Improvements in purification of mem

Improvements in purification of membrane-associated methane monooxygenase (pMMO) have resulted in preparations of pMMO with activities more representative of physiological rates: i.e., >130 nmol · min−1 · mg of protein−1. Altered culture and assay conditions, optimization of the detergent/protein ratio, and simplification of the purification procedure were responsible for the higher-activity preparations. Changes in the culture conditions focused on the rate of copper addition. To document the physiological events that occur during copper addition, cultures were initiated in medium with cells expressing soluble methane monooxygenase (sMMO) and then monitored for morphological changes, copper acquisition, fatty acid concentration, and pMMO and sMMO expression as the amended copper concentration was increased from 0 (approximately 0.3 μM) to 95 μM. The results demonstrate that copper not only regulates the metabolic switch between the two methane monooxygenases but also regulates the level of expression of the pMMO and the development of internal membranes. With respect to stabilization of cell-free pMMO activity, the highest cell-free pMMO activity was observed when copper addition exceeded maximal pMMO expression. Optimization of detergent/protein ratios and simplification of the purification procedure also contributed to the higher activity levels in purified pMMO preparations. Finally, the addition of the type 2 NADH:quinone oxidoreductase complex (NADH dehydrogenase [NDH]) from M. capsulatus Bath, along with NADH and duroquinol, to enzyme assays increased the activity of purified preparations. The NDH and NADH were added to maintain a high duroquinol/duroquinone ratio.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปรับปรุงในการทำให้บริสุทธิ์ของ monooxygenase เยื่อเกี่ยวข้องมีเทน (pMMO) มีผลในการเตรียมการของ pMMO มีกิจกรรมมากขึ้นตัวแทนของทางสรีรวิทยาราคา: เช่น > 130 นาโนโมล· min−1 · มิลลิกรัมของ protein−1 มีการเปลี่ยนแปลงวัฒนธรรมและทดสอบเงื่อนไข การเพิ่มประสิทธิภาพของผงซักฟอก/โปรตีน และเข้าใจง่ายของขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์รับผิดชอบการเตรียมกิจกรรมสูง การเปลี่ยนแปลงในสภาพวัฒนธรรมเน้นอัตรานอกจากนี้ทองแดง เอกสารกิจกรรมทางสรีรวิทยาที่เกิดขึ้นในระหว่างเพิ่มทองแดง วัฒนธรรมเริ่มต้นในเซลล์แสดง monooxygenase มีเทนละลาย (sMMO) และจากนั้น ตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงสัณฐาน ซื้อทองแดง ความเข้มข้นของกรดไขมัน และ pMMO และ sMMO แสดงออกเป็นความเข้มข้นของทองแดงแก้ไขเพิ่มจาก 0 (ประมาณ 0.3 ไมครอน) เป็นμ m 95 ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า ทองแดงไม่เพียงควบคุมการสลับ monooxygenases มีเทนสองเผาผลาญ แต่ยัง ควบคุมระดับการแสดงออกของ pMMO การและการพัฒนาเยื่อหุ้มภายใน เกี่ยวกับเสถียรภาพของเซลล์ฟรี pMMO กิจกรรม กิจกรรม pMMO เซลล์ฟรีสูงสุดพบว่า เมื่อเพิ่มทองแดงเกินนิพจน์ pMMO สูงสุด เข้าใจง่ายของขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์และการเพิ่มประสิทธิภาพของผงซักฟอก/โปรตีนอัตราส่วนกิจกรรมระดับสูงในการเตรียม pMMO ที่บริสุทธิ์ ในที่สุด การเพิ่มการชนิด 2 NADH: quinone oxidoreductase ซับซ้อน (NADH พร่อง [ข้อมูล]) จาก M. capsulatus อาบน้ำ duroquinol และ NADH ไป assays เอนไซม์เพิ่มกิจกรรมการเตรียมการที่บริสุทธิ์ ข้อมูลและ NADH ถูกเพิ่มเพื่อรักษาอัตราส่วน duroquinol/duroquinone สูง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การปรับปรุงในการทำให้บริสุทธิ์ของเมมเบรนที่เกี่ยวข้องมีเทน การเปลี่ยนแปลงทางวัฒนธรรมและการทดสอบเงื่อนไขการเพิ่มประสิทธิภาพของอัตราการใช้ผงซักฟอก การเปลี่ยนแปลงในเงื่อนไขวัฒนธรรมที่มุ่งเน้นการเพิ่มอัตราทองแดง เอกสารที่เหตุการณ์ทางสรีรวิทยาที่เกิดขึ้นระหว่างนอกจากทองแดงวัฒนธรรมถูกริเริ่มในระดับปานกลางกับเซลล์แสดง ผลการแสดงให้เห็นว่าไม่เพียง แต่ทองแดงควบคุมการเผาผลาญอาหารสวิทช์ระหว่างสอง ด้วยความเคารพต่อการรักษาเสถียรภาพของกิจกรรม การเพิ่มประสิทธิภาพของผงซักฟอกอัตราส่วน ในที่สุดนอกเหนือจากชนิดที่ NDH

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การปรับปรุงในการฟอกเยื่อเกี่ยวข้องก๊าซมีเทน monooxygenase ( pmmo ) มีผลในการเตรียมของ pmmo กับกิจกรรมมากกว่าตัวแทนของอัตราสรีรวิทยา ได้แก่ > 130 ซึ่ง · มิน− 1  · มก. โปรตีน− 1 การเปลี่ยนแปลงวัฒนธรรมและเงื่อนไขโดยการเพิ่มประสิทธิภาพของผงซักฟอก / อัตราส่วนโปรตีนและหนึ่งเดียวของกระบวนการบำบัดน้ำเสีย รับผิดชอบการเตรียมกิจกรรมสูง การเปลี่ยนแปลงในเงื่อนไขวัฒนธรรมเน้นอัตราการเติมทองแดง เอกสารการศึกษาเหตุการณ์ที่เกิดขึ้นระหว่าง 2 ทองแดง วัฒนธรรมที่ถูกริเริ่มในระดับปานกลางกับเซลล์แสดงปริมาณก๊าซมีเทน monooxygenase ( smmo ) แล้วติดตามการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาทองแดงได้มา กรดไขมัน สมาธิ และ pmmo และการแสดงออก smmo เป็นมีความเข้มข้นของทองแดงมีค่าเพิ่มขึ้นจาก 0 ( ประมาณ 0.3 μ M ) μ 95 เมตร ผลลัพธ์ที่แสดงให้เห็นว่า ทองแดง ไม่เพียง แต่ควบคุมการเผาผลาญอาหารสลับระหว่างสองก๊าซมีเทน monooxygenases แต่ยังควบคุมระดับของการแสดงออกของ pmmo และการพัฒนาของเยื่อภายใน ด้วยความเคารพต่อเสถียรภาพของกิจกรรม pmmo การสังเคราะห์การสังเคราะห์ , สูงสุด pmmo กิจกรรมพบว่าเมื่อเพิ่มทองแดงเกินการแสดงออก pmmo สูงสุด การเพิ่มประสิทธิภาพของผงซักฟอกในอัตราส่วนโปรตีนและหนึ่งเดียวของกระบวนการผลิตยังสนับสนุนกิจกรรมในระดับที่สูงขึ้นทำให้การเตรียม pmmo . ในที่สุด การเพิ่มประเภท 2 การควิโนนอ ซิโดรีดักเทส ( NADH dehydrogenase ซับซ้อน [ ndh ] ) จากม. capsulatus บาท พร้อมกับการ duroquinol ตรวจเอนไซม์และการเพิ่มกิจกรรมให้เตรียมการ โดยการเพิ่มและ ndh เพื่อรักษาอัตราส่วน duroquinol / duroquinone สูง