2.4. Determination of CMLThe CML wa

2.4. Determination of CML
The CML was extracted from meat samples according to Drusch
et al. (1999) except that chloroform/methanol (2:1, v/v) solution
was used as the defatting solvent. Each meat sample (0.20 g) was
defatted using two extractions of 20 mL chloroform/methanol
(2:1, v/v) solution followed by centrifugation (10,600g at 4 C)
for 10 min. The defatted samples were dried completely at 50 C,
and reduced with 8 mL sodium borate buffer (0.2 M, pH 9.4) and
4 mL sodium borohydride (1 M in 0.1 M NaOH) for 4 h at room
temperature. Hydrochloric acid (HCl) was added to the reduced
samples to a final concentration of 6 M HCl (add 6 mL HCl 12 M).
Each sample was flushed with a stream of nitrogen for 5 min followed
by hydrolysis at 110 C for 20 h in screw-capped vials. Upon
completion of hydrolysis, samples were dried by rotary evaporation,
and transferred into a 10 mL volumetric flask with water
and made to volume. After filtration, the filtrates were concentrated
and dissolved in sodium borate buffer (0.2 M, pH 9.4). The
sample was brought to 10 mL in a volumetric flask follow by a final
membrane filtration (nylon, 0.45 lm) for later derivatization.
The hydrolysate (50 lL) was mixed with 200 lL of orthophthalaldehyde
(OPA) derivatization reagent and reacted 5 min
prior to HPLC analysis. The CML was analysed with an HP1090A
Series II HPLC (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) coupled
with a HP 1046A programmable fluorescence detector according to
the method of Peng et al. (2010). The CML separation was achieved
with a reversed-phase TSK gel ODS-80 TM column
(25 cm  4.6 mm, 5 lm, 80 Å, Tosohass, Montgomeryville, PA,
USA), and with the fluorescence settings of 340 nm (excitation)
and 455 nm (emission). The mobile phases were: (solvent A) acetate
buffer (pH 6.7, 20 mM)/acetonitrile (90:10, v/v) and (solvent
B) acetonitrile. The flow rate was 1.0 mL/min and the injection volume
was 20 lL. The CML separation was achieved with a linear
gradient that started with 5% B and changed to 70% B within
5 min and kept at 70% B till 17 min. The gradient was set back to
95% B in 1 min followed by a post run of 15 min to allow the column
to equilibrate prior to the next injection. Data were analysed
using ChemStation software Rev A.06.00. The identities of CML
peaks were achieved by comparison between the retention times
and the standard. CML content of the samples was determined
based on the peak areas of the corresponding derivatives.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การกำหนดของ CML
CML ถูกสกัดจากเนื้อตัวอย่างตาม Drusch
et al. (1999) ยกเว้นว่าโซลูชันคลอโรฟอร์ม/เมทานอล (2:1, v/v)
ถูกใช้เป็นตัวทำละลาย defatting เป็นตัวอย่างแต่ละเนื้อ (0.20 g)
สกัดไขมันทางใช้สกัดสองของคลอโรฟอร์ม 20 mL/เมธา นอ
(2:1, v/v) โซลูชั่นตาม centrifugation (g 10,600 ที่ 4 C)
สำหรับ 10 นาที ตัวอย่างสกัดไขมันทางก็แห้งทั้งหมดที่ 50 C,
และลด ด้วยบัฟเฟอร์ borate โซเดียม 8 mL (0.2 M, pH 9.4) และ
4 mL โซเดียม borohydride (1 M ใน 0.1 M NaOH) สำหรับ h 4 ห้อง
อุณหภูมิ เพิ่มกรดไฮโดรคลอริก (HCl) เพื่อการลด
ตัวอย่างกับความเข้มข้นสุดท้ายของ 6 M HCl (เพิ่ม 6 mL HCl 12 M) .
ตัวอย่างแต่ละถูกล้าง ด้วยกระแสของไนโตรเจนสำหรับ 5 นาทีตาม
โดยไฮโตรไลซ์ที่ 110 C สำหรับ h 20 ในร็อคกี้สกรู vials เมื่อ
สมบูรณ์ของไฮโตรไลซ์ ตัวอย่างที่แห้ง โดยการระเหยโรตารี่,
และถูกโอนย้ายไปหนาว volumetric 10 mL กับน้ำ
และทำเสียง หลังจากกรอง filtrates ได้เข้มข้น
และละลายในโซเดียม borate บัฟเฟอร์ (0.2 M, pH 9.4) ใน
ตัวอย่างถูกนำตัวไป 10 mL ในตาม volumetric หนาว โดยสุดท้าย
กรองเมมเบรน (ไนล่อน 0.45 lm) ในภายหลัง derivatization
ด้วย (50 จะ) ถูกผสมกับ 200 จะ orthophthalaldehyde
(OPA) derivatization รีเอเจนต์และปฏิกิริยาที่เกิดขึ้น 5 นาที
ก่อนวิเคราะห์ HPLC CML มี analysed กับ HP1090A
ควบคู่ชุด II HPLC (Agilent เทคโนโลยี ซานตาคลารา CA, USA)
กับเครื่องตรวจจับโปรแกรม fluorescence HP 1046A ตาม
วิธีของ Peng et al (2010) แยก CML ที่สำเร็จ
กับระยะกลับทีเอสเคเจ TM ODS 80 คอลัมน์
(25 ซม. 4.6 มม. 5 lm, 80 Å Tosohass, Montgomeryville, PA,
สหรัฐอเมริกา), และการตั้งค่า fluorescence ของ 340 nm (ในการกระตุ้น)
และ 455 nm (มลพิษ) ระยะเคลื่อน: acetate (ตัวทำละลาย A)
บัฟเฟอร์ (pH 6.7, 20 มม.) / acetonitrile (90:10, v/v) และ (ตัวทำละลาย
B) acetonitrile อัตราการไหล 10 mL/min และปริมาณฉีด
20 จะ แยก CML สำเร็จกับแบบเชิงเส้น
ไล่ระดับสีที่เริ่มต้น ด้วย 5% B และเปลี่ยน 70% B ภายใน
5 นาทีและ 70% B จนถึงนาทีที่ 17 การไล่ระดับสีจะถูกตั้งค่ากลับไป
95% B ใน 1 นาทีตาม ด้วยการลงรายการบัญชีรัน 15 นาทีให้คอลัมน์
การ equilibrate ก่อนฉีดต่อไป ข้อมูลได้ analysed
ใช้ซอฟต์แวร์ ChemStation เรฟ A.06.00 ลักษณะเฉพาะของ CML
พีคส์บรรลุผลโดยการเปรียบเทียบระหว่างเวลารักษา
และมาตรฐาน CML เนื้อหาตัวอย่างการกำหนด
ตามพื้นที่สูงสุดของตราสารอนุพันธ์ที่เกี่ยวข้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ความมุ่งมั่นของ CML
CML สกัดจากตัวอย่างเนื้อตาม drusch
et al . ( 1999 ) ยกเว้น / เมทานอลคลอโรฟอร์ม ( 2 : 1 v / v )
defatting สารละลายถูกใช้เป็นตัวทำละลาย เนื้อแต่ละอย่าง ( 0.20 g )
สกัดโดยใช้การสกัด 20 ml / เมทานอลคลอโรฟอร์ม
( 2 : 1 v / v ) โซลูชั่น ตามด้วยเหวี่ยงแยก ( 10600  g 4  C )
เป็นเวลา 10 นาทีที่สกัดแห้งสนิท จำนวน 50  C ,
8 มิลลิลิตร และลดโซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์ ( 0.2 M pH 7.5 และโซเดียมบอโรไฮไดรด์ )
4 มิลลิลิตร ( 1 เมตรใน 0.1 M NaOH ) สำหรับ 4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง

