BackgroundPermanently cold environm

Background
Permanently cold environments are widely distributed
on Earth, and include the Polar Regions, mountains and
deep-sea environments. Despite presenting adverse conditions
for life, such as freezing temperatures, low nutrient
availability, high water viscosity and reduced
membrane fluidity, these environments have been successfully
colonized by the three domains of life [1].
Cold-adapted microorganisms can grow at 0°C and are
classified as psychrophilic if their optimum and maximum
temperatures for growth are ≤15°C and ≤ 20, respectively,
or as psychrotolerant (psychrotrophic) if their
maximum temperature for growth is above 20°C [2,3].
Such microorganisms have adapted their vital cellular
processes to thrive in cold environments [4]. They make
essential contributions to nutrient recycling and organic
matter mineralization, via a special class of extracellular
enzymes known as “cold-adapted” or “cold-active”
enzymes [5]. Because these enzymes have a higher catalytic
efficiency than their mesophilic counterparts at
temperatures below 20°C and display unusual substrate
specificities, they are attractive candidates for industrial
* Correspondence: [e-mail]
Laboratorio de Genética, Depto. de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias,
Universidad de Chile, Las Palmeras 3425 Casilla, Santiago 653, Chile
© 2012 Carrasco et al.; licensee BioMed Central Ltd. This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative
Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0), which permits unrestricted use, distribution, and
reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
Carrasco et al. BMC Microbiology 2012, 12:251
http://www.biomedcentral.com/1471-2180/12/251
processes requiring high enzymatic activity at low temperatures.
Cold-adapted enzymes include amylase, cellulase,
invertase, inulinase, protease, lipase and isomerase,
which are used in the food, biofuel and detergent industries
[6]. Largely because of their potential in biotechnological
applications, cold-adapted microorganisms have
become increasingly studied in recent years, yet remain
poorly understood. Of the microorganisms most isolated
and studied from cold environments, the majority are
bacteria, while yeasts constitute a minor proportion [1].
Antarctica is considered the coldest and driest terrestrial
habitat on Earth. It is covered almost totally with
ice and snow, and receives high levels of solar radiation
[7]. The Sub-Antarctic region, including the Shetland
South Archipelago, has warmer temperatures, the soils
close to the sea are free of snow/ice and receive significant
quantities of organic material from marine animals;
however, they are subject to continuous and rapid freethaw
cycles, which are stressful and restrictive to life [8].
Although the first report of Antarctic yeasts was published
50 years ago [9] current reports have focused on
cold-tolerant Bacteria and Archaea, with yeasts receiving
less attention. Yeasts dwelling in Antarctic and Sub-
Antarctic maritime and terrestrial habitats belong mainly
to the Cryptococcus, Mrakia, Candida and Rhodotorula
genera [10-12]. In a recent work, 43 % of Antarctic yeast
isolates were assigned to undescribed species [13],
reflecting the lack of knowledge regarding cultivable
yeasts that colonize the Antarctic soils. Yet these organisms
constitute a valuable resource for ecological and
applied studies.
This work describes the isolation of yeasts from terrestrial
habitats of King George Island, the major island of
the Shetland South archipelago. The yeast isolates were
