2. Materials and methods2.1. Plant

2. Materials and methods
2.1. Plant materials
Fruit, 500 g from three separate beds, were collected for each of
5 strawberry (Fragaria x ananassa Duchesne ex Rozier) cultivars:
Albion, Monterey, Portola, San Andreas, and Seascape. These
cultivars are ‘‘day-neutral’’ and were developed by the University
of California. Strawberry fruit were grown at the USDA-ARS Henry
A. Wallace Agricultural Research Center at Beltsville, MD, USA in a
low-tunnel system. A Raised Bed Plastic Mulch Layer (Rainflow
Irrigation, East Earl, PA, USA) was used to form three raised beds
on 182-cm centers, with two lines of drip tape, 30 cm apart and
7 cm below two layers of plastic mulch, a layer of 0.025 mm black
mulch covered by a layer of 0.025 mm ‘‘white-on-black’’ mulch.
Plants were fertilized weekly with 2.27 kg/10,000 m2 nitrogen.
Stainless steel rods, 5 mm in diameter 366 cm long, were
pushed into the ground 15 cm from the sides of the beds, and
spaced every 122 cm to act as support hoops for a layer of solid (no
holes) 0.098 mm thick 366 cm wide clear plastic sheeting
(Berry Plastic Corporation, Greenville, SC, USA) 61 cm over the
beds, forming a low tunnel to protect the plants from rain.
Individual fruit were hand-harvested by 07.30 h Eastern Standard
Time from each 6-plant plot the mornings of 22 August and 25
August, 2011, and are hereafter referred to as 1st and 2nd harvests,
respectively. Only fully ripe, unblemished fruit were selected for
further quality evaluations. Fruit were placed in plastic bags
labeled with the plot (replication) number and chilled in an ice
chest. All berries were immediately transported to the lab where
they were either assayed immediately for AsA or frozen at 80 8C
for subsequent phenolic and sugar analysis.
2.2. Chemicals
Phenolic standards recommended for high performance liquid
chromatography (HPLC) analysis of phenolics in strawberry (Fan
et al., 2012) included elagic acid, m-coumaric acid, o-coumaric
acid, p-coumaric acid, cyanidin-3-glucoside, gallic acid, kaempherol-3-glucoside,
quercetin-3-glucoside, pelargonidin-3-glucoside
and pelargonidin-3-rutinoside. All of the standards were
obtained from Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA), except for
pelargonidin-3-rutinoside, which was obtained from Apin Chemicals
(Abingdon, UK).
2.3. Ascorbic acid
One g strawberry fruit was homogenized in ice-cold 5% (w/v)
m-phosphoric acid, centrifuged at 10,000 g for 15 min at 2 8C,
then the supernatant was decanted and reserved. The strawberry
pellet was re-extracted 2 additional times, for a total of 15 mL, as
recommend for AsA extraction of strawberry by Klopotek et al.
(2005). The combined supernatant was determined for total and
free AsA spectrophotometrically at 525 nm according to the
procedure of Hodges et al. (2001). Total and free AsA concentrations
were quantified using a previously developed standard
curve in the range of 0.002–200 mg. The calibration curve was
linear in the range studied with a correlation coefficient of 0.999.
Total AsA equals free AsA plus dehydroascorbic acid (DAsA).
Dehydroascorbic acid concentration was calculated by subtracting
free AsA from total AsA.
2.4. Phenolic extraction for Folin–Ciocalteu, Fast Blue BB assay
Strawberry fruit samples were prepared by combing 2.5 g of
tissue cut from the distal-half of the berry previously frozen at
80 8C with 12 mL 70% MeOH and homogenized at 12,000 rpm for
30 s using a PT10-35 GT probe (Brinkman Instruments Inc.,
Westbury, NY, USA) followed by dismembration for 30 s using a
micro tip at 35% (ARTEK sonic dismembrator model 300 Farmingdale,
NY, USA). Dismembrated homogenates were centrifuged
at 6650 g for 10 min at room temperature and the supernatant
used to determine total phenolics.
2.5. Total phenolics via Folin–Ciocalteu, Fast Blue BB methods and
HPLC
2.5.1. Folin–Ciocalteu assay
Folin–Ciocalteu (F–C) was assayed according to Medina
(2011b). Fifty mL of dismembrated sample diluted 1:4 with DI
H2O, gallic acid standard, or DI H2O for blank was added to
13 mm 100 mm borosilicate tubes, followed by 430 mL DI H2O,
20 mL F–C reagent, mixed, and allowed to react for 5 min before
adding 50 mL 20% Na2CO3, 450 mL DI H2O, mixed and allowed to
stand 60 min at room temperature. Absorbance was measured at
725 nm.
2.5.2. Fast Blue BB assay
Fast Blue BB (FBBB) was assayed according to Medina (2011b).
