Results and discussionThe initial s

Results and discussion
The initial synthesis of phytoene and its 4-step desaturation and
isomerization to lycopene was engineered into rice callus in combination
with a bacterial carotenoid ketolase (Fig. 1). Expression of
carotenoid ketolase and all other transgenes has been shown previously
(Bai et al.2013). Fig. 2A shows the HPLC carotenoid profile
of a typical transgenic line. Two carotenes were synthesized by the
interaction of phytoene synthase and desaturase and the endogenous
lycopene cyclases, a-carotene (peak 5) and b-carotene (peak
6). The prominent carotenoid peak 1 at 6.7 min with the typical
bell shaped optical absorbance spectrum with its maximum at
475 nm resembles astaxanthin. This is the end product of the ketolation
pathway starting from b-carotene or zeaxanthin (Fig. 1)
which was initiated by the transgenic carotenoid ketolase. This enzyme
works by interaction with the endogenous b-carotene
hydroxylase which is active and specific enough for astaxanthin
synthesis. Two other peaks resemble intermediates of this pathway,
4-keto-zeaxanthin peak 2 and echinenone peak 4, both with
an asymmetrical bell shaped optical absorbance spectrum with a
maximum at 465 nm (Fig. 3B). The latter originated directly from
ketolation of b-carotene, the other by ketolation of zeaxanthin.
One compound which does not fit into this pathway is the
carotenoid represented by peak 3 (Fig. 2A). Its spectrum is shown
in Fig. 3A. Although it has a very similar shape to the spectrum
of echinenone (Fig. 3B) which may indicate a mono-keto carotenoid,
its maximum of 452 nm is 14 nm lower than that of echinenone.
The only known carotenoid with the same absorbance and shape of the spectrum is 4-ketolutein (Fig. 3C). This was extracted
from transgenic Nicotiana tabaccum nectary tissue transformed
with a cyanobacterial b-carotene ketolase gene (Gerjets et al.,
2007). However, it is more polar with a retention time of 7.5 min
compared to 12.2 min for peak 3 (Fig. 2B). From the spectrum
and the basic carotenoid pathway to a- and b-carotene related
compounds, 4-keto-b-zeacarotene (7,8-dihydro-b,w-carotene-4-
one) and 4-keto-a-carotene (b,e-carotene-4-one) are the most
likely candidates for the novel carotenoid molecule. Therefore,
we generated these mono keto carotenoids which should exhibit
not only a similar absorbance but also a similar polarity as reference
compounds by combinatorial biosynthesis in Escherichia coli
(Sandmann, 2002). In the case of 4-keto-b-zeacarotene the absorbance
maximum was the same as that of the novel compound
but the shape of the absorbance peak did not match (Fig. 3D). In
addition, this carotenoid did not co-chromatograph with
compound 3 due to its longer retention time (Fig. 2C). Only 4-
keto-a-carotene matched exactly the spectrum of compound 3
(Fig. 3E), it exhibited the same retention time in HPLC (Fig. 2D)
and co-chromatographied with peak 3 (Fig. 2E). For further confirmation
of the structure of compound 3, the carotenoid extract from
rice was reduced by sodium borohydride. This chemical modification
of the keto group was also carried out with the 4-keto-a-carotene
reference compound resulting in 4-HO-a-carotene. In each
case, a more polar compound was formed (Fig. 2D and F). The spectrum
of this hydroxy derivative shows the typical three maxima of
non-ketolated carotenoids exhibiting a hypsochromic shift to
442 nm of the main central maximum (Fig. 3F) for reduction of a
keto group conjugated with the polyene chain. The resulting spectrum
resembles that of a-carotene (Britton et al., 2004).
For further structure elucidation of peak 3, a mass spectrum
was determined by UHPLC-MS with atmospheric pressure chemical
ionisation identifying the [M+H]+ ions (Fig. 4A). The dominating
mass peak in the spectrum is the ion at m/z 552. This may resemble
the protonated molecular ion of compound 3 with a molecular
mass of 551 g/mol. Several carotenoid masses fit this value including
the one for echinenone with 550.86 g/mol (Rivera et al., 2011).
Starting from [M+H]+ ion of 552, transitions related to functional
groups in the carotenoid structures were built. The ones shown
in Fig. 4B were those with characteristic signals for identification.
