A genetically engineered Escherichi

A genetically engineered Escherichia coli (E. coli) strain displaying glucose dehydrogenase (GDH) with ice-nucleation protein (INP) as the anchoring motif was first constructed. The surface localization and functionality of the fusion protein containing GDH were verified by SDS-PAGE, Western blotting and enzymatic activity assay. The fusion of INP had no effects on the functionality of GDH cofactor binding domain. The activity assay showed that 74.6% of the cell lysate GDH activity was detected in the outer membrane fractions. Compared with the crude enzyme solution from E. coli expressing intracellular GDH, the GDH-displaying bacteria (GDH-bacteria) was stable within pH 6-10 below 40°C. Further, a novel electrochemical glucose biosensor was developed by construction of Nafion/GDH-bacteria/multiwalled-carbon-nanotube modified electrode. The as-prepared biosensor is linear with the concentration of d-glucose within the range of 50-800 μM and a low detection limit of 4 μM D-glucose (S/N=3). Excess saccharides including D-galactose, D-fructose, D-cellbiose, L-arabinose and D-sucrose, D-maltose, D-mannose and D-xylose as well as common interfering substances (acetaminophen, ascorbic acid and uric acid) did not affect the detection of D-glucose (0.1mM). The proposed biosensor is stable, specific, reproducible, simple, rapid and cost-effective, which can be used for detection of real samples. It is envisioned that this GDH-bacteria will be found promising applications in biofuel cell, glucose detection and cofactor reproduction system.
Copyright © 2013 Elsevier B.V. All rights reserved.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พันธุ Escherichia coli (E. coli) สายพันธุ์แสดงกลูโคสพร่อง (ดองฮู) มีโปรตีน ice nucleation (INP) เป็นลายเกลียวถูกสร้างขึ้นครั้งแรก แปลพื้นผิวและการทำงานของโปรตีนฟิวชั่นที่ประกอบด้วยดองฮูถูกตรวจสอบ โดย SDS-หน้า เวสเทิร์น blotting วิธี และทดสอบเอนไซม์ ฟิวชั่นของ INP มีผลกระทบใด ๆ ต่อการทำงานของโดเมนสำหรับปัจจัยรวม ทดสอบกิจกรรมพบว่า 74.6% เซลล์ lysate สำหรับกิจกรรมพบในเศษส่วนนอกเยื่อหุ้มเซลล์ เมื่อเทียบกับโซลูชันเอนไซม์ดิบจาก E. coli แสดงดองฮู intracellular แสดงสำหรับแบคทีเรีย (สำหรับแบคทีเรีย) เป็นมีเสถียรภาพภายใน 6-10 ค่า pH ต่ำกว่า 40 องศาเซลเซียส ต่อไป biosensor นวนิยายไฟฟ้ากลูโคสถูกพัฒนาขึ้น โดยก่อสร้างขั้วแก้ไข Nafion/ดอง ฮู แบคทีเรีย/multiwalled--ท่อนาโนคาร์บอน Biosensor ที่เตรียมเป็นเป็นเส้นตรง ด้วยความเข้มข้นของ d-กลูโคสภายในช่วง 50-800 ไมครอนและขีดจำกัดการตรวจจับต่ำของμ m 4 D-กลูโคส (S/N = 3) ส่วนเกินรวมถึงกา แล็กโทส D, D- ฟรักโทส saccharides D-cellbiose, L arabinose และ D-น้ำตาลซูโครส D maltose, D-mannose และ สาร D เป็นทั่วไปรบกวนสาร (สิทธิ กรดแอสคอร์บิค และกรดยูริก) ซึ่งไม่มีผลต่อการตรวจจับของ D-กลูโคส (0.1 mM) Biosensor เสนอเป็นมีเสถียรภาพ เฉพาะ จำลอง ง่าย รวดเร็ว และคุ้ม ค่า ซึ่งสามารถใช้สำหรับการตรวจสอบอย่างแท้จริง มันคือจินตนาการว่า สำหรับเชื้อแบคทีเรียนี้จะพบแนวโน้มการใช้งานในเซลล์เชื้อเพลิงชีวภาพ การตรวจหากลูโคส และกระตุ้นระบบสืบพันธุ์ลิขสิทธิ์ © 2013 Elsevier b.v สงวนลิขสิทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิศวกรรมพันธุกรรมเชื้อ Escherichia coli ( E. coli) สายพันธุ์แสดงกลูโคส dehydrogenase (GDH) กับโปรตีนน้ำแข็งนิวเคลียส (INP) เป็นบรรทัดฐานยึดถูกสร้างขึ้นเป็นครั้งแรก พื้นผิวการแปลและการทำงานของโปรตีนที่มี GDH ถูกตรวจสอบโดยวิธี SDS-PAGE, ซับตะวันตกและทดสอบเอนไซม์ ฟิวชั่นของ INP ไม่มีผลต่อการทำงานของ GDH ปัจจัยที่มีผลผูกพันโดเมน กิจกรรมการทดสอบแสดงให้เห็นว่า 74.6% ของการทำงานของเซลล์ lysate GDH ถูกตรวจพบในเศษส่วนเยื่อหุ้มชั้นนอก เมื่อเทียบกับวิธีการแก้ปัญหาเอนไซม์จากเชื้อ E. coli แสดงภายในเซลล์ GDH แบคทีเรีย GDH-แสดง (GDH แบคทีเรีย) เป็นมีเสถียรภาพภายในค่า pH 6-10 ด้านล่าง 40 องศาเซลเซียส นอกจากนวนิยายไบโอเซนเซอร์กลูโคสไฟฟ้าได้รับการพัฒนาโดยการก่อสร้าง Nafion / GDH แบคทีเรีย / multiwalled คาร์บอนนาโนปรับเปลี่ยนขั้วไฟฟ้า ไบโอเซนเซอร์เป็นเตรียมเป็นเชิงเส้นที่มีความเข้มข้นของ D-กลูโคสอยู่ในช่วงของ 50-800 ไมครอนและการตรวจสอบวงเงินต่ำของ 4 ไมครอน D-กลูโคส (S / N = 3) นํ้าตาลส่วนเกินรวมทั้ง D-กาแลคโต, D-ฟรุกโตส, D-cellbiose L-arabinose และ D-ซูโครส D-มอลโตส, D-mannose และ D-ไซโลสเช่นเดียวกับสารรบกวนที่พบบ่อย (acetaminophen วิตามินซีและกรดยูริค) ได้ ไม่ส่งผลกระทบต่อการตรวจสอบของดีกลูโคส (0.1mm) เดอะ ไบโอเซนเซอร์ที่นำเสนอมีเสถียรภาพเฉพาะทำซ้ำได้ง่ายรวดเร็วและประหยัดค่าใช้จ่ายที่มีประสิทธิภาพซึ่งสามารถนำมาใช้สำหรับการตรวจสอบของกลุ่มตัวอย่างจริง มันเป็นจินตนาการที่ว่านี้ GDH แบคทีเรียจะพบการใช้งานที่มีแนวโน้มในเซลล์เชื้อเพลิงชีวภาพน้ำตาลในการตรวจจับและปัจจัยระบบสืบพันธุ์.
ลิขสิทธิ์© 2013 Elsevier BV สงวนลิขสิทธิ์