One mL of dismembrated sample diluted 1:20 with DI H2O, gallic
acid standard or DI H2O for blank was added to 13 mm 100 mm
borosilicate tubes, followed by 0.1 mL sonicated 0.1% FBBB [4-
benzoylamino-2,5-dimethoxybenzenediazonium chloride hemi(-
zinc chloride) salt], mixed for 30 s, followed by 0.1 mL 5% NaOH,
mixed, and the resulting mixture allowed to incubate for 90 min at
room temperature. Absorbance was measured at 420 nm. Both
assays were evaluated with gallic acid standard dilution or a fruit
sugar mixture (fructose, glucose, sucrose) standard dilution of 0,
0.01562, 0.03125, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.50 mg/mL DI H2O or an
AsA standard dilution of 0, 0.01562, 0.03125, 0.0625, 0.125, 0.25,
0.50, 1.0 mg/mL DI H2O. The calibration curve was linear in the
range studied with a correlation coefficient of 0.999.
2.5.3. Phenolic extraction for HPLC determination
Strawberry fruit samples were prepared by combining 5.0 g of
tissue cut from the distal end of the berry previously frozen at
80 8C with 25 mL 50% MeOH and homogenized at 10,000 rpm for
1 min using a PT10-35 GT probe (Brinkman Instruments Inc.,
Westbury, NY, USA) followed by dismembration for 2 min using a
micro tip at 35% (Fisher Scientific sonic dismembrator model 300,
Farmingdale, NY, USA) in an ice bath. Homogenates were
centrifuged at 6650 g for 10 min at 4 8C, the resulting pellet
was re-extracted with 5 mL 70% MeOH, centrifuged and the
supernatants were combined. Combined supernatant was placed
at 80 8C for 30 min to congeal complex carbohydrates, centrifuged
at 14,000 g for 30 min at 4 8C and the supernatant (10 mL)
was filtered through 0.45 mm filter, evaporated to dryness under a
N2 stream, then re-dissolved in 1 mL HPLC mobile phase (6% acetic
acid in 2 mM Na acetate).
G.E. Leste

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. พืชวัสดุผลไม้ 500 กรัมจากสามแยกเตียง ถูกเก็บรวบรวมสำหรับแต่ละ5 สตรอเบอร์รี่ (Fragaria x ananassa Duchesne ex Rozier) พันธุ์:โอเปรา มอนเทอเรย์ Portola, San Andreas และซีสเคป เหล่านี้พันธุ์มี ''กลางวัน '' และได้รับการพัฒนา โดยมหาวิทยาลัยของแคลิฟอร์เนีย สตรอเบอร์รี่ที่ปลูกที่เฮนรีจากอาอาร์สA. Wallace เกษตรศูนย์วิจัยที่ Beltsville, MD สหรัฐอเมริกาในการระบบอุโมงค์ต่ำ ชั้นพลาสติก Mulch ยกเตียง (Rainflowชลประทาน เอิร์ลตะวันออก PA สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้ไปสามยกขึ้นเตียงบนศูนย์กลาง 182 ซม. ใบหยดเทป แยก 30 ซม. และ7 ซมด้านล่างสองชั้นของพลาสติก mulch ชั้นของ 0.025 มม.สีดำmulch ที่ปกคลุม ด้วยชั้นของ mulch 0.025 มม. ''ขาวบนดำ ''พืชมีปฏิสนธิทุกสัปดาห์กับ 2.27 กิโลกรัม/10000 m2 ไนโตรเจนมีก้านเหล็กกล้าไร้สนิม 5 มม.เส้นผ่าศูนย์กลางซม.ยาว 366ตกอยู่ในพื้นดิน 15 เซนติเมตรจากด้านข้างของเตียง และระยะห่างทุก cm 122 ทำเป็นสนับสนุนห่วงชั้นของแข็ง (ไม่หลุม) 0.098 มม.หนา 366 เซนติเมตรกว้างล้างพลาสติกแผ่น(บริษัทพลาสติกเบอร์รี่ กรี SC, USA) 61 ซม.