- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Acta Histochemica 117 (2015) 624–62
Acta Histochemica 117 (2015) 624–628
Contents lists available at ScienceDirect
Acta Histochemica
j ou rnal homepage: www.elsevier.de/acthis
Expression and tissue distribution of hepatocyte growth factor (HGF)
and its receptor (c-Met) in alpacas (Vicugna pacos) skins associated
with white and brown coat colors
Xiuju Yu1, Xiaoyan He 1, Junbing Jiang, Junping He, Ruiwen Fan, Haidong Wang,
Jianjun Geng, Changsheng Dong∗
College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu, Shanxi, 030801, PR China
a r t i c l e i n f o
Article history:
Received 19 March 2015
Received in revised form 28 May 2015
Accepted 4 June 2015
Keywords:
HGF
c-Met
Alpaca
Coat color
Skin
a b s t r a c t
Hepatocyte growth factor (HGF)/c-Met signaling has been considered as a key pathway in both
melanocyte development and melanogenesis. To understand better the expression patterns and tissue
distribution characterization of HGF and its receptor c-Met in skin of white versus brown alpaca
(Vicugna pacos), we detected the tissue distribution of HGF and c-Met using immunohistochemistry and
analyzed the expression patterns by using Western blot and quantitative real time PCR (qPCR). Immunohistochemistry
analysis demonstrated that HGF staining robustly increased in the dermal papilla and
mesenchymal cells of white alpaca skin compared with that of brown. However, c-Met staining showed
strongly positive result, particularly inhair matrix and root sheath in brown alpaca skin. Western blot
and qPCR results suggested that HGF and c-Met were expressed at significantly high levels in white and
brown alpaca skins, respectively, and protein and transcripts possessed the same expression pattern in
white and brown alpaca skins. The results suggested that HGF/c-Met signaling functions in alpaca coat
color formation offer essential theoretical basis for further exploration of the role of HGF/c-Met signaling
in pigment formation.
© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.
Introduction
In adult animals, coat color is dependent on pigment-producing
melanocytes that localize at the dermal border and transfer
melanin-containing organelles to adjacent keratinocytes that are
pushed upward as they proliferate (Barsh, 2007). Melanocyte
generates two distinct types of melanin, namely, the yellow
to reddish pheomelanins and the black to brown eumelanins
(Ito and Wakamatsu, 2008, Pape et al., 2008). Melanin synthesis
is regulated by more than 350 genes in mammals, including
melanogenic enzymes, transcription factors, hormones, neurotransmitters,
cytokines, and growth factors (Slominski et al., 2004,
Yamaguchi and Hearing, 2009, Montoliu et al., 2015). However, the
molecular and cellular mechanisms regulating coat color in woolproducing
animal have not been completely elucidated.
Alpacas have more than 22 natural coat colors; thus, the
species is therefore suited for studies on the mechanism of
∗ Corresponding author. Tel.: +86 354 628 9208; fax: +86 354 628 9208.
E-mail address: sxnddcs@126.com (C. Dong). 1 The authors contributed equally to the work.
natural coat color formation (Lupton et al., 2006, Mcgregor,
2006). Previous studies, including those we conducted, demonstrated
that the three pigmentation critical enzymes, namely,
tyrosinase (Tyr), tyrosinase-related protein 1 (Tyrp1), tyrosinaserelated
protein 2 (DCT), and the critical factors, which include
melanocortin-1 receptor protein (Mc1r), inducible nitric oxide synthase,
micropthalmia-associated transcription factor (MITF), solute
carrier family 7 member 11(Slc7a11), and -catenin, were stimulators
of melanogenesis in alpaca and agouti signaling proteins (Asip),
miR-25 and miR-137 were inhibitors of melanogenesis in alpaca
(Feeley and Munyard, 2009, Zhu, 2010, Chandramohan, 2013, Dong,
2012, Xue et al., 2014).