The ones to identify an echinenone-related structure are the transitions
551.6 > 203.1 resulting from the cleavage at C-10,11 of a 4-
keto fragment as indicated in Fig. 4C (Van Breemen et al., 2012),
transition 551.6 > 93 by in-chain elimination of toluene and transition
551.6 > 69 previously reported for echinenone (Enzell et al.,
1969). One of the most intense transitions is 551.6 > 123.1. This
transition is a specific indicator of the existence of an e-ring in
the structure of compound 3 (Enzell and Back, 1995). Taken together
results from mass spectrometry suggest that compound 3
is a carotenoid combining the ketolated half of echinenone and
the other half with the e-ring of a-carotene (boxed in Fig. 4C). This
is consistent with 4-keto-a-carotene which has the same molecular
mass as echinenone.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลและการสนทนาPhytoene และ desaturation 4-ขั้นตอนการสร้างเริ่มต้น และisomerization ให้ lycopene มีวิศวกรรมเป็นแคลลัสข้าวรวมกับตัวแบคทีเรีย carotenoid ketolase (Fig. 1) ค่าของcarotenoid ketolase และ transgenes อื่น ๆ ทั้งหมดได้ถูกแสดงไว้ก่อนหน้านี้(ไบ et al.2013) Fig. 2A แสดงโพ carotenoid HPLCของถั่วเหลืองเส้นปกติ Carotenes สองถูกสังเคราะห์โดยการโต้ตอบ phytoene synthase desaturase และที่ endogenouslycopene cyclases, a-แคโรทีน (สูงสุด 5) และ b-แคโรทีน (สูงสุด6) . เด่น carotenoid ยอดสูง 1 ที่ 6.7 นาทีด้วยการทั่วไปกระดิ่งรูปสเปกตรัมแสง absorbance มีจำนวนสูงสุดที่475 nm คล้ายกับ astaxanthin เป็นผลิตภัณฑ์สุดท้ายของ ketolationทางเดินเริ่มจากบีแคโรทีน zeaxanthin (Fig. 1)ซึ่งเป็นจุดเริ่มต้น โดย ketolase carotenoid ถั่วเหลือง เอนไซม์นี้โดยติดต่อกับ endogenous บีนสูงhydroxylase ซึ่ง เป็นงานเฉพาะพอ astaxanthinสังเคราะห์ สองยอดอื่น ๆ คล้ายกับตัวกลางของทางเดินนี้ค 4-keto-zeaxanthin 2 และ echinenone สูงสุด 4 ด้วยเบลล์เป็น asymmetrical รูปสเปกตรัมแสง absorbance กับความสูงสุดที่ 465 nm (Fig. 3B) หลังมาโดยตรงจากketolation ของ b-แคโรทีน อื่น ๆ โดย ketolation zeaxanthinสารประกอบหนึ่งซึ่งสามารถเข้าทางเดินนี้เป็นการcarotenoid ที่แสดง โดยพีค 3 (Fig. 2A) แสดงสเปกตรัมของใน Fig. 3A แม้ว่าจะมีรูปร่างคล้ายกับของ echinenone (Fig. 3B) ซึ่งอาจแสดงเป็นโมโน keto carotenoidจำนวนสูงสุดของ 452 nm คือ 14 กว่าที่ echinenone nmCarotenoid รู้จักเท่ากับ absorbance และรูปร่างของคลื่นเหมือนกันคือ 4-ketolutein (Fig. 3C) นี้ถูกสกัดจากเนื้อเยื่อถั่วเหลือง Nicotiana tabaccum nectary แปลงกับยีน ketolase cyanobacterial บีแคโรทีน (Gerjets et al.,2007) . อย่างไรก็ตาม มันเป็นขั้วโลกมากขึ้น ด้วยเวลาคง 7.5 นาทีเมื่อเทียบกับนาทีที่ 12.2 สำหรับพีค 3 (Fig. 2B) จากสเปกตรัมการและทางเดิน carotenoid พื้นฐานการเป็น - และบีแคโรทีนที่เกี่ยวข้องสารประกอบ 4-keto-บี-zeacarotene (7,8-dihydro-b, w-แคโรทีน - 4 -หนึ่ง) และ 4-keto-เป็นแคโรทีน (บี อีแคโรทีน-4-1) มากที่สุดผู้สมัครที่มีแนวโน้มสำหรับโมเลกุล carotenoid นวนิยาย ดังนั้นเราสร้าง carotenoids keto โมโนเหล่านี้ซึ่งควรแสดงไม่เพียงแต่ absorbance คล้าย แต่ยังขั้วคล้ายกันเป็นการอ้างอิงสาร