3.3. Production of sheepα-TTP monoc

3.3. Production of sheepα-TTP monoclonal antibodies
In order to generate monoclonal antibodies that recognize sheep α-TTP, we prepared polypeptides of residues 1–16 (N1) and 266–282 (N2) of sheep α-TTP and used them as immunogens. Altogether, 65 hybridoma clones were obtained after screening by ELISA and 7 positive clones were selected by Western-blot assay, all of which detected a single, ~32 kDa band. The best 5 positive clones were then subcloned by limiting dilution. After confirmed by ELISA, twenty positive clones were screened andfive of them were selected based on the results of Western-blot and immunohistochemical assays. These five clones were named S12, S13, S15, S16 and S17 and among them, S16 had the best ability to recognize sheep α-TTP. Antibodies produced by S16 were then purified over affinity columns and their reactivity was confirmed by different assays including ELISA, Western-blot (Fig. 3) and immunohistochemistry (Fig. 4A). As anticipated, the results showed that the antibodies obtained from S16 were effective in recognizing sheep α-TTP.
To precisely identify the epitope recognized by the S16 monoclonal antibody, we performed Western-blot assay using the polypeptides N1 and N2, respectively. According to the detection of immunoreactivities, S16 did not recognize a residues 1–16 (N1), but reacted only with a residues 266–282 (N2) of sheep α-TTP. Therefore, S16 could recognize an epitope located within the 266–282 a residues of sheep α-TTP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3 การผลิตแอนตี้ monoclonal sheepα TTP
เพื่อสร้างแอนตี้ monoclonal ที่รู้จักแกะα-TTP เราเตรียมเปปไทด์ตก 1-16 (N1) และ 266 – 282 (N2) ของแกะα-TTP และใช้พวกเขาเป็น immunogens 65 hybridoma โคลนได้รับหลังจากการคัดกรอง โดย ELISA และโคลน 7 บวกถูกเลือก โดยวิเคราะห์ตะวันตกคืนในตา ซึ่งทั้งหมดพบเดียว ทั้งหมด ~ วง 32 kDa บวก 5 สุดโคลนได้แล้ว subcloned จำกัดเจือจาง หลังจากยืนยัน โดย ELISA โคลนบวกยี่สิบมีสกรีนลาย andfive ของ พวกเขาได้เลือกตามผลลัพธ์ของ assays เวสเทิร์นคืนในตาและ immunohistochemical โคลนเหล่านี้ห้ามีชื่อ S12, S13, S15, S16 และ S17 และในหมู่พวกเขา S16 มีความรู้จักแกะα-TTP แอนตี้ผลิตโดย S16 ที่บริสุทธิ์แล้วคอลัมน์ความสัมพันธ์ และการเกิดปฏิกิริยาของพวกเขาได้รับการยืนยัน โดยต่าง assays ได้แก่ ELISA ตะวันตกคืนในตา (Fig. 3) และ immunohistochemistry (Fig. 4A) ตามคาด ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า แอนตี้ได้จาก S16 มีประสิทธิภาพในการจดจำแกะα-TTP.
