากสารเพิ่มปริมาณของการเตรียมการเฉพาะกรด nicotinic และผลิตภัณฑ์ย่อยสลายของสารที่ใช้งานอยู่ กรดออกซาลิการปรากฏตัวของสารเพิ่มปริมาณของ o / w อิมัลชันและเจลน้ำ (รูปที่ 2.) รวมทั้งกลูตาไธโอนสารต้านอนุมูลอิสระและโซเดียม metabisulfite และกรดออกซาลิกไม่ได้ทำให้เกิดการรบกวนกับยอดวิตามินซีใด ๆ ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้วิตามินซีเป็นข้อสังเกตที่จะได้รับการแก้ไขอย่างดีจากส่วนประกอบของสูตรและผลิตภัณฑ์ย่อยสลายที่มีศักยภาพของวิตามินซี4 ความถูกต้องกู้คืน / และความแม่นยำแม่นยำ / กู้คืนที่คำนวณได้เก้าวิ่งของแต่ละวิธีการแก้ปัญหาที่เกี่ยวข้องกับทั้ง o / w อิมัลชันและเจลน้ำ ผลการบันทึกไว้ในตารางที่ 1 แสดงค่าร้อยละของความถูกต้องเพียงพอ / กู้คืน (น้ำมันในน้ำอิมัลชัน 98.97-100.84%; น้ำเจล 95.46-101.54%) ของวิธีการ stabilityindicating HPLC หาปริมาณวิตามินซีจากยา / การเตรียมเครื่องสำอาง . ในการคำนวณความแม่นยำการทดสอบทั้งในและระหว่างวันที่ได้ดำเนินการและผลที่ได้แสดงเป็นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD,%) ในแง่ของอัตราส่วนพื้นที่ของวิตามินซี / กรด nicotinic ค่าร้อยละต่ำของ RSD (0.38 และ 1.22%) เป็นหลักฐานของความแม่นยำของวิธีการที่เหมาะสม stabilityindicating นี้ซึ่งให้ความแปรปรวนที่ไม่เกี่ยวข้องของข้อมูล assayed 3 (เฉลี่ย 10 ฉีด) และ 6 วัน (ค่าเฉลี่ยของการฉีด 6) . รูปที่ 2 Chromatogram ของยา / สูตรเครื่องสำอาง (o / w อิมัลชันและเจลน้ำ) วิเคราะห์ฟรีที่ 254 นาโนเมตร เฟสเคลื่อนที่เป็น 0.2% metaphosphoric กรด / เมทานอล / acetonitrile (90: 8: 2, v / v / v) 5 ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) และปริมาณ (LOQ) LOD ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดของสารที่ใช้งานซึ่งจะถูกกำหนดโดยวิธีการ แต่ไม่ได้คำนวณอย่างแม่นยำและถูกต้อง LOQ คือความเข้มข้นของกลุ่มตัวอย่างในการวิเคราะห์ที่ได้รับด้วยความแม่นยำและความถูกต้องเพียงพอ การประเมินข้อ จำกัด สามารถทำได้โดยการกำหนดอัตราส่วนสัญญาณ / เสียง 3: 1 (LOD) และ 10: 1 (LOQ) สำหรับวิธีการ stabilityindicating นี้ HPLC, LOD และ LOQ ค่าพบว่า≈0.05และ≈0.17_gmL-1 ตามลำดับ ตารางที่ 2 สรุปข้อมูลการทดลองสำหรับ HPLC เสถียรภาพแสดงพารามิเตอร์วิธี4 สรุปHPLC เสถียรภาพแสดงให้เห็นวิธีการของปริมาณวิตามินซีในยากึ่งของแข็ง / การเตรียมเครื่องสำอางที่มีส่วนผสมของกลูตาไธโอนและโซเดียม metabisulfite เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่อธิบายไว้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการตรวจสอบโดยเป็นเชิงเส้นความถูกต้องกู้คืน / เพียงพอและความแม่นยำเช่นเดียวกับค่าต่ำของข้อ จำกัด ของการตรวจสอบและปริมาณนำเสนอความไวของเครื่องมือวิเคราะห์นี้ ความเรียบง่ายของต้นทุนต่ำที่ไม่ใช้เทคนิคที่เวลาและความจำเพาะสูงในวิตามินซีแม้จะอยู่ในที่ที่มีความหลากหลายของสารเพิ่มปริมาณและผลิตภัณฑ์ย่อยสลายที่เป็นไปได้ของกรดออกซาลิกที่ให้วิธีเสถียรภาพแสดงนี้จะเป็นโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่น่าสนใจสำหรับ ความมุ่งมั่นของวิตามินซีเหล่านี้ o / w อิมัลชันและเจลน้ำหรือใน / สูตรยาอื่น ๆ ที่คล้ายกันเครื่องสำอาง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเที่ยงตรง คำนวณเป็นค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ ( r.s.d. , % ) ได้ใน 2 ระดับ : ภายใน ( 10 ฉีด / วัน เป็นเวลา 3 วัน และระหว่างวัน ( หนึ่งฉีด / วัน , 6 วัน ) ประมาณ 50 มิลลิกรัม กรดนิโคตินิก ; 50 , 150 และ 250 มิลลิกรัมของครู topical สูตรฟรี และ 5 , 15 และ 25 มิลลิกรัม กรดแอสคอร์บิคมีน้ำหนักมาตรฐานแน่นอน และยุบ แยกใน 50 ของเฟสเคลื่อนที่ กับภายหลังการผสม จำนวนระดับที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ( 24.0 ± 2.0 ◦ C ) supernatants ถูกละทิ้ง .
เพื่อให้เกิดความถูกต้อง / กู้เฉยๆของตัวอย่างเพื่อลดความเข้มข้นสุดท้ายของ 2.0 6.0 และ 10.0 _gml − 1 ของ กรดแอสคอร์บิกมาตรฐานและ 20.0 _gml − 1 ของไซโตโครมในเฟสเคลื่อนที่ที่จะได้รับภายในและระหว่างวิ่งแน่นอน ตัวอย่าง เพื่อลดความเข้มข้นของกรดแอสคอร์บิกสุดท้ายของ 6.0 และ 20.0_gml − 1 กรดนิโคตินิก .
8 ขีดจำกัดของการตรวจหา ( LOD ) และปริมาณ ( loq )
ขีดจำกัดของการตรวจหาและปริมาณวิเคราะห์โดยวิธีการต่อเนื่องของกรดแอสคอร์บิค โซลูชั่นเพื่อรับสัญญาณ / เสียงอัตราส่วน 3 : 1 และ 10 : 1 แต่≈สำหรับ≈สำหรับ loq .
ประมาณ 25 มิลลิกรัม กรดแอสคอร์บิคเป็นมาตรฐานแน่นอน และน้ำหนัก 50 มิลลิลิตร ละลายในเฟสเคลื่อนที่ ในปริมาณที่เหมาะสม มาตรฐาน กรดแอสคอร์บิก โซลูชั่นเพื่อลดความต้องการความเข้มข้น 0.03 , 0.05 , 0.1 และ 1.0_gml − 1.working มาตรฐานโซลูชั่นเตรียมซ้ำ และการอภิปรายผล 3 .

1 . การเลือกของเฟสเคลื่อนที่
ก่อนที่จะทำการตรวจสอบว่า เงื่อนไข และวิธีการสำหรับ HPLC ความมั่นคงระบุการวิจัยเพื่อให้เกิดความเหมาะสมของระบบที่เหมาะสม .
เฟสเคลื่อนที่ส่วนประกอบทดสอบกับเมทานอล / ฟอสเฟตบัฟเฟอร์โมลาร์ ( 30 : 70 และ 70 : 30 , v / v ) ในคอลัมน์ ( ดองλ = 254 nm ) ; และ 0.2% เมตทาฟอสฟอริกแอซิดในน้ำ โซลูชั่น 0 .2 % เมทานอลเมตทาฟอสฟอริกแอซิด / ( 95:5 และรูป v / v ) 0.2% ไนเมตทาฟอสฟอริกแอซิด / ( 95:5 และ
รูป v / v ) และ 0.2% เมตทาฟอสฟอริกแอซิด / เมทานอล / ไน ( 90:5:5 , V / V / V ) คอลัมน์ inc18 ( λ = 254 nm ) มือถือเหล่านั้นมีไม่เพียงพอการเสนอและกรดแอสคอร์บิกเซลล์ตั้งแต่พวกเขาไม่สามารถระบุกลูตาไธโอนสารต้านอนุมูลอิสระ