ผ่านการเตียง ขึ้นรูปอุโมงค์ต่ำพืชป้องกันฝนผลไม้แต่ละถูกเก็บเกี่ยวมือ โดย h เวลา 07.30 มาตรฐานตะวันออกจากพล็อตแต่ละโรงงาน 6 มุ่ง 22 สิงหาคมและ 25สิงหาคม 2554 และโดยอย่างเป็น harvests 1 และ 2ตามลำดับ เลือกผลไม้สุกเต็ม unblemished เท่านั้นสำหรับเพิ่มเติมการประเมินคุณภาพการ ผลไม้ที่ถูกเก็บไว้ในถุงพลาสติกชื่อที่ มีหมายเลขแผน (จำลอง) และแช่ในน้ำแข็งหน้าอก ครบทั้งหมดถูกส่งตรวจทันทีที่พวกเขาถูก assayed ทันทีสำหรับ AsA หรือแช่ที่ 80 8Cต่อมาน้ำตาลและฟีนอวิเคราะห์2.2. เคมีภัณฑ์ฟีนอมาตรฐานแนะนำสำหรับของเหลวประสิทธิภาพสูงวิเคราะห์ phenolics ในสตรอเบอร์รี่ (พัดลม chromatography (HPLC)ร้อยเอ็ด al., 2012) รวม elagic กรด กรด m coumaric, o coumaricกรด กรด p-coumaric, cyanidin 3 glucoside กรด gallic, kaempherol-3-glucosidequercetin-3 glucoside, pelargonidin-3-glucosideและ pelargonidin-3-rutinoside ทั้งหมดของมาตรฐานได้ได้รับจาก บริษัทเคมีซิก (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา), ยกเว้นpelargonidin-3-rutinoside ที่ได้รับสารเคมี Apin(Abingdon สหราชอาณาจักร)2.3. กรดแอสคอร์บิคผลไม้สตรอเบอร์รี่ g หนึ่งถูก homogenized เป็นกลุ่มฉ่ำ 5% (w/v)กรด m phosphoric, centrifuged ที่ g 10000 สำหรับ 15 นาทีที่ 2 8Cแล้ว supernatant ที่ decanted และจอง สตรอเบอร์รี่เม็ดใหม่ถูกสกัด 2 ครั้งเพิ่มเติม จำนวน 15 mL เป็นแนะนำสำหรับสกัด AsA สตรอเบอร์รี่โดย Klopotek et al(2005) กำหนด supernatant รวมในผลรวม และฟรี spectrophotometrically AsA ที่ 525 nm ตามขั้นตอนของ Hodges และ al. (2001) ความเข้มข้น AsA รวม และฟรีมี quantified โดยใช้มาตรฐานการพัฒนาก่อนหน้านี้เส้นโค้งในช่วง 0.002 – 200 mg เส้นโค้งเทียบได้เชิงเส้นในช่วงที่ศึกษา มีสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของ 0.999AsA รวมเท่ากับ AsA ฟรีบวก dehydroascorbic กรด (DAsA)ความเข้มข้นกรด Dehydroascorbic ถูกคำนวณ โดยลบAsA ฟรีจาก AsA รวม2.4. ฟีนอสกัดสำหรับ Folin – Ciocalteu วิเคราะห์รวดเร็วสี BBมีเตรียมตัวอย่างสตรอเบอร์รี่ โดย combing 2.5 g ของตัดเนื้อเยื่อจากการกระดูกครึ่งของเบอร์รี่แช่แข็งที่ก่อนหน้านี้80 C 8 กับ 12 mL 70% ทานอ และ homogenized เป็นกลุ่มที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ30 ใช้โพรบ PT10 35 GT (Brinkman เครื่องมือ Inc.Westbury, NY, USA) ตาม ด้วย dismembration 30 s ใช้การไมโครแนะนำ 35% (ARTEK dismembrator เสียงรุ่น 300 FarmingdaleNY, USA) มี centrifuged Dismembrated homogenatesที่ g 6650 สำหรับ 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องและ supernatantใช้ในการกำหนด phenolics รวม2.5. รวม phenolics ผ่าน Folin – Ciocalteu เร็วฟ้า BB วิธี และHPLC2.5.1. Folin-Ciocalteu ทดสอบFolin-Ciocalteu (F – C) ถูก assayed ตามดิ(2011b) 50 มล.ของตัวอย่าง dismembrated ทำให้เจือจาง 1:4 นอH2O กรด gallic มาตรฐาน หรือ H2O DI สำหรับว่างถูกเพิ่ม13 mm 100 mm borosilicate หลอด ตาม ด้วย 430 mL DI H2Oรีเอเจนต์ 20 mL F – C ผสม และสามารถตอบสนองสำหรับ 5 นาทีก่อนเพิ่ม 20% Na2CO3, 450 mL 50 mL DI H2O ผสม และได้รับอนุญาตให้ยืน 60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง มีวัด absorbance ที่725 nm2.5.2 ทดสอบ BB บลูอย่างรวดเร็วรวดเร็วบลูบีบี (FBBB) ถูก assayed ตามดิ (2011b)ML ของ dismembrated อย่างหนึ่งทำให้เจือจาง 1:20 มี DI H2O, gallicมีเพิ่มกรดมาตรฐานหรือ H2O DI สำหรับว่าง 13 มม. 100 มม.