3.5.3. HPLC method developmentAll t

3.5.3. HPLC method development

All the isolates were subjected to biological screening and scandenone (8), scandinone (9), scandenin A (6), scandenin B (7) and 4′, 5′, 7-trihydroxybiprenyl isoflavone (4) were identified as the bioactive molecules having moderate free radical scavenging and α-glucosidase inhibitory activity. Good separation of these bioactive isolates was achieved by the newly developed reversed-phase HPLC method. Our efforts towards developing the present method included, an isocratic mobile phase with 80% acetonitrile and 20% water, which gave good separation of all the isolates except scandenin A and scandenone which are eluting with very low retention difference. Changing the mobile phase to 70% acetonitrile and 30% water brought good separation of scandenin A and scandinone but scandenone was not eluting out. Hence, the mobile phase was changed to methanol and water mixture (80/20) which also gave good separation of these five compounds but the other compounds present in the extract were not getting resolved properly. Therefore a gradient mixture comprising of acetonitrile and water (Table 1) was found to be the correct mobile phase for quantification of these compounds in crude extract of D. scandens. Retention times of scandinone, scadenone, scandenin A, scandenin B and 4′, 5′, 7-trihydroxybiprenyl isoflavone are15.81, 22.01, 17.05, 4.33 and 12.52 min, respectively. Calibration graphs pertaining to the active isolates were drawn for each compound and estimated with respect to the dried plant material. HPLC chromatogram of methanol extract of D. scandens is shown in Fig. 2.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.5.3. HPLC วิธีพัฒนาทั้งหมดแยกได้ถูกคัดกรองและ scandenone (8), scandinone (9), scandenin ชีวภาพต่อ (6), scandenin 4′, 5 ′, isoflavone 7-trihydroxybiprenyl (4) และ B (7) ระบุเป็นโมเลกุลออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่มี scavenging และα-glucosidase กิจกรรมยับยั้งอนุมูลอิสระปานกลาง แยกดีแยกออกฤทธิ์ทางชีวภาพเหล่านี้สำเร็จ โดยวิธี HPLC เฟสกลับพัฒนาขึ้นใหม่ ความพยายามของเราไปสู่การพัฒนาวิธีการปัจจุบันรวม เฟสเคลื่อน isocratic acetonitrile 80% น้ำ 20% ซึ่งทำให้การแยกดีทั้งหมดแยกยกเว้น scandenin A และ scandenone ซึ่ง eluting มีความแตกต่างของการเก็บรักษาต่ำมาก การเปลี่ยนเฟสเคลื่อน acetonitrile และ 30% น้ำ 70% นำมาแบ่งแยกดี scandenin A และ scandinone แต่ scandenone ไม่ถูก eluting ออก ด้วยเหตุนี้ ขั้นตอนการเคลื่อนเปลี่ยนเป็นเมทานอลและน้ำผสม (80/20) ซึ่งยัง ทำให้สารเหล่านี้ห้าแยกดี แต่อื่น ๆ สารประกอบในสารสกัดถูกไม่ได้รับการแก้ไขอย่างถูกต้อง ดังนั้น การไล่ระดับสีผสมประกอบด้วย acetonitrile และน้ำ (ตาราง 1) พบว่ามีระยะเคลื่อนถูกต้องสำหรับนับจำนวนสารเหล่านี้ในสารสกัดหยาบของ D. scandens เวลาเก็บรักษาของ scandinone, scadenone, scandenin A, scandenin B และ 4′, 5 ′, 7 trihydroxybiprenyl isoflavone are15.81, 22.01, 17.05, 4.33 12.52 นาที ตามลำดับ กราฟปรับเทียบการแยกใช้งานวาดสำหรับแต่ละสาร และประเมินเกี่ยวกับวัสดุโรงงานอบแห้ง HPLC chromatogram ของสารสกัดเมทานอลของ D. scandens จะแสดงในรูปที่ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.5.3 วิธี HPLC พัฒนา