characterized physiologically and identified at the molecular
level using the D1/D2 and ITS1-5.8S-ITS2
regions of rDNA. In addition, the ability of the yeasts to
degrade simple or complex carbon sources was evaluated
by analyzing their extracellular hydrolytic enzyme
activities. Characterizing these enzyme activities may enhance
the potential of the yeasts in industrial
applications.
Results
Isolation of psychrophilic and psychrotolerant yeasts
The 34 soil and 14 water samples obtained from different
areas of King George Island were processed as
described in the Methods section. The suspensions
obtained from each soil samples were seeded onto nutritive
plates, and incubated in triplicate over a range
of temperatures (4, 10, 15 and 22°C). After 30–90 days
of incubation, approximately 30 to 60 yeast-like colonies
developed on each plate. In contrast, no colonies
or low colony numbers (4 to 8) appeared on plates
from water samples. Because large numbers of isolates
were obtained, isolates were grouped according to their
isolation growth temperature and colony characteristics
such as pigmentation, texture, elevation and size.
Among the 64 groups, several differed only by isolation
growth temperature. These isolates were grown at different
temperatures and re-grouped according to
macromorphological characteristics at their optimal
growth temperature. In this way, 35 groups were ultimately
generated. Several isolates from each group (at
least one isolate per sampling site; a total of 78 isolates)
were selected for molecular and biochemical
analyses.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พื้นหลัง
ถาวรเย็นสภาพแวดล้อมจะนำไปเผยแพร่
บนโลก และภูมิภาคขั้วโลก ภูเขา และ
แวดล้อมทะเลลึก แม้ มีการนำเสนอเงื่อนไขร้าย
ชีวิต เช่นแช่แข็งอุณหภูมิ ต่ำอาหาร
พร้อม ความหนืดของน้ำ และลด
เยื่อไหล สภาพแวดล้อมเหล่านี้ได้สำเร็จ
ยึดครอง โดยโดเมนสามชีวิต [1] .
ปรับเย็นจุลินทรีย์สามารถเจริญเติบโตที่ 0° C และมี
จัดเป็น psychrophilic ถ้าความเหมาะสมและมากที่สุด
≤15 ° C อุณหภูมิสำหรับการเจริญเติบโต และ≤ 20 ตามลำดับ,
หรือ psychrotolerant (psychrotrophic) ถ้าของ
มีอุณหภูมิสูงสุดสำหรับการเติบโตเหนือ 20° C [2,3]
จุลินทรีย์ดังกล่าวได้ดัดแปลงมือถือตนสำคัญ
กระบวนการเจริญเติบโตในสภาพแวดล้อมเย็น [4] พวกเขาทำ
ผลงานสำคัญการสารอินทรีย์ และรีไซเคิล
เรื่อง mineralization ผ่านชั้นเรียนพิเศษของ extracellular
เอนไซม์ที่เรียกว่า "เย็นปรับ" หรือ "การใช้งานเย็น"
เอนไซม์ [5] เนื่องจากเอนไซม์เหล่านี้มีมากตัวเร่งปฏิกิริยา
ประสิทธิภาพกว่าปราบปราม mesophilic ที่
อุณหภูมิต่ำกว่า 20° C และแสดงพื้นผิวปกติ
specificities พวกเขาเป็นผู้สมัครที่น่าสนใจสำหรับอุตสาหกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พื้นหลัง
สภาพแวดล้อมที่เย็นอย่างถาวรได้รับการกระจายอย่างกว้างขวาง
บนโลกและรวมถึงขั้วโลกภูมิภาคภูเขาและ
สภาพแวดล้อมในทะเลลึก แม้จะมีการนำเสนอเงื่อนไขที่ไม่พึงประสงค์
สำหรับชีวิตเช่นอุณหภูมิแช่แข็งสารอาหารต่ำ
มีความหนืดสูงและน้ำลด
การไหลเยื่อสภาพแวดล้อมเหล่านี้ได้รับการประสบความสำเร็จใน
อาณานิคมโดยสามโดเมนของชีวิต [1]
จุลินทรีย์เย็นดัดแปลงสามารถเจริญเติบโตได้ที่ 0 ° C และได้รับการ
จัดเป็น psychrophilic ถ้าเหมาะสมและสูงสุดของพวกเขา
ที่มีอุณหภูมิสำหรับการเจริญเติบโตเป็น≤ 15 ° C และ≤ 20 ตามลำดับ
หรือเป็นที่ทนความเย็น (psychrotrophic) ถ้าพวกเขา
อุณหภูมิสูงสุดสำหรับการเจริญเติบโตที่สูงกว่า 20 ° C [2,3]
จุลินทรีย์ดังกล่าวมี ปรับตัวโทรศัพท์มือถือที่สำคัญของพวกเขา
กระบวนการการเจริญเติบโตในสภาพแวดล้อมที่เย็น [4] พวกเขาทำ
ผลงานที่สำคัญในการรีไซเคิลสารอาหารและอินทรีย์
สารแร่ผ่านทางชั้นพิเศษของสาร
เอนไซม์ที่เรียกว่า "เย็นเหมาะ" หรือ "เย็นงาน"
เอนไซม์ [5] เพราะเอนไซม์เหล่านี้มีปัจจัยที่สูงขึ้น
อย่างมีประสิทธิภาพกว่าคู่ของพวกเขาที่อุณหภูมิปานกลาง
อุณหภูมิต่ำกว่า 20 ° C และแสดงพื้นผิวที่ผิดปกติ