โดยการสังเคราะห์ปัญหาใน Escherichia coli(Sandmann, 2002) ในกรณีของ 4-keto-บี-zeacarotene absorbance ที่สูงสุดไม่เหมือนกับของสารประกอบนวนิยายแต่รูปร่างของยอด absorbance ไม่ตรง (Fig. 3D) ในนอกจากนี้ carotenoid นี้ไม่ไม่ร่วม chromatograph ด้วย3 ผสมเนื่องจากเวลาเก็บข้อมูลนาน (Fig. 2C) เพียง 4-keto ที่นสูงจับคู่ว่าสเปกตรัมของผสม 3(Fig. 3E), มันจัดแสดงเก็บรักษากันใน HPLC (Fig. 2D)และบริษัท chromatographied กับพีค 3 (Fig. 2E) ยืนยันเพิ่มเติมโครงสร้างผสม 3, carotenoid แยกจากข้าวลดลง โดย borohydride โซเดียม ปรับเปลี่ยนสารเคมีนี้ของ keto กลุ่มยังดำเนินการกับ 4-keto-เป็นแคโรทีนอ้างอิงผลใน 4-โฮจิมินห์เป็นแคโรทีน ในแต่ละกรณี สารประกอบมีขั้วถูกต้อง (Fig. 2D และ F) สเปกตรัมของอนุพันธ์นี้ hydroxy แสดงแมกสามทั่วไปของcarotenoids ไม่ ketolated กะ hypsochromic ไปอย่างมีระดับ442 nm หลักศูนย์กลางสูงสุด (Fig. 3F) สำหรับการลดการกลุ่ม keto กลวง ด้วยโซ่พอลิอีน สเปกตรัมได้มีลักษณะที่เป็นแคโรทีน (Britton et al., 2004)สำหรับการเพิ่มเติมโครงสร้าง elucidation สูงสุด 3 สเปกตรัมโดยรวมกำหนด โดย UHPLC MS กับสารเคมีความดันบรรยากาศระบุใน [M + H] ionisation + ประจุ (Fig. 4A) มีอำนาจเหนือโดยรวมสูงสุดในสเปกตรัมมีไอออนที่ m/z 552 นี้อาจมีลักษณะไอออนโมเลกุล protonated 3 ผสมกับโมเลกุลที่มวลของ 551 กรัม/โมล ฝูงหลาย carotenoid พอดีรวมถึงค่านี้หนึ่งสำหรับ echinenone มี g 550.86 โมล (ริเวอราร้อยเอ็ด al., 2011)เริ่มต้นจาก [M + H] + ไอออน 552 เปลี่ยนที่เกี่ยวข้องกับการทำงานกลุ่มโครงสร้าง carotenoid ถูกสร้างขึ้น ชื่อที่แสดงใน Fig. 4B ได้มีสัญญาณลักษณะสำหรับการระบุที่ระบุเป็นโครงสร้างที่เกี่ยวข้องกับ echinenone มีการเปลี่ยน551.6 > 203.1 เกิดจากปริที่ C-10,11 4 ตัว-ส่วน keto ตามที่ระบุใน Fig. 4C (Van Breemen et al., 2012),เปลี่ยน 551.6 > 93 โดยการตัดออกในห่วงโซ่ของโทลูอีนและเปลี่ยน551.6 > 69 รายงานก่อนหน้านี้สำหรับ echinenone (Enzell et al.,1969) . ช่วงรุนแรงที่สุดคือ 551.6 > 123.1 นี้เปลี่ยนเป็นตัวบ่งชี้เฉพาะของการดำรงอยู่ของตัวอีแหวนในโครงสร้างของ 3 ผสม (Enzell และกลับ 1995) ปวงแนะนำผลลัพธ์จากรเมทที่ผสม 3เป็น carotenoid รวม ketolated ครึ่งหนึ่งของ echinenone และอีกครึ่งหนึ่ง ด้วยอีแหวนของ a-แคโรทีน (กล่องกล่องใน Fig. 4C) นี้สอดคล้องกับ 4-keto-เป็นแคโรทีนซึ่งมีโมเลกุลเดียวโดยรวมเป็น echinenone

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และการอภิปรายผล
การสังเคราะห์เริ่มต้นของ phytoene และ desaturation 4 ขั้นตอนและของ
ไลโคปีน isomerization จะถูกออกแบบมาลงในแคลลัสข้าวในการรวมกัน
กับ carotenoid แบคทีเรีย ketolase (รูปที่ 1). การแสดงออกของ
ketolase carotenoid transgenes และอื่น ๆ ได้รับการแสดงก่อนหน้านี้
(ใบ et al.2013) มะเดื่อ แสดงให้เห็นถึงรายละเอียด 2A HPLC carotenoid
ของสายพันธุ์ทั่วไป สอง carotenes ถูกสังเคราะห์โดย
ทำงานร่วมกันของเทส phytoene และ desaturase และภายนอก
cyclases ไลโคปีนแคโรทีน (สูงสุด 5) และขแคโรทีน (สูงสุด
6) ที่ประสบความสำเร็จสูงสุด carotenoid 1 ที่ 6.7 นาทีทั่วไป
ระฆังสเปกตรัมการดูดกลืนแสงที่มีรูปร่างสูงสุดที่
475 นาโนเมตรมีลักษณะคล้ายกับ astaxanthin นี้เป็นผลิตภัณฑ์ในตอนท้ายของ ketolation
ทางเดินเริ่มจากขแคโรทีนซีแซนทีนหรือ (รูปที่ 1).
