2.5. MALDI-TOF MS Identification of

2.5. MALDI-TOF MS Identification of Resistant Strains of S. aureus
The following extraction protocol and sample preparation wasbased on MALDI Biotyper 3.0 User Manual Revision 2, similarextraction method was used also in (Sauer et al., 2008). A sam-ple of 500 l S. aureus (0.1 OD) culture, cultivated overnight, wascentrifuged at 14.000 × g for 2 min. The supernatant was discardedand the pellet was resuspended in 300 l of deionized water and 900 l of ethanol was added. After centrifugation at 14.000 × g for2 min, the supernatant was discarded and the obtained pellet wasair-dried. The pellet was then dissolved in 25 l of 70% formic acid(v/v) and 25 l of acetonitrile and mixed. The samples were cen-trifuged at 14.000 × g for 2 min and 1 l of the clear supernatantwas spotted in duplicate onto the MALDI target (MTP 384 targetpolished steel plate; Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Germany)and air-dried at room temperature. Then, each spot was overlaidwith 1 l of saturated -cyano-4-hydroxycinnamic acid (HCCA)matrix solution in organic solvent (50% acetonitrile and 2.5% trifluo-roacetic acid, both v/v) and air-dried completely prior to MALDI-TOFMS measurement on UltrafleXtreme MS (Bruker Daltonik GmbH,Bremen, Germany). Spectral data were taken in the m/z range of2.000 Da to 20.000 Da, and each was a result of the accumulationof at least 1000 laser shots obtained from ten different regions ofthe same sample spot. These data were analysed with the FlexAnalysis software (Version 3.4). Prior to analysis, the mass spec-trometer was externally calibrated with a peptide mix of bombesin,angiotensin I, glu-fibrinopeptide B, adrenocorticotropic hormone(ACTH) (18-39), ubiquitin, and cytochrome c. Spectra with peaksoutside the allowed average were not considered. Modified spectrawere loaded into the MALDI BioTyperTM3.1 Version (Bruker Dal-tonik GmbH, Bremen, Germany). Pictures of sample-matrix crystalswere taken by built-in camera.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 MALDI-TOF MS ประจำตัวประชาชนของทนสายพันธุ์ของเชื้อ S. aureus
โปรโตคอลการสกัดต่อไปนี้และเตรียมตัวอย่าง wasbased ใน MALDI Biotyper 3.0 ผู้ใช้ Revision คู่มือ 2 วิธี similarextraction ก็ยังใช้ใน (ซาวเออร์ et al., 2008) sam-ple 500? L เชื้อ S. aureus (0.1 OD) วัฒนธรรมการเพาะปลูกในชั่วข้ามคืน wascentrifuged ที่ 14.000 กรัม× 2 นาที ใสเป็น discardedand เม็ดที่ถูก resuspended ใน 300? ลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออนและ 900? ลิตรเอทานอลถูกเพิ่มเข้ามา หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 14.000 ×กรัม for2 นาที, ใสถูกทิ้งและเม็ดที่ได้รับ wasair แห้ง เม็ดก็เลือนหายไปแล้วใน 25? ลิตร 70% กรด (v / v) และ 25? ลิตร acetonitrile และผสม ตัวอย่าง CEN-trifuged ที่ 14.000 กรัม× 2 นาทีและ 1 ลิตร supernatantwas ชัดเจนด่างในที่ซ้ำกันไปยังเป้าหมาย MALDI (MTP แผ่นเหล็ก 384 