ไม่เฉพาะเจาะจงที่พวกเขาเป็นผู้สมัครที่น่าสนใจสำหรับอุตสาหกรรม
จดหมาย *: [e-mail]
Laboratorio de Genetica, Depto เดอ Ciencias Ecologicas, Facultad de Ciencias,
Universidad de Chile, Las Palmeras 3425 ลาปาซ, ซันติอาโก 653, ชิลี
© 2012 Carrasco et al,. ผู้รับใบอนุญาต BioMed เซ็นทรัล จำกัด นี้เป็นบทความเปิดเข้ากระจายภายใต้เงื่อนไขของครีเอทีฟ
คอมมอนส์แสดงใบอนุญาต (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0) ซึ่งอนุญาตให้ใช้ไม่ จำกัด , การจัดจำหน่ายและ
การทำสำเนาในสื่อใด ๆ ให้ทำงานเดิมจะอ้างอย่างถูกต้อง
Carrasco et al, บีเอ็มซีจุลชีววิทยา 2012, 12:251
http://www.biomedcentral.com/1471-2180/12/251
กระบวนการที่ต้องใช้การทำงานของเอนไซม์สูงที่อุณหภูมิต่ำ
เอนไซม์เย็นดัดแปลงรวมถึงอะไมเลส, เซลลูเลส,
อิน inulinase, protease, เอนไซม์ไลเปสและ isomerase,
ที่ใช้ในอาหารเชื้อเพลิงชีวภาพและผงซักฟอกอุตสาหกรรม
[6] ส่วนใหญ่เพราะการที่มีศักยภาพของพวกเขาในทางเทคโนโลยีชีวภาพ
การประยุกต์ใช้จุลินทรีย์เย็นที่ปรับได้
กลายเป็นที่ศึกษามากขึ้นในปีที่ผ่านมา แต่ยังคง
เข้าใจ ของเชื้อจุลินทรีย์ที่แยกได้มากที่สุด
และการศึกษาจากสภาพแวดล้อมที่เย็นส่วนใหญ่เป็น
เชื้อแบคทีเรียในขณะที่ยีสต์เป็นสัดส่วนเล็กน้อย [1]
แอนตาร์กติกาถือว่าเป็นโลกที่หนาวเย็นที่วิเศษสุดและ
ที่อยู่อาศัยอยู่บนโลก มันถูกปกคลุมเกือบทั้งหมดด้วย
น้ำแข็งและหิมะและได้รับระดับสูงของรังสีแสงอาทิตย์
[7] ภูมิภาคย่อยแอนตาร์กติกรวมทั้งเช็ต
ใต้เกาะมีอุณหภูมิที่อุ่นขึ้นดินที่
อยู่ใกล้กับทะเลเป็นอิสระจากหิมะ / น้ำแข็งและได้รับอย่างมีนัยสำคัญ
ปริมาณของวัสดุอินทรีย์จากสัตว์ทะเล;
แต่พวกเขาอาจมีการอย่างต่อเนื่องและอย่างรวดเร็ว freethaw
รอบ ซึ่งเป็นความตึงเครียดและมีข้อ จำกัด ในการดำรงชีวิต [8]
แม้ว่ารายงานครั้งแรกของยีสต์แอนตาร์กติกรับการตีพิมพ์
50 ปีที่ผ่านมา [9] รายงานปัจจุบันมีความสำคัญกับ
แบคทีเรียทนความเย็นและเคีด้วยยีสต์ที่ได้รับ
ความสนใจน้อย ยีสต์ที่อาศัยอยู่ในขั้วโลกใต้และตำบล
ทะเลแอนตาร์กติกและที่อยู่อาศัยบนพื้นดินเป็นส่วนใหญ่
ที่จะ Cryptococcus, Mrakia, Candida และ Rhodotorula
จำพวก [10-12] ในการทำงานที่ผ่านมา 43% ของยีสต์แอนตาร์กติก
สายพันธุ์ได้รับมอบหมายให้ undescribed สายพันธุ์ [13]
สะท้อนให้เห็นถึงการขาดความรู้เกี่ยวกับการเพาะปลูก
ยีสต์ที่อาณานิคมดินแอนตาร์กติก ยังมีชีวิตเหล่านี้
เป็นทรัพยากรที่มีคุณค่ากับระบบนิเวศและ
การศึกษานำไปใช้
งานนี้จะอธิบายถึงการแยกของยีสต์จากภาคพื้นดิน
ที่อยู่อาศัยของกษัตริย์จอร์จเกาะเกาะหลักของ
หมู่เกาะเช็ตใต้ เชื้อยีสต์ที่
มีลักษณะทางสรีรวิทยาและระบุที่โมเลกุล
ระดับการใช้ D1/D2 และบริเวณ ITS1-5.8S-ITS2
ภูมิภาคของ rDNA นอกจากนี้ความสามารถของยีสต์เพื่อ
ลดแหล่งคาร์บอนเรียบง่ายหรือซับซ้อนได้รับการประเมิน
โดยการวิเคราะห์ของพวกเขาเอนไซม์ย่อยสลายสาร
กิจกรรม พัฒนาการกิจกรรมเอนไซม์เหล่านี้อาจเพิ่ม
ศักยภาพของยีสต์ในอุตสาหกรรม
การประยุกต์ใช้
ผล
การแยกเชื้อยีสต์ที่ทนความเย็นและ psychrophilic
34 ดินและ 14 ตัวอย่างน้ำที่ได้รับจากการที่แตกต่างกัน
พื้นที่ของกษัตริย์จอร์จเกาะที่ถูกประมวลผลที่
อธิบายไว้ในส่วนวิธีการ ช่วงล่าง
ที่ได้รับจากแต่ละตัวอย่างดินเมล็ดบนทางโภชนาการ
จานและบ่มในเพิ่มขึ้นสามเท่าในช่วง
อุณหภูมิ (4, 10, 15 และ 22 ° C) หลังจาก 30-90 วัน
ของการบ่มประมาณ 30 ถึง 60 อาณานิคมยีสต์เช่น
การพัฒนาในแต่ละจาน ในทางตรงกันข้ามไม่มีอาณานิคม
หรือตัวเลขอาณานิคมต่ำ (4-8) ปรากฏอยู่บนแผ่น
จากตัวอย่างน้ำ เพราะจำนวนมากของสายพันธุ์
ที่ได้รับ, สายพันธุ์ที่ถูกจัดกลุ่มตามพวกเขา
อุณหภูมิการเจริญเติบโตและการแยกอาณานิคมลักษณะ
เช่นสีเนื้อสูงและขนาด
ใน 64 กลุ่มหลายแตกต่างโดยเฉพาะการแยก
อุณหภูมิการเจริญเติบโต เชื้อเหล่านี้ได้รับการเจริญเติบโตที่แตกต่างกัน
อุณหภูมิและ re-จัดกลุ่มตาม
ลักษณะ macromorphological ที่ดีที่สุดของพวกเขา
อุณหภูมิการเจริญเติบโต ด้วยวิธีนี้ 35 กลุ่มในที่สุดได้รับการ
สร้างขึ้น หลายสายพันธุ์จากแต่ละกลุ่ม (อย่าง
น้อยหนึ่งแยกต่อเว็บไซต์สุ่มตัวอย่างทั้งหมด 78 ไอโซเลท)
ถูกเลือกสำหรับการโมเลกุลและชีวเคมี
วิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นหลังเย็นสภาพแวดล้อมที่มีการกระจายอย่างกว้างขวางถาวร