สายพันธุ์ทั้งหมดถูกยัดเยียดให้ตรวจคัดกรองทางชีวภาพและ scandenone (8), scandinone (9), scandenin A (6), scandenin B (7) และ 4 '5' 7 trihydroxybiprenyl isoflavone (4) ถูกระบุว่าเป็น โมเลกุลออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่มีปานกลางขับอนุมูลอิสระและα-glucosidase ยับยั้ง แยกดีของเชื้อออกฤทธิ์ทางชีวภาพเหล่านี้เกิดขึ้นจากการพัฒนาขึ้นใหม่วิธี HPLC ย้อนกลับเฟส ความพยายามของเราต่อการพัฒนาวิธีการในปัจจุบันรวมระยะ isocratic มือถือกับ acetonitrile 80% และน้ำ 20% ซึ่งทำให้การแยกที่ดีของเชื้อทั้งหมดยกเว้น scandenin A และ scandenone ซึ่งจะมีความแตกต่าง eluting การเก็บรักษาที่ต่ำมาก การเปลี่ยนเฟสเคลื่อนที่เพื่อ acetonitrile และ 30% น้ำ 70% นำมาแยกที่ดีของ scandenin A และ scandinone แต่ scandenone ไม่ได้ eluting ออก ดังนั้นเฟสเคลื่อนที่ได้เปลี่ยนไปเป็นเมทานอลและน้ำผสม (80/20) ซึ่งทำให้การแยกที่ดีของสารเหล่านี้ห้า แต่สารประกอบอื่น ๆ ที่มีอยู่ในสารสกัดไม่ได้รับการแก้ไขอย่างถูกต้อง ดังนั้นส่วนผสมลาดประกอบด้วย acetonitrile และน้ำ (ตารางที่ 1) พบว่ามีขั้นตอนการโทรศัพท์มือถือที่ถูกต้องสำหรับการหาปริมาณของสารเหล่านี้ในสารสกัดหยาบของ scandens ดี เวลาการเก็บรักษา scandinone, scadenone, scandenin A, B และ scandenin 4 ', 5' 7 trihydroxybiprenyl are15.81 isoflavone, 22.01, 17.05, 4.33 และ 12.52 นาทีตามลำดับ กราฟการสอบเทียบที่เกี่ยวข้องกับสายพันธุ์ที่ใช้งานถูกดึงสำหรับแต่ละสารและประมาณการเกี่ยวกับวัสดุจากพืชแห้ง chromatogram HPLC ของสารสกัดเมทานอลของ scandens D. แสดงในรูป 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.5.3 . พัฒนาวิธี HPLCทุกสายพันธุ์จะถูกคัดกรองทางชีวภาพและ scandenone ( 8 ) , ( 9 ) , scandinone scandenin ( 6 ) ( 7 ) และ scandenin บี 4 นั้นได้รับ 7-trihydroxybiprenyl ไอโซฟลาโวน ( 5 , 4 ) ถูกระบุว่าเป็นสารที่มีโมเลกุลปานกลางอนุมูลอิสระและยับยั้งการแอลฟากลูโคซิเดสของกิจกรรม การแยกสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพของสายพันธุ์เหล่านี้ทำโดย reversed-phase ที่พัฒนาขึ้นใหม่โดยวิธี ความพยายามของเราในการพัฒนาวิธีการที่ใช้ในปัจจุบันรวมเป็น Isocratic เฟสเคลื่อนที่กับไน 80% และน้ำ 20% ซึ่งทำให้การแยกที่ดีของทุกสายพันธุ์ยกเว้น scandenin และ scandenone ซึ่งแตกต่างกับ hexane ความคงทนต่ำมาก การเปลี่ยนเฟสเคลื่อนที่ไน 70 % และน้ำ 30 % ทำให้การแยก scandenin และ scandinone แต่ scandenone ไม่ได้ hexane ออก ดังนั้น เฟสเคลื่อนที่ไปผสมเมทานอลและน้ำ ( 80 / 20 ) ซึ่งก็ให้แยกที่ดีของเหล่านี้ห้าสารประกอบแต่อื่น ๆ สารสกัด ปัจจุบันไม่ได้รับการแก้ไขอย่างถูกต้อง ดังนั้น การไล่ระดับสีผสม ประกอบด้วย ไน และน้ำ ( ตารางที่ 1 ) พบว่า มีการถูกต้องเป็นเฟสเคลื่อนที่สำหรับปริมาณของสารประกอบเหล่านี้ในสารสกัดดี. scandens . ความคงทนของ scandinone scadenone scandenin ครั้ง , , , scandenin B และ 4 ได้รับ 5 นั้น 7-trihydroxybiprenyl are15.81 22.01 , isoflavone , คือ , และ , 4.33 12.52 นาที ตามลำดับ ปรับแต่งกราฟ ที่เกี่ยวข้องกับงานวาดสำหรับสารแต่ละไอโซเลทและประมาณการเกี่ยวกับพืชที่แห้งวัสดุ HPLC chromatogram เมทานอลของ D . scandens จะแสดงในรูปที่ 2