Materials and methods2.1. Strains,

Materials and methods
2.1. Strains, media and growth conditions
The yeast EJ2 strain was obtained from serial subcultures of EJ1
strain (D452-2 leu2:LEU2 pRS405-gh1-1 ura3:URA3 pRS406-cdt-1)
on cellobiose (Oh et al., 2016). Thus, the EJ2 strain contains massively
amplified copies of cdt-1 and gh1-1 in the genome, resulting
in enhanced cellobiose fermentation. In this study,the yeast strains
were pre-cultured at 30 ◦C in YP medium (10 g/L of yeast extract
and 20 g/L of peptone) with 20 g/L of glucose or cellobiose. The
yeast cells were precultured for 24–36 h in YP medium containing
20 g/L cellobiose for the cellobiose or lactose fermentation. A
20 mL volume of YP medium containing cellobiose or lactose was
used for oxygen-limited and anaerobic fermentations at 30 ◦C in
125 mL Erlenmeyer flasks at an initial OD600 (optical density at
600 nm) equal to 1.0. For whey fermentation, a 25 g of whey from
bovine milk (Sigma, St. Louis, MO) was dissolved in 100 mL hot
water, resulting in medium containing 150 g/L of lactose. Yeast
extract(10 g/L) and peptone (20 g/L) were then added into the whey
medium as necessary nutrients. Whey fermentations were carried
out at 30 ◦C in 125 mL Erlenmeyer flasks at an initial OD600 equal to
20. A control flask containing the same whey medium, but free of
yeast cells, was used and sampled to monitor ethanol production
or lactose consumption to verify whether contamination occurred
(Ozmihci and Kargi, 2007). Due to the presence of insoluble proteins
in whey powder, it is not possible to easily assess OD. All
samples were centrifuged for 10 min to remove cell debris, and
the supernatant was diluted 10–50 times for metabolite analysis

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ2.1. สายพันธุ์ สภาพสื่อและเจริญเติบโตยีสต์สายพันธุ์ EJ2 มาจากอนุกรม subcultures ของ EJ1สายพันธุ์ (D452-2 leu2:LEU2 ura3:URA3 pRS405-gh1-1 pRS406-cdt-1)บน cellobiose (Oh et al. 2016) ดังนั้น สายพันธุ์ EJ2 ประกอบด้วยอย่างหนาแน่นขยายสำเนา cdt-1 และ 1 gh1 ในจีโน ผลลัพธ์ใน cellobiose หมักขึ้น ในการศึกษานี้ สายพันธุ์ยีสต์ถูกล้างก่อนที่ 30 ◦C ในวาย (10 g/L ของยีสต์สารสกัดและ 20 g/L ของ peptone) กับ 20 g/L ของกลูโคสหรือ cellobiose การเซลล์ยีสต์ได้ precultured สำหรับ 24 – 36 h ในวายที่ประกอบด้วยขนาดกลางcellobiose 20 g/L สำหรับหมัก cellobiose หรือแลคโตส Aคือปริมาตร 20 มล.วายขนาดกลางที่ประกอบด้วย cellobiose หรือแลคโตสใช้สำหรับการหมักแหนมออกซิเจน และออกซิเจนจำกัดที่ 30 ◦C ในขวด Erlenmeyer 125 มล.ที่ OD600 เป็นต้น (แสงความหนาแน่นของ600 nm) เท่ากับ 1.0 สำหรับเวย์หมัก เป็น 25 กรัมโปรตีนจากนมวัว (ซิกม่า เซนต์หลุยส์ MO) ละลายในร้อน 100 มล.น้ำ ผลปานกลางประกอบด้วย 150 g/L ของแลคโตส ยีสต์สารสกัด (10 g/L) และ peptone (20 g/L) แล้วเพิ่มเป็นเวย์กลางเป็นสารอาหารที่จำเป็น ดำเนินการหมักแหนมเวย์ออกที่ 30 ◦C ใน Erlenmeyer 125 มล. ขวดที่ OD600 การเริ่มต้นเท่ากับ20. ควบคุมขวดระเหยที่ประกอบด้วยสื่อเวย์เดียวกัน แต่ของฟรียีสต์เซลล์ ใช้ และตัวอย่างเพื่อตรวจสอบการผลิตเอทานอลหรือปริมาณแล็กโทสเพื่อตรวจสอบว่า เกิดการปนเปื้อน(Ozmihci และ Kargi, 2007) เนื่องจากของโปรตีนไม่ละลายน้ำในผงเวย์ มันไม่ได้จะได้ประเมิน OD ทั้งหมดตัวอย่างได้จากการเอาเศษเซลล์ 10 นาที และsupernatant ถูกเจือจาง 10 – 50 ครั้งสำหรับวิเคราะห์ metabolite