บนโลกและรวมถึงพื้นที่ขั้วโลก ภูเขา
สภาพแวดล้อมในทะเลลึก . แม้จะมีการเสนอ
สภาวะที่ไม่พึงประสงค์สำหรับชีวิต เช่น อุณหภูมิแช่แข็ง ปริมาณธาตุอาหาร
ต่ำ ความหนืดสูงและลด
เมมเบรนไหล สภาพแวดล้อมเหล่านี้ได้รับเรียบร้อยแล้ว
เมืองขึ้นสามโดเมนของชีวิต [ 1 ] .
เย็นดัดแปลงจุลินทรีย์สามารถเติบโตที่ 0 ° C และมี
จัดเป็นไซโครฟิลิกถ้าตนที่เหมาะสมและอุณหภูมิสูงสุด
สำหรับการเจริญเติบโตเป็น≤ 15 ° C และ 20 , ≤ตามลำดับ
หรือ psychrotolerant ( ไซโครโทรป ) ถ้าอุณหภูมิสูงสุดสำหรับการเจริญเติบโตของพวกเขา
อยู่เหนือ 20 ° C [ 2 , 3 ] .

ได้ดัดแปลงเช่นจุลินทรีย์ มือถือของตนที่สำคัญกระบวนการเจริญเติบโตในสภาพแวดล้อมที่เย็น [ 4 ] พวกเขาให้
สําคัญต่อสารอาหารและการรีไซเคิล
อินทรีย์ผ่านคลาสพิเศษของเอนไซม์ extracellular
เรียกว่าเย็น " ดัดแปลง " หรือ " งานเย็น "
เอนไซม์ [ 5 ] เพราะเอนไซม์เหล่านี้มีสูงขึ้นกว่าคู่ของพวกเขาและมีประสิทธิภาพเร่ง