ซึ่งได้รับการริเริ่มโดย carotenoid ketolase ดัดแปรพันธุกรรม เอนไซม์นี้
ทำงานโดยการมีปฏิสัมพันธ์กับภายนอกขแคโรทีน
hydroxylase ซึ่งมีการใช้งานที่เฉพาะเจาะจงและเพียงพอสำหรับ astaxanthin
สังเคราะห์ สองยอดเขาอื่น ๆ ที่มีลักษณะคล้ายกับตัวกลางของทางเดินนี้
4 คีโตซีแซนทีนที่ 2 และสูงสุด echinenone สูงสุด 4 ทั้งที่มี
ไม่สมดุลระฆังสเปกตรัมการดูดกลืนแสงที่มีรูป
สูงสุดที่ 465 นาโนเมตร (รูป. 3B) หลังที่เกิดขึ้นโดยตรงจาก
ketolation ของขแคโรทีนอื่น ๆ โดย ketolation ของซีแซนทีน.
หนึ่งในสารที่ไม่พอดีกับทางเดินนี้เป็น
carotenoid ตัวแทนจากจุดสูงสุด 3 (รูป. 2A) สเปกตรัมของมันก็แสดงให้เห็น
ในรูป 3A แม้ว่ามันจะมีรูปร่างคล้ายกับคลื่นความถี่
ของ echinenone (รูป. 3B) ซึ่งอาจบ่งบอกถึง carotenoid ขาวดำ Keto,
สูงสุด 452 นาโนเมตรเป็น 14 นาโนเมตรต่ำกว่าที่ของ echinenone.
carotenoid ที่รู้จักกันเท่านั้นที่มีการดูดกลืนแสงเดียวกันและรูปร่าง ของสเปกตรัมเป็น 4 ketolutein (รูป. 3C) นี้ถูกสกัด
จาก Nicotiana พันธุ์ tabaccum เนื้อเยื่อ nectary เปลี่ยน
กับไซยาโนแบคทีเรียขแคโรทีนยีน ketolase (Gerjets et al.,
2007) แต่ก็เป็นขั้วมากขึ้นด้วยการเก็บรักษาเป็นเวลา 7.5 นาที
เมื่อเทียบกับ 12.2 นาทีสูงสุด 3 (รูป. 2B) จากคลื่นความถี่
และทางเดิน carotenoid พื้นฐานในการ A- และขแคโรทีนที่เกี่ยวข้องกับ
สาร 4-Keto-B-zeacarotene (7,8-dihydro-B w, แคโรทีน 4-
หนึ่ง) และ 4-Keto แคโรทีน (ข e-แคโรทีน-4-หนึ่ง) เป็นส่วนใหญ่
มีแนวโน้มที่ผู้สมัครสำหรับโมเลกุล carotenoid นวนิยาย ดังนั้นการ
ที่เราสร้างขึ้นเหล่านี้นอยด์โมโน Keto ซึ่งควรจะแสดง
ไม่เพียง แต่การดูดกลืนแสงที่คล้ายกัน แต่ยังขั้วที่คล้ายกันเป็นข้อมูลอ้างอิง
จากการสังเคราะห์สารประกอบ combinatorial ในเชื้อ Escherichia coli