Although the role of numerous genes in regulating the coat
color of mice, dog, cat, and sheep has been verified (Kaelin and
Barsh, 2013, Fan et al., 2013, Sturm, 2009, Montoliu et al., 2015),
minimal knowledge on the potential role of hepatocyte growth
factor (HGF)/c-Met signaling in the forming of alpaca coat color
is available. HGF is a polypeptide growth factor consisting of heavy
and light chains linked by a disulfide bond; the receptor
for HGF is a 145 kDa protein with tyrosine kinase activity that is
the product of the c-Met proto-oncogene (Hirobe et al., 2004). In
normal skin, c-Met present on epithelial cells and melanocytes
http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2015.06.002
0065-1281/© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.
X. Yu et al. / Acta Histochemica 117 (2015) 624–628 625
control multiple aspects of melanocyte function in response to
HGF, which is upregulated by ultraviolet radiation (UVR) exposure
in keratinocytes and fibroblasts (Mildner, 2007, Soong, 2012).
In normal melanocytes, HGF/c-Met signaling has been observed
to play a role not only for survival, proliferation, and differentiation
of melanocyte precursors, but also for melanogenesis by
regulating Tyr and MITF (Kos, 1999, Mcgill, 2006, Cheli et al., 2010).
Although previous evidence has indicated that HGF/c-Met has a
function in melanocyte development and melanogenesis regulation,
the expression and localization of HGF/c-Met in alpacas have
not been fully elucidated. In this study, we observed the localization
of HGF/c-Met protein within the skin tissue using immunohistochemistry
and analyzed its transcript and protein expression level
in the skin of white and brown alpacas. Results indicated that
HGF/c-Met signaling may have a function in coat-color regulation
and melanogenesis in alpacas.
Materials and methods
Animals and tissue collection
Housing and care of alpacas and collection of skin samples
that were used in the experiments were conducted in accordance
with the International Guiding Principles for Biomedical
Research Involving Animals (http://www.cioms. ch/frame 1985
texts of guidelines.htm) and approved by the Animal Experimentation
Ethics Committee of Shanxi Agricultural University, Taigu,
China. Three pieces of skin were harvested from the hindquarters of
each alpaca (3 white and 3 brown) by 8 mm (biopsy punches Miltex,
Japan). Two biopsies were immediately stored in liquid nitrogen
for RNA and protein extractions, and the third biopsy was fixed in
Bouin’s solution for 24 h at 4 ◦C and then extensively washed in
70% ethanol. Subsequently, the fixed samples were dehydrated in a
graded series of ethanol(85%, 95%, and 100%), cleared in xylene, and
embedded in paraffin wax. Sections of skin tissue (5 m) were prepared
and mounted onto 2% 3-aminopropyltriethoxysilane-coated
slides for immunohistochemical localization of HGF and c-Met.
Immunohistochemistry of HGF and c-Met in the skin
A polyclonal rabbit anti-HGF (or c-Met) antibody was utilized
for the localization studies. All incubations were performed in
a humidified chamber. Sections of paraffin-embedded skin were
deparaffinized and rehydrated in a graded series of ethanol (100%,
95%, 90%, 85%, 80%, and 70%). Endogenous peroxidase activity was
blocked with 0.3% hydrogen peroxide for 10 min. After three rinses
(5 min each) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4), sections
were incubated with 5% bovine serum albumin (BSA) in PBS at
room temperature for 20 min to block the non-specific binding,
then incubated overnight at 4 ◦C in the presence of polyclonal rabbit
anti-HGF (Cat. No. bs-1025R; 1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis
Biotechnology Co., Beijing, China) or anti-c-Met(Cat. No. bs-0668R;
1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China).
For determination of non-specific staining, the primary antibody
was replaced by non-immune bovine serum. After rinsing, HGF and
c-Met staining was carried out according to the HGF and c-Met programs.
In the HGF program, sections were incubated in biotinylated
goat anti-rabbit second antibody (Boster,Wuhan, China) at 37 ◦C for
30 min, and then rinsed three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity
was visualized by incubating sections in the presence
of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate/Nitroblue Tetrazolium
(BCIP/NBT, 1:20, Boster, Wuhan, China) substrate at RT for 20 min.