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ2.1 . สายพันธุ์ , สื่อและเงื่อนไขการเจริญเติบโตej2 สายพันธุ์ยีสต์ที่ได้รับจาก ej1 subcultures ของอนุกรมความเครียด ( d452-2 leu2 : leu2 prs405-gh1-1 ura3 : ura3 prs406-cdt-1 )เรื่องที่ ( โอ้ et al . , 2016 ) ดังนั้น เมื่อย ej2 ประกอบด้วยหนาแน่นขยายชุดของ cdt-1 gh1-1 ในจีโนมมนุษย์ และผลในการปรับปรุงที่หมัก การศึกษายีสต์สายพันธุ์คือ ก่อนเลี้ยงที่ 30 ◦ C YP ปานกลาง ( 10 กรัม / ลิตร สารสกัดจากยีสต์และ 20 กรัมต่อลิตร ตามลำดับ ) 20 g / L ของกลูโคสหรือที่ . ที่เซลล์ยีสต์ 2 1949 24 – 36 ชั่วโมงใน YP ขนาดกลางที่มี20 กรัมต่อลิตร ที่ เพื่อที่ หรือ นมหมัก เป็น20 มิลลิลิตร ปริมาณของอาหารที่มีแลคโตสเป็น YP ที่หรือใช้ออกซิเจนจำกัด และ anaerobic fermentations 30 ◦ C ใน125 ml ขวดเออร์เลนเมเยอร์ที่ od600 เริ่มต้น ( แสงความหนาแน่นที่600 nm ) เท่ากับ 1.0 สำหรับ whey หมัก , 25 กรัมของโปรตีนจากน้ำนมวัว ( Sigma , St . Louis , MO ) ละลายในน้ำร้อน 100 มล.น้ำที่เกิดในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี 150 กรัมต่อลิตรของแลกโตส ยีสต์สารสกัด ( 10 กรัม / ลิตร ) และเปปโตน ( 20 กรัมต่อลิตร ) แล้วเติมใน เวย์ขนาดกลาง เป็นสารอาหารที่จำเป็น เวย์ fermentations ศึกษาอุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส ใน◦ 125 ml ขวดเออร์เลนเมเยอร์ที่เริ่มต้น od600 เท่ากับ20 . การควบคุมขวดที่มีขนาดกลางเวย์เหมือนกัน แต่ของฟรีเซลล์ยีสต์ ใช้และเก็บตัวอย่างเพื่อตรวจสอบการผลิตเอทานอลหรือการใช้ตรวจสอบว่า การปนเปื้อนที่เกิดขึ้น( ozmihci และ kargi , 2007 ) เนื่องจากการแสดงตนของโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำในผงเวย์ , มันเป็นไปไม่ได้ที่จะสามารถประเมินโครงการ . ทั้งหมดจำนวนระดับ 10 นาทีเพื่อเอาเศษเซลล์และและน่านเจือจาง 10 – 50 ครั้งสำหรับการวิเคราะห์เมตาโบไลท์