20 ° C ที่อุณหภูมิต่ำกว่าและแสดงผลผิดปกติ (
- พวกเขาเป็นผู้สมัครที่น่าสนใจสำหรับอุตสาหกรรม
* ติดต่อ : mbaeza @ u.uchile . C1
laboratorio de Gen ใหม่เพื่อ depto . เดเซียนเซียส Ecol ó gicas facultad เซียนเซียส , เดอ , Universidad เดอชิลี (
, palmeras 3425 casilla Santiago 653 , ชิลี
© 2012 คาร์รัสโค้ et al . ; ผู้ biomed กลางนี้เป็นการเปิดบทความเผยแพร่ภายใต้เงื่อนไขของใบอนุญาต Commons Attribution สร้างสรรค์
( http : / / creativecommons . org / ใบอนุญาต / โดย / 2.0 )ที่อนุญาตให้ใช้ ไม่จำกัดการกระจายและ
การสืบพันธุ์ในสื่อใด ๆ ให้ทำงานเดิมถูกอ้างถึง .
คาร์รัสโค้ et al . BMC จุลชีววิทยา 2012 , 12:251
http : / / www.biomedcentral . com / 1471-2180 / 12 / 251
กระบวนการใช้เอนไซม์สูงที่อุณหภูมิต่ำ .
เย็นดัดแปลงเอนไซม์เซลลูเลส อะไมเลส รวม , เย็น inulinase
, เอนไซม์ไลเปส โปร และ ไอโซเมอเรส
,ที่ใช้ในอุตสาหกรรมอาหาร ,
[ 6 ] เชื้อเพลิงชีวภาพและผงซักฟอก ส่วนใหญ่เพราะของศักยภาพในการใช้งานด้านจุลินทรีย์ได้

เย็นดัดแปลงเป็นมากขึ้นศึกษาในปีล่าสุด แต่ยังคง
ไม่ค่อยเข้าใจ . ของจุลินทรีย์ และศึกษาจากสภาพแวดล้อมที่แยกมาก

เย็น ส่วนใหญ่เป็นแบคทีเรีย ในขณะที่ยีสต์เป็นสัดส่วนเล็กน้อย
[ 1 ]ทวีปแอนตาร์กติกา ถือว่าหนาวเย็นและแห้งบก
สิ่งแวดล้อมบนโลก มันครอบคลุมเกือบทั้งหมดด้วย
น้ำแข็งและหิมะและได้รับระดับรังสี
[ 7 ] สถานีขั้วโลกใต้ภูมิภาค รวมทั้งหมู่เกาะเช็ต
ใต้มีอุณหภูมิอุ่นขึ้น ดิน
ใกล้ทะเลฟรีหิมะ / น้ำแข็งและได้รับปริมาณที่แตกต่างกันของวัสดุอินทรีย์จากสัตว์ทะเล