(Sandmann, 2002) ในกรณีที่ 4 Keto-B-zeacarotene การดูดกลืนแสง
สูงสุดเช่นเดียวกับที่บริเวณนวนิยาย
แต่รูปทรงของการดูดกลืนแสงสูงสุดไม่ตรง (รูป. 3D) ใน
นอกจากนี้ carotenoid นี้ไม่ได้ร่วม chromatograph ที่มี
สารประกอบ 3 เนื่องจากเวลาการเก็บรักษาอีกต่อไปของมัน (รูป. 2C) เพียง 4
คีโตแคโรทีนที่จับคู่ว่าสเปกตรัมของสารประกอบ 3
(รูป. 3E) จะแสดงในเวลาเดียวกันในการเก็บรักษา HPLC (รูป. 2D)
และร่วมกับ chromatographied สูงสุด 3 (รูป. 2E) สำหรับการยืนยันต่อไป
ของโครงสร้างของสารประกอบ 3, สารสกัดจาก carotenoid
ข้าวลดลง borohydride โซเดียม การดัดแปลงทางเคมีนี้
ของกลุ่ม Keto ก็ยังดำเนินการกับ 4 คีโตแคโรทีน
สารอ้างอิงผลใน 4-HO-แคโรทีน ในแต่ละ
กรณีสารมีขั้วอื่น ๆ ที่ถูกสร้างขึ้น (รูป. 2D และ F) สเปกตรัม
ของอนุพันธ์ไฮดรอกซีนี้แสดงให้เห็นโดยทั่วไปสามสูงสุดของ
นอยด์ที่ไม่ ketolated แสดงการเปลี่ยนแปลงที่จะ hypsochromic
442 นาโนเมตรของกลางสูงสุดหลัก (รูป. 3F) สำหรับการลดลงของ
กลุ่ม Keto ผันกับห่วงโซ่ polyene คลื่นความถี่ที่เกิดขึ้น
คล้ายกับที่ของแคโรทีน (บริท et al., 2004).
สำหรับการชี้แจงต่อไปของโครงสร้าง 3 ยอดสเปกตรัมมวล
ถูกกำหนดโดย UHPLC-MS ที่มีความดันบรรยากาศเคมี
Ionisation ระบุ [M + H] + ไอออน ( รูปที่. 4A) มีอำนาจเหนือ
มวลสูงสุดในคลื่นที่เป็นไอออนที่ม. / z 552 นี้อาจมีลักษณะ
โมเลกุลไอออนโปรโตเนตของสารประกอบ 3 โมเลกุล
มวล 551 กรัม / โมล ฝูง carotenoid หลายพอดีกับค่านี้รวมถึง
หนึ่งสำหรับ echinenone กับ 550.86 กรัม / โมล (ริเวร่า et al., 2011).
เริ่มต้นจาก [M + H] + ไอออน 552 เปลี่ยนที่เกี่ยวข้องกับการทำงาน
ในกลุ่มโครงสร้าง carotenoid ที่ถูกสร้างขึ้น คนที่แสดงให้เห็น
ในรูป 4B เป็นผู้ที่มีลักษณะสัญญาณสำหรับประชาชน.
