In order to study the kinetics of t

In order to study the kinetics of the ability of
the bacteria to induce IL-17 protein expression, initial
experiments were performed by stimulating the
PBMC from 10 healthy donors (not the same donors
as in the above experiment) with live B. pseudomallei
or live B. thailandensis at an MOI ratio of
10:1 compared to unstimulated PBMC in similar culture
conditions as above but during a 3- to 24-hour
period.
Total RNA extraction and cDNA synthesis
Total RNA was extracted from the PBMC
cultures using the Micro-to-Midi Total RNA Purification
System (Invitrogen, Carlsbad, CA) according
to the manufacturer’s instructions. The RNA was
quantified and cDNAs were synthesized using the
Superscript™ III First-Strand Synthesis System (Invitrogen,
Carlsbad, CA). Briefly, 0.5 μg RNA templates were mixed with 0.5 μg/ml Random Hexamers
(Applied Biosystems, Foster, USA) and 1 mM
dNTPs, incubated at 65°C for 5 minutes and chilled
on ice for 1 minute. Forty units RNaseOUT™, 200
U Superscrip™ III RT, 10x RT buffer, 0.1 M DTT,
and 25 mM MgCl2 were added according to the supplier’s
instructions. The reaction mixture was incubated
at 25°C for 10 minutes, followed by 50°C for
50 minutes. The reaction was terminated by heating
at 85°C for 5 minutes and chilling on ice. Finally, 1
μl of RNase H was added and incubated at 37°C for
20 minutes. The synthesized cDNA was used directly
as template in the PCR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อศึกษาจลนพลศาสตร์ของความสามารถของ
เชื้อแบคทีเรียที่ก่อให้เกิดการ IL-17 การแสดงออกของโปรตีน, เริ่มต้น
การทดลองได้ดำเนินการโดยการกระตุ้น
PBMC จากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี 10 (ไม่บริจาคเดียวกัน
ในขณะที่การทดสอบข้างต้น) ด้วย Live B. pseudomallei
หรืออาศัยอยู่ บี thailandensis ที่อัตราส่วนของกระทรวงมหาดไทย
10: 1 เมื่อเทียบกับ unstimulated PBMC ในวัฒนธรรมที่คล้ายกัน
เงื่อนไขดังกล่าวข้างต้น แต่ในช่วง 3- 24 ชั่วโมง
. ระยะเวลา
การสกัดรวม RNA และสังเคราะห์ cDNA
รวม RNA ถูกสกัดจาก PBMC
วัฒนธรรมโดยใช้ไมโคร เพื่อ Midi รวม RNA บริสุทธิ์
ระบบ (Invitrogen, Carlsbad, CA) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอได้รับการ
วัดและ cDNAs ถูกสังเคราะห์โดยใช้
ยก™ III แรก Strand ระบบสังเคราะห์ (Invitrogen,
Carlsbad, CA) สั้น ๆ , 0.5 ไมโครกรัม RNA แม่ถูกผสมกับ 0.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสุ่ม hexamers
(Applied Biosystems, ฟอสเตอร์, สหรัฐอเมริกา) และ 1 มิลลิ
dNTPs บ่มที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและเย็น
บนน้ำแข็งเป็นเวลา 1 นาที สี่สิบหน่วย RNaseOUT ™ 200
U Superscrip ™ III RT, 10x RT บัฟเฟอร์ 0.1 M DTT,
และ 25 มม MgCl2 ถูกเพิ่มตามที่ผู้จัดจำหน่ายของ
คำแนะนำ ผสมปฏิกิริยาถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วย 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
50 นาที ปฏิกิริยาถูกยกเลิกด้วยความร้อน
ที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและหนาวเหน็บบนน้ำแข็ง สุดท้าย 1
ไมโครลิตรของ RNase H ถูกบันทึกและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
20 นาที ซึ่งแปลสังเคราะห์ถูกนำมาใช้โดยตรง
เป็นแม่แบบใน PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อศึกษาจลนพลศาสตร์ของความสามารถของแบคทีเรียที่ทำให้เกิดการแสดงออกของโปรตีนรวมทั้งส่วนผสมเริ่มต้นทดลองโดยการกระตุ้น2 จาก 10 ผู้บริจาคสุขภาพดี ( ไม่ใช่ผู้บริจาคเดียวกันในการทดลองข้างต้น ) อยู่กับ B . pseudomalleiB . thailandensis หรืออยู่ในอัตราส่วนของ มท.10 : 1 เมื่อเทียบกับ unstimulated พื้นฐานในวัฒนธรรมคล้ายคลึงกันเงื่อนไขดังกล่าว แต่ระหว่าง 3 - 24 ชั่วโมงระยะเวลาการสกัด DNA และสังเคราะห์ cDNA รวมอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากขาววัฒนธรรมการใช้ไมโครอาร์เอ็นเอทั้งหมด MIDI ฟอกระบบ ( Invitrogen Carlsbad , CA ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ยีน คือตรวจ cdnas ได้โดยใช้ลวดหนาม 3 เกลียว™ระบบแรก ( Invitrogen สังเคราะห์ ,คาร์ลสแบด , แคลิฟอร์เนีย ) สั้น , 0.5 μ g DNA แม่แบบผสม 0.5 μ g / ml hexamers สุ่ม( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ , USA ) และ 1 มม.dntps บ่มที่อุณหภูมิ 65 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีและแช่เย็นในน้ำแข็งเป็นเวลา 1 นาที 40 หน่วย rnaseout ™ 200คุณ superscrip ™ III ) RT RT , บัฟเฟอร์ , 0.1 M ส่วนชุด 25 มิลลิเมตร และเพิ่มตามของซัพพลายเออร์คําแนะนํา ปฏิกิริยาผสมบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศา C นาน 10 นาที ตามด้วย 50 ° C สำหรับ50 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดยความร้อน85 ° C เป็นเวลา 5 นาทีและเย็นบนน้ำแข็ง สุดท้าย 1μ l H เป็นเลสบ่มที่ 37 ° C สำหรับ20 นาที สังเคราะห์ cDNA ถูกใช้โดยตรงเป็นแม่แบบใน PCR