targetpolished; Bruker Daltonik GmbH, เบรเมน, เยอรมนี)? และอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้อง . จากนั้นแต่ละจุดเป็น overlaidwith 1? ลิตรอิ่มตัว? -cyano-4-hydroxycinnamic กรด (HCCA) สารละลายเมทริกซ์ในตัวทำละลายอินทรีย์ (acetonitrile 50% และกรด trifluo-roacetic 2.5% ทั้ง v / v) และอากาศแห้งก่อนที่สมบูรณ์ เพื่อ MALDI-TOFMS วัดใน UltrafleXtreme MS (Bruker Daltonik GmbH, เบรเมน, เยอรมนี) ข้อมูลสเปกตรัมถูกถ่ายในช่วงม. / Z of2.000 ดา 20.000 ดาและแต่ละคนเป็นผลมาจาก accumulationof อย่างน้อย 1000 ภาพเลเซอร์ที่ได้รับจากสิบภูมิภาคที่แตกต่างกัน ofthe จุดตัวอย่างเดียวกัน ข้อมูลเหล่านี้ถูกนำมาวิเคราะห์ด้วยซอฟต์แวร์ที่ FlexAnalysis (เวอร์ชั่น 3.4) ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์มวลจำเพาะ-trometer ได้รับการสอบเทียบภายนอกด้วยส่วนผสมของเปปไทด์ bombesin, angiotensin ผม Glu-fibrinopeptide B, ฮอร์โมน adrenocorticotropic (ACTH) (18-39), ubiquitin และ cytochrome ค Spectra กับ peaksoutside เฉลี่ยได้รับอนุญาตไม่ได้พิจารณา ดัดแปลง spectrawere โหลดลงใน MALDI BioTyperTM3.1 รุ่น (Bruker Dal-Tonik GmbH, เบรเมน, เยอรมนี) รูปภาพของตัวอย่างเมทริกซ์ crystalswere ถ่ายด้วยกล้องในตัว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 maldi-tof MS ประจำตัวของสายพันธุ์ที่ทนของ S . aureus
ขั้นตอนการสกัดและการเตรียมตัวอย่างจากมา ดิ biotyper 3.0 ผู้ใช้คู่มือฉบับที่ 2 ต่อไปนี้ วิธีที่ใช้ใน similarextraction ( Sauer et al . , 2008 ) เป็นแซมเปิ้ลของ 500  L S . aureus ( 0.1 OD ) วัฒนธรรมเพาะปลูกข้ามคืน wascentrifuged ที่ 14.000 × G 2 นาทีส่วนนำเป็น discardedand เม็ดเป็น resuspended 300  ล. คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำและ 900  ลิตรเอทานอลถูกเพิ่มเข้ามา หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 14.000 ×กรัม for2 มิน น่านถูกทิ้งและนำเม็ด wasair แห้ง เม็ดแล้วละลายใน 25  ผม 70% กรด ( v / v ) และ 25  ลิตรไนไตรล์ผสม จำนวนศูนย์ trifuged ที่ 14000 × G 2 นาทีและ 1  L ของ supernatantwas ล้างด่างในซ้ำลงบนเป้าหมายมา ดิ ( MTP 384 targetpolished เหล็กเพลท บรุคเกอร์ daltonik GmbH , เบรเมน , เยอรมัน ) และอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้อง แล้ว แต่ละจุดก็ overlaidwith 1  ผมอิ่มตัว  - cyano-4-hydroxycinnamic acid ( hcca ) เมทริกซ์โซลูชั่นในตัวทำละลายอินทรีย์ ( ไน 50% และ 2.5% trifluo roacetic กรด2 v / v ) และอากาศแห้งสนิทก่อนที่จะวัด maldi-tofms บน ultraflextreme MS ( BRUKER daltonik GmbH , เบรเมน , เยอรมัน ) ข้อมูลสเปกตรัมถ่าย M / Z ช่วง of2.000 ดาไป 20.000 ดา และแต่ละมีการสะสมอย่างน้อย 1000 ยิงเลเซอร์ที่ได้จาก 10 ภูมิภาคต่าง ๆของตัวอย่างเดียวกันจุด ข้อมูลเหล่านี้มาวิเคราะห์ด้วย flexanalysis ซอฟต์แวร์ ( รุ่น 4 )ก่อนที่จะวิเคราะห์มวลสเป็ค trometer คือภายนอกเทียบกับเปปไทด์ ผสมความขยันขันแข็งแบบฉัน , ซึ่ง fibrinopeptide B , แผนกลยุทธ์ ( ACTH ) ( 18-39 ) ข้างนอก และไซโตโครม ซี ให้กับ peaksoutside อนุญาตเฉลี่ยจะไม่พิจารณา spectrawere แก้ไขโหลดเข้ามา ดิ biotypertm3.1 รุ่น ( BRUKER ดัล tonik GmbH , เบรเมน , เยอรมัน )ภาพตัวอย่างที่ถ่ายโดยเมทริกซ์ crystalswere ในตัวกล้อง