หลอด borosilicate ตาม ด้วย 0.1 mL sonicated 0.1% FBBB [4-benzoylamino-2,5-dimethoxybenzenediazonium คลอไรด์ซีก (-สังกะสีคลอไรด์) เกลือ], ผสมสำหรับ 30 s ตาม ด้วย 0.1 มล. 5% NaOHผสม และสามารถฟักสำหรับ 90 นาทีที่ผสมได้ที่อุณหภูมิห้อง มีวัด absorbance ที่ 420 nm ทั้งสองอย่างมีประเมิน assays กรด gallic มาตรฐานเจือจางหรือผลไม้น้ำตาลผสม (ฟรักโทส กลูโคส ซูโครส) เจือจางมาตรฐาน 00.01562, 0.03125, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.50 mg/mL DI H2O หรือเจือจางมาตรฐาน AsA 0, 0.01562, 0.03125, 0.0625, 0.125, 0.250.50, 1.0 mg/mL DI H2O เทียบเส้นโค้งเป็นเส้นตรงในการช่วงศึกษา ด้วยสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของ 0.9992.5.3 การฟีนอสกัดสำหรับ HPLC กำหนดตัวอย่างสตรอเบอร์รี่ถูกเตรียม โดยรวม 5.0 g ของเนื้อเยื่อที่ตัดจากปลายกระดูกเบอร์รี่แช่แข็งที่ก่อนหน้านี้80 8C % 50 25 mL ทานอ และ homogenized เป็นกลุ่มที่ 10000 rpm สำหรับ1 นาทีใช้โพรบ PT10 35 GT (Brinkman เครื่องมือ Inc.Westbury, NY, USA) ตาม ด้วย dismembration 2 นาทีใช้เป็นไมโครแนะนำ 35% (วิทยาศาสตร์ Fisher dismembrator เสียงรุ่น 300Farmingdale, NY, USA) ในน้ำเป็นน้ำแข็ง Homogenates ได้centrifuged ที่ g 6650 สำหรับ 10 นาทีที่ 4 8C เม็ดได้ถูกสกัดอีกครั้ง ด้วย 5 mL 70% ทานอ centrifuged และsupernatants ถูกรวม รวม supernatant ถูกวางที่ 80 8C ใน 30 นาทีเพื่อ congeal คาร์โบไฮเดรตที่ซับซ้อน centrifugedที่ g 14000 ใน 30 นาทีที่ 4 8C supernatant (10 มล.)ถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.45 มม. หายไปในความแห้งกร้านภายใต้การสตรีม N2 แล้วอีกละลายใน 1 mL ระยะเคลื่อน HPLC (6% อะซิติกกรด 2 มม. acetate นา)G.E. เลสเต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุพืชผลไม้ 500 กรัมจากสามแยกเตียงถูกเก็บไว้สำหรับแต่ละ 5 สตรอเบอร์รี่ (Fragaria ananassa x Duchesne อดีต Rozier) พันธุ์: อัลเบียนเนยแข็ง Portola, San Andreas และซีสเคป เหล่านี้สายพันธุ์ที่ได้รับการ '' วันที่เป็นกลาง '' และได้รับการพัฒนาโดยมหาวิทยาลัยแห่งแคลิฟอร์เนีย สตรอเบอร์รี่ผลไม้ที่ปลูกที่เฮนรี่ USDA-ARS เอ วอลเลซศูนย์วิจัยการเกษตรที่ Beltsville, MD, USA ในระบบต่ำอุโมงค์ คลุมด้วยหญ้าพลาสติกที่พักยก Layer (Rainflow ชลประทานเอิร์ลตะวันออก, PA, สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ในรูปแบบสามเตียงยกขึ้นในศูนย์ 182 ซม. มีสองเส้นของเทปหยดน้ำ 30 ซม. ออกจากกันและ 7 ซม. ด้านล่างสองชั้นของวัสดุคลุมดินพลาสติก ชั้นของ 0.025 มมสีดำคลุมด้วยหญ้าปกคลุมด้วยชั้นของ0.025 มม '' สีขาวบนสีดำ '' คลุมด้วยหญ้า. พืชที่ได้รับการปฏิสนธิรายสัปดาห์ที่มี 2.27 กก. / 10,000 m2 ไนโตรเจน. แท่งสแตนเลส 5 มม 366 เซนติเมตรยาวได้ผลักลงไปในพื้นดิน 15 ซม. จากด้านข้างของเตียงและเว้นระยะห่างทุก122 ซม. จะทำหน้าที่เป็นห่วงการสนับสนุนสำหรับชั้นของของแข็ง (ไม่หลุม) 0.098 มมหนา 366 ซม. กว้างแผ่นพลาสติกใส(แบล็กเบอร์พลาสติกคอร์ปอเรชั่น Greenville, SC, สหรัฐอเมริกา) 61 ซม. ในช่วงเตียงสร้างอุโมงค์ต่ำเพื่อป้องกันพืชจากฝน. ผลไม้ส่วนบุคคลถูกมือเก็บเกี่ยวโดย 07.30 ชั่วโมงมาตรฐานตะวันออกเวลาจากแต่ละแปลง6 โรงงานในตอนเช้าของ 22 สิงหาคมและ 25 เดือนสิงหาคม 2011 และมี ต่อจากนี้จะเรียกว่าครั้งที่ 1 และการเก็บเกี่ยวที่ 2 ตามลำดับ เท่านั้นที่สุกเต็มที่ผลไม้ที่ได้รับการคัดเลือกที่ยอดเยี่ยมสำหรับการประเมินผลที่มีคุณภาพต่อไป ผลไม้ถูกวางไว้ในถุงพลาสติกที่มีข้อความที่มีพล็อต (จำลองแบบ) จำนวนและแช่เย็นในน้ำแข็งหน้าอก ผลเบอร์รี่ทั้งหมดถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการทันทีที่พวกเขาถูก assayed อย่างใดอย่างหนึ่งได้ทันทีสำหรับ AsA หรือแช่แข็งที่ 80 8C สำหรับฟีนอลที่ตามมาและการวิเคราะห์น้ำตาล. 2.2 สารเคมีมาตรฐาน Phenolic แนะนำสำหรับของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงโค(HPLC) การวิเคราะห์ของฟีนอลในสตรอเบอร์รี่ (Fan et al., 2012) รวมถึงกรด elagic กรดม coumaric, o-coumaric กรดกรดพี coumaric, cyanidin-3-glucoside, กรดฝรั่งเศส, kaempherol-3-glucoside, quercetin-3-glucoside, pelargonidin-3-glucoside และ pelargonidin-3-rutinoside ทั้งหมดของมาตรฐานที่ได้รับที่ได้รับจาก Sigma เคมี จำกัด (เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) ยกเว้น pelargonidin-3-rutinoside ซึ่งได้รับจากสารเคมี Apin (Abingdon สหราชอาณาจักร). 2.3 วิตามินซีกรดหนึ่งกรัมผลไม้สตรอเบอร์รี่ที่ถูกปั่นในเย็น 5% (w / v) กรดฟอสฟม, หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 2 8C, แล้วใสถูก decanted และลิขสิทธิ์ สตรอเบอร์รี่เม็ดเป็นอีกครั้งที่ 2 ครั้งที่สกัดเพิ่มเติมรวมเป็น 15 มิลลิลิตรตามที่แนะนำในการสกัดAsA ของสตรอเบอร์รี่โดย Klopotek et al. (2005) สารละลายรวมถูกกำหนดรวมและAsA ฟรี spectrophotometrically ที่ 525 นาโนเมตรไปตามขั้นตอนของฮอดจ์et al, (2001) ความเข้มข้น AsA รวมและเป็นอิสระถูกวัดโดยใช้มาตรฐานการพัฒนาก่อนหน้านี้เส้นโค้งในช่วง0.002-200 มิลลิกรัม เส้นโค้งการสอบเทียบได้รับการเชิงเส้นในช่วงศึกษากับค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของ 0.999. รวม AsA เท่ากับ AsA ฟรีบวกกรด dehydroascorbic (Dasa). ความเข้มข้นของกรด Dehydroascorbic ที่คำนวณได้จากการลบAsA ฟรีจากรวม AsA. 2.4 สกัดฟีนอลสำหรับ Folin-Ciocalteu, ทดสอบอย่างรวดเร็วสีน้ำเงิน BB ตัวอย่างผลไม้สตรอเบอร์รี่ที่ถูกจัดทำขึ้นโดย combing 2.5 กรัมตัดเนื้อเยื่อจากครึ่งปลายของเบอร์รี่แช่แข็งก่อนหน้านี้ที่80 8C กับ 12 มิลลิลิตร 70% เมธานอลและปั่นที่ 12,000 รอบต่อนาที30 วินาที ใช้ PT10-35 GT สอบสวน (Brinkman เครื่องมืออิงค์Westbury, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) ตามด้วย dismembration สำหรับ 30 วินาทีโดยใช้เคล็ดลับไมโครที่35% (ARTEK เสียง dismembrator รุ่น 300 Farmingdale, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) homogenates Dismembrated ถูกหมุนเหวี่ยงที่6,650 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องและใสใช้ในการกำหนดฟีนอลรวม. 2.5 รวมฟีนอลผ่าน Folin-Ciocalteu วิธีการอย่างรวดเร็วและบลูบีบีHPLC 2.5.1 Folin-Ciocalteu ทดสอบFolin-Ciocalteu (F-C) ได้รับการวิเคราะห์ตามที่เมดินา(2011b) ห้าสิบมิลลิลิตรตัวอย่าง dismembrated เจือจาง 1: 4 กับ DI H2O มาตรฐานฝรั่งเศสกรดหรือ DI H2O สำหรับว่างเปล่าถูกบันทึกอยู่ใน13 มิลลิเมตร 100 มิลลิเมตรหลอด borosilicate ตามด้วย 430 มิลลิลิตร DI H2O, 20 มลสาร F-C ผสมและได้รับอนุญาต ที่จะตอบสนองเป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะเพิ่ม50 มล 20% Na2CO3 450 มิลลิลิตร DI H2O ผสมและได้รับอนุญาตให้ยืน60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง การดูดกลืนแสงวัดที่725 นาโนเมตร. 