คนที่จะระบุโครงสร้าง echinenone ที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยน
551.6> 203.1 เป็นผลมาจากความแตกแยกที่ C-10,11 ของ 4
ส่วน Keto ตามที่ระบุไว้ในรูป 4C (Van Breemen et al., 2012)
การเปลี่ยนแปลง 551.6> 93 โดยการกำจัดในห่วงโซ่ของโทลูอีนและการเปลี่ยนแปลง
551.6> 69 รายงานก่อนหน้านี้สำหรับ echinenone (Enzell et al.,
1969) หนึ่งของการเปลี่ยนที่รุนแรงที่สุดคือ 551.6> 123.1 ซึ่ง
การเปลี่ยนแปลงที่เป็นตัวบ่งชี้ที่เฉพาะเจาะจงของการดำรงอยู่ของ e-แหวนใน
โครงสร้างของสารประกอบ 3 (Enzell และกลับ, 1995) นำมารวมกัน
เป็นผลมาจากมวลสารชี้ให้เห็นว่าสารประกอบ 3
เป็น carotenoid รวมครึ่ง ketolated ของ echinenone และ
อีกครึ่งหนึ่งที่มี e-แหวนแคโรทีน (บรรจุกล่องในรูป. 4C) นี้
มีความสอดคล้องกับ 4 คีโตแคโรทีนซึ่งมีโมเลกุลเดียวกัน
มวล echinenone

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลและการอภิปราย
ครั้งแรกของไฟโทอีนสังเคราะห์และขั้นตอนที่ 4 ของปฏิกิริยาการเติมพันธะคู่และ
ไอโซเมอไรเซชันเพื่อไลโคปีนถูกออกแบบเป็นข้าวอาหารรวมกัน
กับแบคทีเรียใน ketolase ( รูปที่ 1 ) การแสดงออกของแคโรทีนอยด์ และ transgenes
ketolase อื่นๆทั้งหมดได้ถูกแสดงไว้ก่อนหน้านี้
( ไป๋ et al . 2556 ) รูปที่ 2A แสดง HPLC ในโปรไฟล์
ของทั่วไปต้นบรรทัดสองแคโรทีนสังเคราะห์โดยปฏิกิริยาของโปรตีนไฟโทอีน
และ cyclases desaturase และไลโคปีนใน
, a-carotene ( สูงสุด 5 ) และเบต้า - แคโรทีน ( ยอด
6 ) ที่โดดเด่นในช่วง 1 นาทีกับระฆังทั่วไปปรับรูปแสงสเปกตรัมการดูดกลืนแสงสูงสุด

แต่ nm คล้ายกับของแอสตาแซนทิน . นี้เป็นผลิตภัณฑ์สุดท้ายของ ketolation
ทางเดินเริ่มจากเบต้าแคโรทีน หรือ ซีแซนทิน ( รูปที่ 1 )
ซึ่งริเริ่มโดย ketolase เชื้อพันธุกรรม . เอนไซม์นี้ทำงานโดยการปฏิสัมพันธ์กับภายนอก
-
hydroxylase ซึ่งใช้งานและเพียงพอ โดยเฉพาะแอสทาแซนทินสังเคราะห์

ยอดๆคล้ายตัวกลางของทางเดินนี้
4-keto-zeaxanthin สูงสุด 2 และ echinenone สูงสุดทั้งกับ
4มีกระดิ่งอสมมาตรรูปแสงดูดกลืนสเปกตรัมด้วย
สูงสุดที่ 465 nm ( รูปที่ 3B ) หลังที่มาโดยตรงจาก
ketolation ของเบต้า - แคโรทีน , อื่น ๆ โดย ketolation ของซีแซนทีน .
สารประกอบหนึ่งซึ่งไม่เหมาะกับเส้นทางนี้เป็นเชื้อที่แสดงโดยพีค
3 ( รูปที่ 2A ) สเปกตรัมของมันคือการแสดง
ในรูปที่ 3A แม้จะมีรูปร่างคล้ายกับสเปกตรัม
ของ echinenone ( รูปที่ 3B ) ซึ่งอาจบ่งชี้ว่าเชื้อที่กระตุ้นด้วยโมโน ,
สูงสุด 452 nm 14 nm ที่น้อยกว่า echinenone .
ทราบเฉพาะแคโรทีนด้วยค่าเดียวกันและรูปร่างของสเปกตรัมเป็น 4-ketolutein ( รูปที่ 3 ) นี้สกัดจากต้นขนะ tabaccum nectary

กับเนื้อเยื่อแปลงระบบยูยีนเบต้า - แคโรทีน ketolase ( gerjets et al . ,
2007 ) อย่างไรก็ตามมันเป็นขั้วกับการเก็บเวลา 7.5 นาที
เมื่อเทียบกับราคาสูงสุด 3 นาที ( รูปที่ 2B ) จากสเปกตรัม
และทางเดินในพื้นฐาน - -