The sections were then rinsed and counterstained with nuclear fast
red (Boster, Wuhan, China), and coverslips were sealed with neutral
balsam. In the c-Met program, sections were incubated with
polymerized HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody
(Cat. No. bs-0295G; 1:100 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology
Co., Beijing, China) at 37 ◦C for 30 min, and then rinsed
three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity was visualized
by incubating sections in the presence of 3,3-diaminobenzidine
(DAB, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China) substrate
at RT for 5 min. The sections were then counterstained with
hemotoxylin, and coverslips were sealed with neutral balsam.
After the completion of immunostaining, sections were examined
using a Leica DMIRB computerized microscope (Leica,Wetzlar,
Germany) with a Leica digital camera DFC 320 attachment (Leica
Microsystems Imaging Solutions Ltd., Cambridge, UK). Images were
captured and stored for analysis. The SPSS statistical package version
17.0 (SPSS Inc., USA) was used to analyze all data. ANOVA
testing was used to determine statistical differences in the data.
All results were expressed as mean ± SD; P-values below 0.05 were
considered statistically significant.
Western blot analysis of HGF and c-Met proteins
Total protein was extracted from six alpaca full-thickness buttock
skin samples (3 white and 3 brown) using a protein extraction
kit (Beyotime, Beijing, China). The protein concentration was measured
using the BCA protein assay kit (CWBIO, Beijing, China).
Twenty five g of denatured protein from each sample were
separated using 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel
electrophoresis (SDS-PAGE) and transferred to polyvinylidene fluoride
membranes. Membranes were blocked with 5% skimmed
milk in TBST (150 mM NaCl,
Contents lists available at ScienceDirect
Acta Histochemica
j ou rnal homepage: www.elsevier.de/acthis
Expression and tissue distribution of hepatocyte growth factor (HGF)
and its receptor (c-Met) in alpacas (Vicugna pacos) skins associated
with white and brown coat colors
Xiuju Yu1, Xiaoyan He 1, Junbing Jiang, Junping He, Ruiwen Fan, Haidong Wang,
Jianjun Geng, Changsheng Dong∗
College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu, Shanxi, 030801, PR China
a r t i c l e i n f o
Article history:
Received 19 March 2015
Received in revised form 28 May 2015
Accepted 4 June 2015
Keywords:
HGF
c-Met
Alpaca
Coat color
Skin
a b s t r a c t
Hepatocyte growth factor (HGF)/c-Met signaling has been considered as a key pathway in both
melanocyte development and melanogenesis. To understand better the expression patterns and tissue
distribution characterization of HGF and its receptor c-Met in skin of white versus brown alpaca
(Vicugna pacos), we detected the tissue distribution of HGF and c-Met using immunohistochemistry and
analyzed the expression patterns by using Western blot and quantitative real time PCR (qPCR). Immunohistochemistry
analysis demonstrated that HGF staining robustly increased in the dermal papilla and
mesenchymal cells of white alpaca skin compared with that of brown. However, c-Met staining showed
strongly positive result, particularly inhair matrix and root sheath in brown alpaca skin. Western blot
and qPCR results suggested that HGF and c-Met were expressed at significantly high levels in white and
brown alpaca skins, respectively, and protein and transcripts possessed the same expression pattern in
white and brown alpaca skins. The results suggested that HGF/c-Met signaling functions in alpaca coat
color formation offer essential theoretical basis for further exploration of the role of HGF/c-Met signaling
in pigment formation.
© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.
Introduction
In adult animals, coat color is dependent on pigment-producing
melanocytes that localize at the dermal border and transfer
melanin-containing organelles to adjacent keratinocytes that are
pushed upward as they proliferate (Barsh, 2007). Melanocyte
generates two distinct types of melanin, namely, the yellow
to reddish pheomelanins and the black to brown eumelanins
(Ito and Wakamatsu, 2008, Pape et al., 2008). Melanin synthesis
is regulated by more than 350 genes in mammals, including
melanogenic enzymes, transcription factors, hormones, neurotransmitters,
cytokines, and growth factors (Slominski et al., 2004,
Yamaguchi and Hearing, 2009, Montoliu et al., 2015). However, the
molecular and cellular mechanisms regulating coat color in woolproducing
animal have not been completely elucidated.
Alpacas have more than 22 natural coat colors; thus, the
species is therefore suited for studies on the mechanism of
∗ Corresponding author. Tel.: +86 354 628 9208; fax: +86 354 628 9208.
E-mail address: sxnddcs@126.com (C. Dong). 1 The authors contributed equally to the work.
natural coat color formation (Lupton et al., 2006, Mcgregor,
2006). Previous studies, including those we conducted, demonstrated
that the three pigmentation critical enzymes, namely,
tyrosinase (Tyr), tyrosinase-related protein 1 (Tyrp1), tyrosinaserelated
protein 2 (DCT), and the critical factors, which include
melanocortin-1 receptor protein (Mc1r), inducible nitric oxide synthase,
micropthalmia-associated transcription factor (MITF), solute
carrier family 7 member 11(Slc7a11), and -catenin, were stimulators
of melanogenesis in alpaca and agouti signaling proteins (Asip),
miR-25 and miR-137 were inhibitors of melanogenesis in alpaca
(Feeley and Munyard, 2009, Zhu, 2010, Chandramohan, 2013, Dong,
2012, Xue et al., 2014).
Although the role of numerous genes in regulating the coat
color of mice, dog, cat, and sheep has been verified (Kaelin and
Barsh, 2013, Fan et al., 2013, Sturm, 2009, Montoliu et al., 2015),
minimal knowledge on the potential role of hepatocyte growth
factor (HGF)/c-Met signaling in the forming of alpaca coat color
is available. HGF is a polypeptide growth factor consisting of heavy
and light chains linked by a disulfide bond; the receptor
for HGF is a 145 kDa protein with tyrosine kinase activity that is
the product of the c-Met proto-oncogene (Hirobe et al., 2004). In
normal skin, c-Met present on epithelial cells and melanocytes
http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2015.06.002
0065-1281/© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.
X. Yu et al. / Acta Histochemica 117 (2015) 624–628 625
control multiple aspects of melanocyte function in response to
HGF, which is upregulated by ultraviolet radiation (UVR) exposure
in keratinocytes and fibroblasts (Mildner, 2007, Soong, 2012).
In normal melanocytes, HGF/c-Met signaling has been observed
to play a role not only for survival, proliferation, and differentiation
of melanocyte precursors, but also for melanogenesis by
regulating Tyr and MITF (Kos, 1999, Mcgill, 2006, Cheli et al., 2010).
Although previous evidence has indicated that HGF/c-Met has a
function in melanocyte development and melanogenesis regulation,
the expression and localization of HGF/c-Met in alpacas have
not been fully elucidated. In this study, we observed the localization
of HGF/c-Met protein within the skin tissue using immunohistochemistry
and analyzed its transcript and protein expression level
in the skin of white and brown alpacas. Results indicated that
HGF/c-Met signaling may have a function in coat-color regulation
and melanogenesis in alpacas.
Materials and methods
Animals and tissue collection
Housing and care of alpacas and collection of skin samples
that were used in the experiments were conducted in accordance
with the International Guiding Principles for Biomedical
Research Involving Animals (http://www.cioms. ch/frame 1985
texts of guidelines.htm) and approved by the Animal Experimentation
Ethics Committee of Shanxi Agricultural University, Taigu,
China. Three pieces of skin were harvested from the hindquarters of
each alpaca (3 white and 3 brown) by 8 mm (biopsy punches Miltex,
Japan). Two biopsies were immediately stored in liquid nitrogen
for RNA and protein extractions, and the third biopsy was fixed in
Bouin’s solution for 24 h at 4 ◦C and then extensively washed in
70% ethanol. Subsequently, the fixed samples were dehydrated in a
graded series of ethanol(85%, 95%, and 100%), cleared in xylene, and
embedded in paraffin wax. Sections of skin tissue (5 m) were prepared
and mounted onto 2% 3-aminopropyltriethoxysilane-coated
slides for immunohistochemical localization of HGF and c-Met.
