Seeds of P. alata were surface-sterilized with 1.0% (w/v) sodium
hypoclorite for 20 min with agitation and washed three times
with sterile deionized water. Disinfected seeds were distributed
between two layers of sterile filter paper soaked with 2.5% gibberellic
acid (GA3) for 5 days. After this period, the seeds were
mechanically scarified with a scalpel, and inoculated on ½ MS
medium (half-strength of MS salts, MS vitamins, and 1.5% (w/v)
sucrose) solidified with 0.7% agar (Merck), followed by incubation
in a germinator with a photoperiod of 8 h using a total irradiance of
28.7 mol m−2 s−1 provided by cool-white fluorescent lamps and
alternate temperatures (30 ◦C for 8 h and 20 ◦C for 16 h) for 60 days
(Osipi and Nakagawa, 2005). In order to obtain primary cultures,
shoot apices and nodal segments were excised from 30-day old
seedlings, inoculated on ½ MSM medium (half-strength of MSM
salts, MS vitamins and 1.5% (w/v) sucrose) solidified with 0.7% agar,
and incubated under a 16-h photoperiod.
In order to optimize shoot elongation, stem segments (2.0 cm)
containing two nodes were excised from plants obtained 60 days
after initiation of primary cultures, and inoculated on B5, ½ B5
or ½ MSM medium supplemented with 5 or 10% coconut water
(Sigma–AldrichChemicalCo.). Threeflasks containing four explants
each were cultured per treatment and maintained under standard
culture conditions for 30 days. Experiments were repeated twice.
เมล็ดพันธุ์แห่งหน้า ชุมเห็ดเทศ ฆ่าเชื้อที่ผิวด้วย 1% ( w / v ) โซเดียมhypoclorite 20 นาทีด้วยการกวน และล้าง 3 ครั้งเป็นหมันคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ ฆ่าเชื้อเมล็ดกระจายระหว่างสองชั้นของปลอดเชื้อกรองกระดาษที่แช่ด้วย 2.5% จิบเบอเรลลิคacid ( GA3 ) เป็นเวลา 5 วัน หลังจากระยะเวลานี้ เมล็ดการ scarified กับมีดผ่าตัด , และหัวเชื้อใน½ MSปานกลาง ( แรงครึ่งหนึ่งของเกลือ MS , MS วิตามินและ 1.5 % ( w / v )ซูโครส ) แข็งกับ 0.7% agar ( Merck ) ตามระยะเวลาในช่วง germinator ด้วย 8 H ที่ใช้ทั้งหมดดังกล่าวของ28.7 mol m − 2 s − 1 โดยเย็นสีขาวเรืองแสงและโคมไฟอุณหภูมิสลับ 30 ◦ C 8 H และ 20 ◦ C 16 H ) 60 วัน( osipi กับ Nakagawa , 2005 ) เพื่อรับวัฒนธรรมหลักส่วนข้อ apices ยิงและถูกตัดจากเดิม 30 วันดำนา , ปลูกบน MSM ½ขนาดกลาง ( แรงครึ่งหนึ่งของชายรักชายเกลือ , นางสาววิตามินและ 1.5 % ( w / v ) ซูโครส ) แข็งกับ 0.7% วุ้นโดยภายใต้ 16-h แสง .เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการยิง การยืดตัว ส่วนก้าน ( 2.0 ซม. )ที่ประกอบด้วยสองโหนดถูกตัดจากพืชได้ 60 วันหลังจากการเริ่มต้นของวัฒนธรรมหลัก และหัวเชื้อใน B5 , ½ B5หรือ MSM ½เติม 5 หรือ 10 % มะพร้าวน้ำ( Sigma ) aldrichchemicalco . ) threeflasks ที่มีสี่อาหารแต่ละคนถูกเลี้ยงต่อการดูแลรักษาตามมาตรฐานสภาพเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 30 วัน ทดลองซ้ำ 2 ครั้ง
การแปล กรุณารอสักครู่..