2.5.2 ได้อย่างรวดเร็วการทดสอบบลูบีบีอย่างรวดเร็วสีน้ำเงิน BB (FBBB) ได้รับการวิเคราะห์ตามที่เมดินา (2011b). หนึ่งมิลลิลิตรตัวอย่าง dismembrated 01:20 เจือจางกับ DI H2O, ฝรั่งเศสมาตรฐานกรดหรือDI H2O สำหรับว่างเปล่าถูกบันทึกอยู่ใน 13 มิลลิเมตร 100 มิลลิเมตรหลอดborosilicate, ตามด้วย 0.1 มิลลิลิตร sonicated 0.1% FBBB [4 benzoylamino-2,5-dimethoxybenzenediazonium ครึ่งคลอไรด์ (- สังกะสีคลอไรด์) เกลือ] ผสมสำหรับ 30 วินาทีตามด้วย 0.1 มิลลิลิตร 5% NaOH, ผสมและส่วนผสมที่เกิดที่ได้รับอนุญาตในการฟักไข่ 90 นาทีที่อุณหภูมิห้อง การดูดกลืนแสงวัดที่ 420 นาโนเมตร ทั้งการตรวจประเมินที่มีการลดสัดส่วนมาตรฐานฝรั่งเศสกรดหรือผลไม้ผสมน้ำตาล(ฟรุกโตสกลูโคสซูโครส) ลดสัดส่วนมาตรฐานของ 0, 0.01562, 0.03125, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร DI H2O หรือAsA เจือจางมาตรฐาน 0, 0.01562, 0.03125, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.50, 1.0 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร DI H2O กราฟมาตรฐานที่ได้รับการเชิงเส้นในช่วงการศึกษาที่มีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของ 0.999. 2.5.3 สกัดฟีนอลสำหรับการกำหนด HPLC ตัวอย่างผลไม้สตรอเบอร์รี่ที่ถูกจัดทำขึ้นโดยรวม 5.0 กรัมตัดเนื้อเยื่อจากปลายสุดของเบอร์รี่แช่แข็งก่อนหน้านี้ที่80 8C 25 มิลลิลิตรเมธานอล 50% และปั่นที่ 10,000 รอบต่อนาทีสำหรับ1 นาทีโดยใช้ PT10-35 GT สอบสวน (Brinkman เครื่องมืออิงค์Westbury, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) ตามด้วย dismembration 2 นาทีโดยใช้เคล็ดลับไมโครที่35% (ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับเสียง dismembrator รุ่น 300, Farmingdale, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) ในอ่างน้ำแข็ง homogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่6,650 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 8C เม็ดที่เกิดขึ้นถูกสกัดอีกครั้งกับ5 มิลลิลิตรเมธานอล 70%, ปั่นและsupernatants มารวมกัน ใสรวมถูกวางไว้ที่ 80 8C เป็นเวลา 30 นาทีที่จะทำให้เป็นวุ้นคาร์โบไฮเดรตเชิงซ้อนหมุนเหวี่ยงที่14,000 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 และ 8C ใส (10 มิลลิลิตร) ถูกกรองผ่าน 0.45 มมกรองระเหยแห้งภายใต้กระแสN2 แล้วอีกครั้ง ละลายใน 1 มิลลิลิตร HPLC เฟสมือถือ (6% อะซิติกกรดใน2 มิลลินาอะซิเตท). จีอีเลสเต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุ
ปลูกผลไม้ 500 กรัมจากสามเตียงแยกศึกษาแต่ละ
5 สตรอเบอร์รี่ ( fragaria x ananassa duchesne อดีตโนซีเออร์ ) พันธุ์ :
Albion , Monterey , Portola , San Andreas และทะเล . พันธุ์เหล่านี้
' 'day-neutral ' ' และได้รับการพัฒนาโดยมหาวิทยาลัย
ของแคลิฟอร์เนีย ผลสตรอเบอรี่ที่ปลูกใน usda-ars เฮนรี่
Aศูนย์วิจัยเกษตรที่วอลเลซ Beltsville , MD , USA ในระบบอุโมงค์เป็น
น้อย ยกเตียงพลาสติก mulch เล ( rainflow
ชลประทาน ตะวันออก เอิร์ล , PA , USA ) ใช้รูปแบบสามเตียงยก
ใน 182 ซม. ศูนย์สองบรรทัดของเทปน้ำ 30 ซม. ห่างกัน
7 ซม. ด้านล่าง 2 ชั้น ของการคลุมดินด้วยพลาสติกหนา 0.025 มม. สีดำ
หญ้าปกคลุมด้วยชั้นของ 0.025 มม. ' ' '
'white-on-black คลุมดินปลูกไม้กระถางรายสัปดาห์กับ 2.27 kg / 10 M2 ไนโตรเจน .
