Before negative staining, the purif

Before negative staining, the purified grouper iridovirus particles were treated with enzyme and detergents according to the methods of Heppell and Berthiaume (1992) with modification. Briefly, for enzymatic digestion, the purified virus particles
suspended in TN buffer were adsorbed on formvar-coated copper grids. The grids were immersed in an enzymatic solution containing 20 U ml−1 of proteinase K (Sigma, St Louis, USA) in
TN buffer and incubated at 37 °C, then the grids were removed after incubation for 10 min, rinsed
with TN buffer three times and stained with 2% phosphotungstic acid (PTA, pH 6.8). For detergent
treatments, the purified virus particles in TN buffer were first applied onto formvar-coated
grids. After removing the excess fluid by touching the edge of grids with a filter paper, the grids were
covered with 1% sodium dodecyl sulfate (SDS) or 1% alkyl phenoxy polyethoxy ethanol (Triton X-
100) at different incubation periods. The grids were then washed with distilled water and stained
with 2% PTA (pH 6.8). The purified virus without any treatments was stained negatively with 2%
PTA served as control. Both ultrathin sectioned and negativly stained specimens were observed under an electron microscope (JEOL JEM-1000CX II) at 100 kV.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ก่อนย้อมสีลบ อนุภาค iridovirus ปลาเก๋าบริสุทธิ์ถูกรักษา ด้วยเอนไซม์และผงซักฟอกตามวิธีของ Heppell และ Berthiaume (1992) ด้วยการปรับเปลี่ยน สั้น ๆ สำหรับเอนไซม์ในระบบย่อยอาหาร อนุภาคไวรัสบริสุทธิ์หยุดชั่วคราวในบัฟเฟอร์ TN ได้ adsorbed บน formvar เคลือบทองแดงกริด กริดได้ดื่มด่ำไปในโซลูชันเอนไซม์ในระบบที่ประกอบด้วย ml−1 U 20 ของ proteinase K (ซิก St Louis สหรัฐอเมริกา)บัฟเฟอร์ TN และ incubated ที่ 37 ° C จากนั้นกริดถูกลบออกหลังจากฟักตัวใน 10 นาที rinsedกับ TN บัฟเฟอร์สามครั้ง และสีกับกรด phosphotungstic 2% (PTA, pH 6.8) สำหรับผงซักฟอกก่อนใช้รักษา อนุภาคไวรัสบริสุทธิ์ในบัฟเฟอร์ TN บนเคลือบ formvarกริด หลังจากเอาน้ำส่วนเกินออกโดยการสัมผัสขอบของกริดกับกระดาษกรอง กริดได้มี 1% โซเดียมซัลเฟต dodecyl (SDS) หรือ 1% alkyl phenoxy polyethoxy เอทานอล (ไตรตั้น X-100) ที่ระยะเวลาฟักตัวแตกต่างกัน กริดแล้วล้าง ด้วยน้ำกลั่น และสี2% PTA (pH 6.8) ไวรัสบริสุทธิ์ โดยไม่มีการรักษาใด ๆ เป็นสีลบ 2%PTA ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุม จัดแบ่งเป็นส่วน ๆ ultrathin และ negativly สีไว้เป็นตัวอย่างที่สังเกตภายใต้การกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (JEOL JEM-1000CX II) ที่ 100 kV

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ก่อนที่จะย้อมสีลบอนุภาค iridovirus เก๋าบริสุทธิ์ได้รับการรักษาด้วยเอนไซม์และผงซักฟอกตามวิธีการของ Heppell และ Berthiaume (1992) ที่มีการปรับเปลี่ยน สั้น ๆ สำหรับการย่อยอาหารเอนไซม์อนุภาคไวรัสบริสุทธิ์
ที่ลอยอยู่ในบัฟเฟอร์ TN ถูกดูดซับบนกริดทองแดง formvar เคลือบ กริดถูกแช่ในสารละลายเอนไซม์ที่มี 20 มล. U-1 ของโปร K (ซิกเซนต์หลุยส์, สหรัฐอเมริกา) ใน
บัฟเฟอร์เทนเนสซีและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสแล้วกริดถูกลบออกหลังจากบ่มเป็นเวลา 10 นาทีล้าง
ด้วยบัฟเฟอร์เทนเนสซี สามครั้งและย้อมด้วยสี 2% กรด phosphotungstic (PTA ค่า pH 6.8) สำหรับผงซักฟอก
รักษาอนุภาคไวรัสบริสุทธิ์ในบัฟเฟอร์ TN ถูกนำไปใช้ก่อนลง formvar เคลือบ
กริด หลังจากลบของเหลวส่วนเกินโดยการสัมผัสขอบของกริดกับกระดาษกรอง, ตะแกรงถูก
ปกคลุมไปด้วยโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต 1% (SDS) หรือ 1% เอทานอล polyethoxy phenoxy อัลคิล (Triton X-
100) ในช่วงเวลาที่แตกต่างกันการบ่ม กริดถูกล้างด้วยน้ำกลั่นและการย้อมสี
ที่มี 2% PTA (pH 6.8) ไวรัสบริสุทธิ์โดยไม่ต้องได้รับการรักษาใด ๆ สีเชิงลบกับ 2%
PTA ทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม บางเฉียบทั้งสองและแบ่งตัวอย่างสี negativly ถูกตั้งข้อสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (JEOL JEM-1000CX II) ที่ 100 กิโลโวลต์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ก่อนลบการย้อมสีและปลาเก๋าอิริโดไวรัสอนุภาคได้รับการรักษาด้วยเอนไซม์ ผงซักฟอกและตามวิธีการของ heppell และ berthiaume ( 2535 ) ที่มีการปรับเปลี่ยน สั้นสำหรับการย่อยอาหารเอนไซม์บริสุทธิ์ , อนุภาคไวรัส
แขวนลอยใน TN บัฟเฟอร์ถูกบน formvar กริดทองแดงเคลือบกริดถูกแช่ในสารละลายเอนไซม์ที่ประกอบด้วย 20 คุณมล − 1 โปร K ( Sigma , bts , USA )
TN บัฟเฟอร์ และบ่มที่ 37 ° C แล้วกริดถูกลบออกหลังจากบ่มเป็นเวลา 10 นาทีล้าง
กับ TN บัฟเฟอร์สามครั้งและย้อมด้วย 2% ฟอสโฟทังสติกแอซิด ( PTA , พีเอช 6.8 ) สำหรับผงซักฟอก
, การรักษาทำให้อนุภาคไวรัสใน TN บัฟเฟอร์ก่อนนำมาใช้บน formvar เคลือบ
กริด หลังจากเอาของเหลวส่วนเกิน ด้วยสัมผัสขอบของกริดด้วยกริดเป็นกรองกระดาษ
ปกคลุมด้วย 1% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) หรือ 1% อัล phenoxy polyethoxy เอทานอล ( Triton x -
100 ) ที่ระยะเวลาต่าง ๆ แล้วจึงล้างด้วยน้ำกลั่นและเปื้อน
2 % PTA ( pH 68 ) ไม่มีการรักษาใด ๆและไวรัสมีเปื้อนลบ 2 %
4 ทำหน้าที่ควบคุม ทั้งแบ่งและ ultrathin negativly เปื้อนชิ้นงานที่พบภายใต้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( จอล jem-1000cx II ) ที่ 100 KV .