กรดเกลือ ( HCl ) คือการเพิ่มลด
ตัวอย่างมีความเข้มข้นสุดท้าย 6 M กรดไฮโดรคลอริก ( HCl เพิ่ม 6 มิลลิลิตร 12 M )
แต่ละตัวอย่างถูกขับด้วยกระแสของไนโตรเจนสำหรับ 5 นาทีตาม
การ  110 C เป็นเวลา 20 ชั่วโมง สกรูฝาครอบขวดนั่น เมื่อเสร็จสิ้นการ
ตัวอย่าง โดยการระเหยแห้งแบบหมุน , และ 10 ml
ถ่ายโอนลงในขวดปริมาตรน้ำ
และให้ปริมาณ หลังจากการกรอง , สารละลายมีความเข้มข้นและปริมาณโซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์
( 0.2 M pH 7.5 )
ตัวอย่างมา 10 ml ในขวดปริมาตรตามสุดท้าย
กรองเมมเบรน ( ไนลอน 0.45 LM ) ในภายหลังกับ .
ไฮโดรไลเซท 50 จะ ) ผสมกับ 200 จะ orthophthalaldehyde
( OPA ) กับสารเคมีและปฏิกิริยา 5 นาที
ก่อนการวิเคราะห์ปริมาณซูโครส โดย CML วิเคราะห์ด้วย HPLC hp1090a
ชุด 2 ( Agilent Technologies , ซานตา คลาร่า , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) คู่กับโปรแกรม HP 1046a

การตรวจจับตามวิธีของ Peng et al .( 2010 ) โดย CML แยกสําเร็จ
กับ reversed-phase ชิเจล ods-80 TM คอลัมน์
( 25 ซม.  4.6 มม. 5 กล. 80 tosohass กริพเพน , , ,
montgomeryville , PA , USA ) และมีการตั้งค่าของ 340 nm ( i )
โพสต์ nm ( มลพิษ ) ระยะเคลื่อนที่คือ ( ตัวทำละลาย ) อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 6.7
20 มม. ) / ไน ( รูป v / v ) และ ( ตัวทำละลาย
b ) ไน . อัตราการไหลเท่ากับ 10 มล. / นาทีและการฉีดปริมาณ
20 จะ โดย CML แยกสําเร็จ ด้วยเส้นไล่ระดับที่เริ่มต้นด้วย 5
% B และเปลี่ยนเป็น 70 % B ภายใน
5 นาทีและเก็บไว้ที่ 70 % B จนถึง 17 นาที การไล่ระดับสีเป็นชุดกลับไป
95 % B ใน 1 นาที ตามด้วยการลงวิ่ง 15 นาทีเพื่อให้คอลัมน์
ให้สมดุลกันก่อน ไปฉีดหน้า วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้โปรแกรม chemstation วว
a.06.00 .ลักษณะของยอดเขา CML
ยาโดยเปรียบเทียบระหว่างการเก็บรักษาครั้ง
และมาตรฐาน CML เนื้อหาของกลุ่มตัวอย่างตั้งใจ
ขึ้นอยู่กับยอดพื้นที่ของสัญญาซื้อขายล่วงหน้าที่สอดคล้องกัน