2.8. Hydroxyl radical scavenging activity
Co (II)/EDTA-induced luminol chemiluminescence
measurements were carried out on a model 6200 Fluorimeter, JENWAY (Jenway Gransmore Green Felsted
Dunmow Essex CM6 3 LB), keeping the lamp off and
using only the photo multiplier of the apparatus. The
procedure used is the one described by Parejo, Codina,
Petrakis, and Kefalas (2000) with some variations.
1 ml boric acid buffer solution (0.05 M, adjusted to
pH 9 with NaOH 1 M) containing 1 mg/ml EDTA
and 0.2 mg/ml CoCl2 Æ 6H2O was vortexed for 15 s with
100 ll of luminol solution (5.6 · 104 M) in boric acid
(0.05 M, adjusted to pH 9 with 1 M NaOH). Then, 25
ll of H2O2 aqueous solution (5.4 · 10 3 M) were added
and the mixture was vortexed again for 30 s and fast taken into a glass cuvette. The CL intensity (I0) was recorded when the plateau was reached (the lifetime of
the plateau is 30 s). Immediately afterwards, 25 ll of
the sample solution were added with a Pasteur pipette
for thorough mixing and the instantaneous decrease of
the plateau was recorded (I) (each measurement repeated three times).
The instantaneous reduction in luminol intensity elicited by the addition of the sample extract was symbolized as I. The light intensity in the absence of the
sample was symbolized as I0.
The ratio I0/I was plotted against lg dry extract/ml
and a linear regression was established I0/I = a[ lg dry
extract/ml] + b, where a is the slope and b is the intercept, in order to calculate the IC50, which is the amount
of sample necessary to decrease by 50% the initial CL
intensity. Again, the Antiradical Efficiency was calculated which is the 1/IC50.
Comparison was made with the three standards,
which have already been mentioned in the DPPH test
2.8 . เอชทีทีพีการกิจกรรม
Co ( 2 ) / EDTA และการวัดนโยบายแรงงาน
ลูมินอล ได้ดำเนินการในรูปแบบ fluorimeter jenway 6200 , ( jenway gransmore สีเขียว felsted
dunmow เอสเซ็กซ์ cm6 3 ปอนด์ ) , การรักษาไฟปิด และใช้เฉพาะภาพคูณ
ของเครื่อง
ขั้นตอนที่ใช้เป็นหนึ่งที่อธิบายโดย parejo codina
, , petrakis และ kefalas ( 2000 ) ด้วยรูปแบบบาง .
1 มล. กรดสารละลายบัฟเฟอร์ ( 0.05 M ปรับ pH ด้วย NaOH 9
1 M ) มี 1 มก. / มล. และ 0.2 มล. มิลลิกรัม EDTA
cocl2 กู้ 6h2o คือ vortexed 15 กับ
100 จะลูมินอล โซลูชั่น ( 5.6 ด้วย 10 4 M ) กรดบอริก
( 0.05 M , ปรับ พีเอช 9 กับ 1 M NaOH ) แล้ว 25
ll ของ H2O2 สารละลาย ( 5.4 ด้วย 10 3 m ) เพิ่ม
และส่วนผสม vortexed อีก 30 และรวดเร็วถ่ายเป็นคิวเวตต์แก้วความเข้มของ CL ( i ) จะถูกบันทึกเมื่อมาถึงที่ราบสูง ( อายุ
ที่ราบสูงคือ 30 วินาที ) ทันทีหลังจากนั้น 25 จะ
โซลูชันตัวอย่างเพิ่มกับปาสเตอร์เปต
สำหรับอย่างละเอียดผสม และลดทันทีของ
ที่ราบสูงถูกบันทึกไว้ ( ฉัน ) ( แต่ละการวัดซ้ำ
3 ครั้ง )ลดทันทีในลูมินอลความรุนแรงโดยใช้นอกเหนือจากตัวอย่างแยกเป็นสัญลักษณ์ที่ฉันความเข้มแสงในการขาดงานของ
ตัวอย่างสัญลักษณ์เป็น i .
1 i / ผมงัดข้อกับ LG บริการสกัด / ml
และการถดถอยเชิงเส้นก่อตั้งขึ้นได้ / ฉัน = [ LG
สกัดแห้ง / ml ] B , A คือความลาดชันและ B คือ สกัดกั้น เพื่อคำนวณ ic50 ,ซึ่งเป็นยอดเงิน
ตัวอย่างจำเป็นลด 50% เริ่มต้น CL
ความเข้ม อีกครั้ง , ประสิทธิภาพอนุภาคขนาดเล็กพิเศษคำนวณซึ่งเป็น 1 / ic50 .
เปรียบเทียบได้กับสามมาตรฐาน
ซึ่งได้กล่าวไว้ใน dpph ทดสอบ
การแปล กรุณารอสักครู่..