Immunohistochemistry of HGF and c-Met in the skin
A polyclonal rabbit anti-HGF (or c-Met) antibody was utilized
for the localization studies. All incubations were performed in
a humidified chamber. Sections of paraffin-embedded skin were
deparaffinized and rehydrated in a graded series of ethanol (100%,
95%, 90%, 85%, 80%, and 70%). Endogenous peroxidase activity was
blocked with 0.3% hydrogen peroxide for 10 min. After three rinses
(5 min each) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4), sections
were incubated with 5% bovine serum albumin (BSA) in PBS at
room temperature for 20 min to block the non-specific binding,
then incubated overnight at 4 ◦C in the presence of polyclonal rabbit
anti-HGF (Cat. No. bs-1025R; 1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis
Biotechnology Co., Beijing, China) or anti-c-Met(Cat. No. bs-0668R;
1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China).
For determination of non-specific staining, the primary antibody
was replaced by non-immune bovine serum. After rinsing, HGF and
c-Met staining was carried out according to the HGF and c-Met programs.
In the HGF program, sections were incubated in biotinylated
goat anti-rabbit second antibody (Boster,Wuhan, China) at 37 ◦C for
30 min, and then rinsed three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity
was visualized by incubating sections in the presence
of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate/Nitroblue Tetrazolium
(BCIP/NBT, 1:20, Boster, Wuhan, China) substrate at RT for 20 min.
The sections were then rinsed and counterstained with nuclear fast
red (Boster, Wuhan, China), and coverslips were sealed with neutral
balsam. In the c-Met program, sections were incubated with
polymerized HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody
(Cat. No. bs-0295G; 1:100 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology
Co., Beijing, China) at 37 ◦C for 30 min, and then rinsed
three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity was visualized
by incubating sections in the presence of 3,3-diaminobenzidine
(DAB, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China) substrate
at RT for 5 min. The sections were then counterstained with
hemotoxylin, and coverslips were sealed with neutral balsam.
After the completion of immunostaining, sections were examined
using a Leica DMIRB computerized microscope (Leica,Wetzlar,
Germany) with a Leica digital camera DFC 320 attachment (Leica
Microsystems Imaging Solutions Ltd., Cambridge, UK). Images were
captured and stored for analysis. The SPSS statistical package version
17.0 (SPSS Inc., USA) was used to analyze all data. ANOVA
testing was used to determine statistical differences in the data.
All results were expressed as mean ± SD; P-values below 0.05 were
considered statistically significant.
Western blot analysis of HGF and c-Met proteins
Total protein was extracted from six alpaca full-thickness buttock
skin samples (3 white and 3 brown) using a protein extraction
kit (Beyotime, Beijing, China). The protein concentration was measured
using the BCA protein assay kit (CWBIO, Beijing, China).
Twenty five g of denatured protein from each sample were
separated using 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel
electrophoresis (SDS-PAGE) and transferred to polyvinylidene fluoride
membranes. Membranes were blocked with 5% skimmed
milk in TBST (150 mM NaCl,
0/5000
Acta Histochemica 117 (2015) 624–628Contents lists available at ScienceDirectActa Histochemicaj ou rnal homepage: www.elsevier.de/acthisExpression and tissue distribution of hepatocyte growth factor (HGF)and its receptor (c-Met) in alpacas (Vicugna pacos) skins associatedwith white and brown coat colorsXiuju Yu1, Xiaoyan He 1, Junbing Jiang, Junping He, Ruiwen Fan, Haidong Wang,Jianjun Geng, Changsheng Dong∗College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu, Shanxi, 030801, PR Chinaa r t i c l e i n f oArticle history:Received 19 March 2015Received in revised form 28 May 2015Accepted 4 June 2015Keywords:HGFc-MetAlpacaCoat colorSkina b s t r a c tHepatocyte growth factor (HGF)/c-Met signaling has been considered as a key pathway in bothmelanocyte development and melanogenesis. To understand better the expression patterns and tissuedistribution characterization of HGF