;อย่างไรก็ตาม พวกเขามีอย่างต่อเนื่องและวงจร freethaw
อย่างรวดเร็วซึ่งจะเคร่งเครียด และเข้มงวดกับชีวิต [ 8 ] .
ถึงแม้ว่ารายงานแรกของโลก โดยยีสต์ที่ถูกตีพิมพ์
เมื่อ 50 ปีก่อน [ 9 ] ปัจจุบันมีรายงานเน้น
แบคทีเรียใจกว้างเย็นและอาร์เคีย กับยีสต์ที่ได้รับ
สนใจน้อยลง ยีสต์ที่อาศัยอยู่ในแอนตาร์กติกและ sub -
แอนตาร์กติกทะเลและบกถิ่นอาศัยอยู่ส่วนใหญ่
กับล. mrakia Candida , และสกุล Rhodotorula
[ เปิด ] ในงานล่าสุด 43% ของแอนตาร์คติคยีสต์
ไอโซเลทมอบหมาย undescribed พันธุ์ [ 13 ] ,
สะท้อนให้เห็นถึงการขาดความรู้เกี่ยวกับเพาะปลูก
ยีสต์ที่อพยพดินแอนตาร์กติก แต่สิ่งมีชีวิตเหล่านี้
เป็นทรัพยากรที่มีคุณค่าสำหรับระบบนิเวศและ

ใช้ศึกษางานนี้อธิบายถึงการแยกยีสต์จากบก
ที่อยู่อาศัยของกษัตริย์จอร์จที่เกาะ , เกาะหลักของหมู่เกาะเช็ตใต้
. ยีสต์ไอโซเลท
ลักษณะสรีรศาสตร์และระบุระดับโมเลกุล
ใช้ D1 / D2 และ its1-5.8s-its2
ภูมิภาคด้วย . นอกจากนี้ ความสามารถของยีสต์

ลดง่ายหรือซับซ้อนแหล่งคาร์บอนถูกประเมิน
จากการวิเคราะห์พบว่า กิจกรรมของเอนไซม์ย่อยสลาย
. ลักษณะกิจกรรมของเอนไซม์เหล่านี้อาจเพิ่ม
ศักยภาพของยีสต์ในอุตสาหกรรม
.

แยกผลของไซโครฟิลิก psychrotolerant และยีสต์
34 และ 14 ตัวอย่างน้ำ ดินที่ได้จากพื้นที่ที่แตกต่างกัน
ของกษัตริย์จอร์จที่เกาะถูกแปรรูปเป็น
อธิบายในส่วนของวิธีการ สารแขวนลอย
ที่ได้จากแต่ละตัวอย่างดินเป็นเมล็ดลงบนจานอาหารโดยทั้งสามใบ

ช่วงอุณหภูมิ ( 5 , 10 , 15 และ 22 ° C ) หลังจาก 30 - 90 วัน
บ่มประมาณ 30 ถึง 60 ยีสต์เช่นอาณานิคม
พัฒนาในแต่ละจาน ในทางตรงกันข้ามไม่มีอาณานิคมอาณานิคม
หรือตัวเลขต่ำ ( 4 8 ) ปรากฏบนแผ่น
จากตัวอย่างน้ำ เนื่องจากตัวเลขขนาดใหญ่ของสายพันธุ์
ถูกพบที่ได้จากแต่ละตัวอย่างดินเป็นเมล็ดลงบนจานอาหารโดยทั้งสามใบ

ช่วงอุณหภูมิ ( 5 , 10 , 15 และ 22 ° C ) หลังจาก 30 - 90 วัน
บ่มประมาณ 30 ถึง 60 ยีสต์เช่นอาณานิคม
พัฒนาในแต่ละจาน ในทางตรงกันข้ามไม่มีอาณานิคมอาณานิคม
หรือตัวเลขต่ำ ( 4 8 ) ปรากฏบนแผ่น
จากตัวอย่างน้ำ เนื่องจากตัวเลขขนาดใหญ่ของสายพันธุ์
ถูกพบไอโซเลตเป็นจัดกลุ่มตามอุณหภูมิ และ ลักษณะของโคโลนีแยก

เช่น สี พื้นผิว ความสูงและขนาด .
ระหว่าง 64 กลุ่ม หลายด้านโดยเฉพาะอุณหภูมิในการแยก

ไอโซเลทเหล่านี้ปลูกที่อุณหภูมิแตกต่างกัน

และจัดกลุ่มตามลักษณะ macromorphological อุณหภูมิการเจริญเติบโตที่เหมาะสม

ในวิธีนี้35 กลุ่มสุด
สร้าง หลายสายพันธุ์จากแต่ละกลุ่ม (
1 แยกต่อเว็บไซต์ ตัวอย่างทั้งหมด 78 แยก )

และคัดเลือกโมเลกุลทางชีวเคมีวิเคราะห์ข้อมูล