แท่งสแตนเลสขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 178 ซม. ยาวถูก
ผลักลงไปในพื้นดิน 15 ซม. จากด้านข้างของเตียง และเว้นระยะทุก 122 cm
ทำเป็นห่วงการสนับสนุนสำหรับชั้นของแข็ง ( ไม่มี
หลุม ) 0.098 มิลลิเมตรหนา 366 ซม. แผ่นพลาสติกใส
( เบอร์พลาสติก Corporation , Greenville , SC , USA ) 61 ซม. เหนือ
เตียงสร้างอุโมงค์ต่ำเพื่อป้องกันพืชจากฝน
ผลไม้แต่ละตัวมือเก็บเกี่ยวโดย 07.30 H
เวลามาตรฐานตะวันออกจากแต่ละ 6-plant พล็อตช่วงเช้าของวันที่ 22 สิงหาคมและ 25
สิงหาคม 2554 และต่อเรียกว่า 1 และ 2 การเก็บเกี่ยว ,
) เฉพาะสุก ผลไม้ ผุดผ่องได้คัดเลือก
การประเมินคุณภาพต่อไป ผลไม้อยู่ในถุงพลาสติก
ป้าย ด้วยพล็อต ( ซ้ำ ) จำนวนและแช่เย็นในน้ำแข็ง
หน้าอก ทั้งหมดเบอร์รี่ถูกส่งตัวไปยังห้องปฏิบัติการที่พวกเขาให้ปริมาณทันที

อาสาหรือแช่แข็งที่ 80 8C การวิเคราะห์ฟีนอลและน้ำตาลที่ตามมา
2.2 . สารเคมี

ฟีโนลิก มาตรฐานแนะนำวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) การวิเคราะห์ผลในสตรอเบอร์รี่ ( พัดลม
et al . ,2555 ) รวม elagic กรด , กรด o-coumaric
m-coumaric , กรด , กรด p-coumaric cyanidin-3-glucoside เพิ่มขึ้น kaempherol-3-glucoside , , , ,

quercetin-3-glucoside pelargonidin-3-glucoside pelargonidin-3-rutinoside , และ . ทั้งหมดของมาตรฐานมี
ได้รับจาก Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO , USA ) ยกเว้น
pelargonidin-3-rutinoside ซึ่งได้จาก apin สารเคมี
( Abingdon , อังกฤษ ) .
2.3กรดแอสคอร์บิค
1 G สตรอเบอร์รี่ผลไม้บดเย็นน้ำแข็ง 5 % ( w / v )
m-phosphoric acid ที่ระดับ 10 , 000 G สำหรับ 15 นาทีที่ 2 จากนั้นนำ 8C
, ถูกริน และสงวน สตรอเบอร์รี่
เม็ดเป็นอีกครั้ง 2 ครั้งเพิ่มเติมสกัด รวมทั้งหมด 15 ml เป็น
แนะนำสำหรับ ASA การสกัดของสตรอเบอรี่ โดย klopotek et al .
( 2005 ) โดยนำตัวอย่างเพื่อรวมรวมและ
ฟรีที่อาสานี้ 525 nm ตาม
ขั้นตอนของ n et al . ( 2001 ) ทั้งหมดฟรีมีปริมาณความเข้มข้นและอาสา
ใช้พัฒนาก่อนหน้านี้มาตรฐาน
โค้งในช่วง 0.002 – 200 มิลลิกรัม ปรับแต่งเส้นโค้งเป็นเส้นตรงในช่วง
เรียนกับสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เท่ากับ 0.999 .
อาสารวมอาสาฟรีบวก dehydroascorbic กรด
( Dasa )ความเข้มข้นของกรด dehydroascorbic คำนวณด้วยการลบ
อาสา ฟรี จาก อาสารวม .