ระบุ epitope รู้จักแอนติบอดี monoclonal S16 แม่นยำ เราดำเนินการวิเคราะห์คืนในตะวันตกตาใช้เปปไทด์ N1 และ N2 ตามลำดับ ตามการตรวจพบ immunoreactivities, S16 ไม่รู้จักตกค้าง 1-16 (N1), แต่ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับตก 266 – 282 (N2) ของα-TTP แกะเท่านั้น ดังนั้น การที่ S16 สามารถรู้จัก epitope ที่อยู่ภายใน 266 – 282 ตกของแกะα-TTP ได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 การผลิตของsheepα-TTP โคลนอลแอนติบอดี
เพื่อที่จะสร้างโคลนอลแอนติบอดีที่รู้จักแกะα-TTP เราเตรียม polypeptides ตกค้าง 1-16 (N1) และ 266-282 (N2) แกะα-TTP และใช้พวกเขาเป็น immunogens ทั้งหมด 65 โคลนไฮบริที่ได้รับหลังจากการตรวจคัดกรองโดยวิธี ELISA และ 7 โคลนบวกถูกเลือกโดยวิเคราะห์ตะวันตก blot ทั้งหมดที่ตรวจพบเดียว ~ 32 kDa วง ดีที่สุด 5 โคลนบวก subcloned แล้วโดยการ จำกัด การลดสัดส่วน หลังจากได้รับการยืนยันโดยวิธี ELISA ยี่สิบโคลนบวกถูกคัดกรอง andfive ของพวกเขาได้รับการคัดเลือกขึ้นอยู่กับผลของตะวันตก blot และตรวจ immunohistochemical เหล่านี้ห้าโคลนชื่อ S12, S13, S15, S16 และ S17 และในหมู่พวกเขา S16 มีความสามารถที่ดีที่สุดที่จะยอมรับแกะα-TTP แอนติบอดีที่ผลิตโดย S16 ถูกทำให้บริสุทธิ์แล้วกว่าคอลัมน์สัมพันธ์ที่ใกล้ชิดและการเกิดปฏิกิริยาของพวกเขาได้รับการยืนยันโดยการตรวจที่แตกต่างกันรวมทั้งวิธี ELISA, ตะวันตก blot (รูปที่ 3). และ immunohistochemistry (รูปที่ 4A). เป็นที่คาดว่าผลการศึกษาพบว่าแอนติบอดีที่ได้รับจาก S16 มีประสิทธิภาพในการรับรู้แกะα-TTP
ต้องการได้อย่างแม่นยำระบุ epitope ได้รับการยอมรับโดยโมโนโคลนอลแอนติบอดี S16 เราดำเนินตะวันตก blot ทดสอบโดยใช้ polypeptides N1 และ N2 ตามลำดับ ตามการตรวจสอบของ immunoreactivities, S16 ไม่รู้จักตกค้าง 1-16 (N1) แต่ปฏิกิริยาเฉพาะกับสารตกค้าง 266-282 (N2) แกะα-TTP ดังนั้น S16 สามารถรับรู้ epitope ตั้งอยู่ภายใน 266-282 ตกค้างของแกะα-TTP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 . การผลิตแอลฟาแกะ TTP โมโนโคลนอลแอนติบอดี
เพื่อที่จะสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำแกะแอลฟา TTP เราเตรียมโปรตีนตกค้าง 1 16 – ( N1 ) และ 266 – 282 ( N2 ) แกะแอลฟา TTP และใช้พวกเขาเป็นทดลอง . ทั้งหมด 65 ไฮบริโดมาโคลนหลังจากได้รับการตรวจด้วยวิธี ELISA และ 7 โคลนบวกจำนวน Western blot assay ซึ่งทั้งหมดพบเดี่ยว~ 32 แยกวง ที่ดีที่สุด 5 บวกโคลนแล้วของการจํากัดการเจือจาง หลังจากได้รับการยืนยันโดยวิธี ELISA เป็นบวกยี่สิบพันธุ์มี andfive ของพวกเขาได้ถูกเลือกขึ้นอยู่กับผลของ blot ตะวันตกและในเลือด . เหล่านี้ห้าโคลนชื่อ s12 s13 S15 , , , และ s16 s17 และในหมู่พวกเขา s16 มีความสามารถที่ดีที่สุดที่จะยอมรับแกะแอลฟา TTP .แอนติบอดีที่ผลิตโดย s16 นั้นบริสุทธิ์กว่าคอลัมน์กลุ่มปฏิกิริยาของพวกเขาได้รับการยืนยันโดยวิธีต่าง ๆ รวมทั้งวิธี Western blot , ( รูปที่ 3 ) และหลอด ( ภาพที่ 4 ) ตามที่คาดการณ์ไว้ พบว่า แอนติบอดีที่ได้จาก s16 มีประสิทธิภาพในการตระหนักถึงแอลฟาแกะ TTP .
แน่นอนระบุไวรัสที่รู้จัก โดย s16 โมโนโคลนอลแอนติบอดี ,เราทำ Western blot assay โดยใช้ชนิด N1 และ N2 ) ผลการ immunoreactivities s16 , ไม่รับรู้ตกค้าง 1 16 – ( N1 ) แต่ทำปฏิกิริยาเฉพาะกับสารตกค้าง 266 – 282 ( N2 ) ของแอลฟาแกะ TTP . ดังนั้น s16 สามารถรู้จักไวรัสตั้งอยู่ 266 – 282 เป็นสารตกค้างของแอลฟาแกะ TTP .