และที่เกี่ยวข้องกับสาร 4-keto-b-zeacarotene ( 7,8-dihydro-b w-carotene-4 , -
) และ 4-keto-a-carotene ( B , e-carotene-4-one ) เป็นส่วนใหญ่
อาจชิงโมเลกุลในนวนิยาย ดังนั้น
เราสร้างเหล่านี้ โมโน กระตุ้นด้วยแคโรทีนอยด์ซึ่งควรมี
ไม่เพียง แต่คล้ายกันการดูดกลืนแสงแต่ยังขั้วคล้ายอ้างอิง
สารประกอบโดยการชีวสังเคราะห์ใน Escherichia coli
( sandmann , 2002 ) ในกรณีของ 4-keto-b-zeacarotene น
สูงสุดเช่นเดียวกับที่ของ
สารใหม่แต่รูปร่างของการดูดกลืนแสงสูงสุดไม่ตรงกัน ( รูปที่ 3 ) ใน
นอกจากนี้แคโรทีนอยด์นี้ไม่ได้ร่วมด้วยสารโครมาโตกราฟ
3 เนื่องจากเวลาการเก็บรักษานาน ( รูปที่ 2 ) 4 -
keto-a-carotene ตรงกับสเปกตรัมของสารประกอบ 3
( รูป 3E ) , มันมีเวลาคงค้างใน HPLC ( รูปที่ 2 ) และมียอด chromatographied Co
3 ( รูปที่ 2 ) สำหรับ
การยืนยันต่อไปของโครงสร้างของสารประกอบสกัดแคโรทีนอยด์จาก
3ข้าวลดโซเดียมบอโรไฮไดรด์ การดัดแปลงทางเคมี
ของกลุ่มเคโต้ ดำเนินการกับ 4-keto-a-carotene
อ้างอิงสารประกอบที่เกิดใน 4-ho-a-carotene . ในแต่ละ
กรณีสารประกอบโพลาร์เพิ่มเติมถูกสร้างขึ้น ( ภาพ 2D และ F ) สเปกตรัมอนุพันธ์ไฮดรอกซี
นี้แสดงให้เห็นโดยทั่วไปสาม Maxima ของ
ไม่ ketolated จัดแสดงกะ hypsochromic

คาโรทีนอยด์442 nm จากสูงสุดกลางหลัก ( รูปที่ 3 เอฟ ) เพื่อลดปริมาณของกลุ่มที่กระตุ้นด้วย
conjugated กับกระสัง ห่วงโซ่ ผลของสเปกตรัม
คล้ายกับ a-carotene ( Britton et al . , 2004 ) .
สำหรับคำชี้แจงเพิ่มเติมของโครงสร้างสูงสุด 3 , แมสสเปกตรัม
ถูกกำหนดโดย uhplc-ms กับความกดอากาศเคมี
ionisation ระบุ [ M ] ไอออน ( รูปที่ 4 ) ย
มวลสูงสุดในสเปกตรัมเป็นไอออนที่ m / z ผม . นี้อาจจะคล้ายกับ
protonated โมเลกุลไอออนของสารประกอบ 3 มีมวลโมเลกุล
g / mol แคโรทีนอยด์ของแกหลายฝูงพอดีนี้ค่า
echinenone รวมทั้งหนึ่งกับ 550.86 g / mol ( ริเวร่า et al . , 2011 ) .
เริ่มจาก [ M ] รายละเอียดครับ เปลี่ยนที่เกี่ยวข้องกับการทำงาน
กลุ่ม ในโครงสร้างของเชื้อที่ถูกสร้างขึ้น ที่แสดงในรูป
4B เป็นผู้ที่มีสัญญาณลักษณะสำหรับประชาชน .
คนที่ระบุ echinenone เกี่ยวข้องโครงสร้างจะเปลี่ยน
551.6 > 203.1 ที่เกิดจากความแตกแยกที่ c-10,11 ของ 4 -
เคโต้มีตามที่ระบุในรูปที่ 4C ( รถตู้ breemen et al . , 2012 ) ,
เปลี่ยน 551.6 > 93 โดยการกำจัดโทลูอีนในห่วงโซ่ และการเปลี่ยนแปลง
551.6 > 69 ก่อนหน้านี้รายงาน echinenone ( enzell et al . ,
1969 ) หนึ่งของการเปลี่ยนแปลงที่รุนแรงที่สุด คือ 551.6 > 123.1 . การเปลี่ยนแปลงนี้
เป็นตัวบ่งชี้เฉพาะของการดำรงอยู่ของ , แหวนใน
โครงสร้างของสารประกอบ 3 ( enzell และกลับ , 1995 ) ถ่ายกัน
ผลลัพธ์จากมวลสารชี้ให้เห็นว่าสารประกอบ 3
เป็นแคโรทีนอยด์รวม ketolated ครึ่งหนึ่งและอีกครึ่งหนึ่ง echinenone
ด้วย , แหวนของ a-carotene ( ชนิดบรรจุกล่องในรูปที่ 4C ) นี้
สอดคล้องกับ 4-keto-a-carotene ซึ่งมีมวลโมเลกุล

เหมือน echinenone .