2.4 . การสกัดสารเพื่อ folin – ciocalteu รวดเร็วสีฟ้าบีบี assay
ผลสตรอเบอรี่จำนวนเตรียมโดย combing 2.5 g
เนื้อเยื่อตัดจากครึ่งส่วนของผลเบอร์รี่แช่แข็งที่ก่อนหน้านี้
80 8C 12 ml 70% และปริมาณโฮโมที่ 12 , 000 รอบต่อนาที
30 s โดยใช้ pt10-35 GT โพรบ ( บริคแมนเครื่องมืออิงค์
Westbury , NY , USA ) รองลงมา คือ dismembration 30 s โดยใช้
เคล็ดลับไมโครที่ 35% ( artek โซนิค dismembrator รุ่น 300 Farmingdale
NY , USA ) dismembrated homogenates ถูกไฟฟ้า
ที่ 6650 G สำหรับ 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และที่นำใช้ในการตรวจสอบผลรวม
.
2.5 ปริมาณ total phenolics ผ่าน ciocalteu folin –วิธีการอย่างรวดเร็วและ BB

ดาวน์โหลดสีฟ้า 2 . folin – ciocalteu assay
folin – ciocalteu ( F - C ) ซีรั่มตาม Medina
( 2011b ) 50 มิลลิลิตร dismembrated ตัวอย่างเจือจาง 1 : 4 ด้วยดิ
H2O , กรดแกลลิคมาตรฐานหรือ Di H2O ว่างเพิ่ม

13 มม. 100 มม. borosilicate หลอด ตามด้วย 430 ml di H2O ,
3 F ) C 20 มิลลิลิตร ผสมและอนุญาตให้ตอบสนองสำหรับ 5 นาทีก่อนที่จะเพิ่ม 20% Na2CO3
50 มิลลิลิตร 450 ml di H2O , ผสมและอนุญาตให้
ยืน 60 นาที ที่อุณหภูมิห้องวัดค่าการดูดกลืนแสงที่
725 nm .
งานวาง . เร็วฟ้าบีบี BB ( สีฟ้า )
อย่างรวดเร็ว fbbb ) ซีรั่มตาม Medina ( 2011b )
1 มิลลิลิตร dismembrated เจือจาง 1 : 20 ตัวอย่างกับ di H2O , ฝรั่งเศส
กรดมาตรฐานหรือ Di H2O ว่างเพิ่ม 13 มม. 100 mm
borosilicate หลอด ตามด้วย 0.1 ml sonicated 0.1% fbbb [ -
4 benzoylamino-2,5-dimethoxybenzenediazonium คลอไรด์ Hemi ( -
สังกะสีคลอไรด์เกลือ ]ผสมเป็นเวลา 30 วินาที ตามด้วย 0.1 ml 5 % NaOH
ผสมและผลผสมได้รับอนุญาตให้พักเป็นเวลา 90 นาที
อุณหภูมิห้อง วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 420 นาโนเมตร ทั้ง
) ประเมินด้วยมาตรฐานเพิ่มขึ้นเจือจางหรือผสมผลไม้
น้ำตาล ( น้ำตาลฟรักโทส กลูโคส ซูโครส ) มาตรฐาน ( 0
0.01562 0.03125 , ผล , 0.125 , 0.25 , 0.50 mg / ml di H2O หรือ
ASA มาตรฐาน ( 0 , 001562 0.03125 , ผล , 0.125 , 0.25 , 0.50
1.0 mg / ml di h2o สอบเทียบเส้นโค้งเป็นเส้นตรงใน
ช่วงเรียนกับสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ 0.999 .
2.5.3 . การสกัดสารสำหรับ HPLC หา
ผลสตรอเบอรี่จำนวนเตรียมโดยการรวม 5.0 g
ตัดเนื้อเยื่อจากส่วนปลายของผลเบอร์รี่แช่แข็งที่ก่อนหน้านี้
80 8C กับปริมาณ 25 มิลลิลิตร 50% และบดที่ 10 , 000 รอบต่อนาที
1 นาทีใช้ pt10-35 GT โพรบ ( บริคแมนเครื่องมืออิงค์
Westbury , NY , USA ) รองลงมา คือ dismembration 2 มินใช้
เคล็ดลับไมโครที่ 35% ( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์โซนิค dismembrator รุ่น 300
Farmingdale , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา ) ในน้ำแข็ง อาบ เป็นระดับที่ homogenates
6650 G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 8C ผลเม็ด
ถูกสกัดด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ 70 % อีก 5 ml ระดับและ
supernatants อยู่รวมกันรวมนำอยู่
80 8C 30 นาทีเขาซับซ้อน carbohydrates ไฟฟ้า
ที่ 14000 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 8C และน่าน ( 10 ml )
ถูกกรองผ่านไส้กรอง 0.45 มม. , ระเหยแห้งภายใต้
2 ลำธาร แล้วละลายใน 1 ml 2 เฟสเคลื่อนที่ ( 6% ติค กรดอะซิเตท 2 มิลนา

g.e. เลสเต )