and its receptor c-Met in skin of white versus brown alpaca(Vicugna pacos), we detected the tissue distribution of HGF and c-Met using immunohistochemistry andanalyzed the expression patterns by using Western blot and quantitative real time PCR (qPCR). Immunohistochemistryanalysis demonstrated that HGF staining robustly increased in the dermal papilla andmesenchymal cells of white alpaca skin compared with that of brown. However, c-Met staining showedstrongly positive result, particularly inhair matrix and root sheath in brown alpaca skin. Western blotand qPCR results suggested that HGF and c-Met were expressed at significantly high levels in white andbrown alpaca skins, respectively, and protein and transcripts possessed the same expression pattern inwhite and brown alpaca skins. The results suggested that HGF/c-Met signaling functions in alpaca coatcolor formation offer essential theoretical basis for further exploration of the role of HGF/c-Met signalingin pigment formation.© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.IntroductionIn adult animals, coat color is dependent on pigment-producingmelanocytes that localize at the dermal border and transfermelanin-containing organelles to adjacent keratinocytes that arepushed upward as they proliferate (Barsh, 2007). Melanocytegenerates two distinct types of melanin, namely, the yellowto reddish pheomelanins and the black to brown eumelanins(Ito and Wakamatsu, 2008, Pape et al., 2008). Melanin synthesisis regulated by more than 350 genes in mammals, includingmelanogenic enzymes, transcription factors, hormones, neurotransmitters,cytokines, and growth factors (Slominski et al., 2004,Yamaguchi and Hearing, 2009, Montoliu et al., 2015). However, themolecular and cellular mechanisms regulating coat color in woolproducinganimal have not been completely elucidated.Alpacas have more than 22 natural coat colors; thus, thespecies is therefore suited for studies on the mechanism of∗ Corresponding author. Tel.: +86 354 628 9208; fax: +86 354 628 9208.E-mail address: sxnddcs@126.com (C. Dong). 1 The authors contributed equally to the work.
natural coat color formation (Lupton et al., 2006, Mcgregor,
2006). Previous studies, including those we conducted, demonstrated
that the three pigmentation critical enzymes, namely,
tyrosinase (Tyr), tyrosinase-related protein 1 (Tyrp1), tyrosinaserelated
protein 2 (DCT), and the critical factors, which include
melanocortin-1 receptor protein (Mc1r), inducible nitric oxide synthase,
micropthalmia-associated transcription factor (MITF), solute
carrier family 7 member 11(Slc7a11), and -catenin, were stimulators
of melanogenesis in alpaca and agouti signaling proteins (Asip),
miR-25 and miR-137 were inhibitors of melanogenesis in alpaca
(Feeley and Munyard, 2009, Zhu, 2010, Chandramohan, 2013, Dong,
2012, Xue et al., 2014).
Although the role of numerous genes in regulating the coat
color of mice, dog, cat, and sheep has been verified (Kaelin and
Barsh, 2013, Fan et al., 2013, Sturm, 2009, Montoliu et al., 2015),
minimal knowledge on the potential role of hepatocyte growth
factor (HGF)/c-Met signaling in the forming of alpaca coat color
is available. HGF is a polypeptide growth factor consisting of heavy
and light chains linked by a disulfide bond; the receptor
for HGF is a 145 kDa protein with tyrosine kinase activity that is
the product of the c-Met proto-oncogene (Hirobe et al., 2004). In
normal skin, c-Met present on epithelial cells and melanocytes
http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2015.06.002
0065-1281/© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.
X. Yu et al. / Acta Histochemica 117 (2015) 624–628 625
control multiple aspects of melanocyte function in response to
HGF, which is upregulated by ultraviolet radiation (UVR) exposure
in keratinocytes and fibroblasts (Mildner, 2007, Soong, 2012).
In normal melanocytes, HGF/c-Met signaling has been observed
to play a role not only for survival, proliferation, and differentiation
of melanocyte precursors, but also for melanogenesis by
regulating Tyr and MITF (Kos, 1999, Mcgill, 2006, Cheli et al., 2010).
Although previous evidence has indicated that HGF/c-Met has a
function in melanocyte development and melanogenesis regulation,
the expression and localization of HGF/c-Met in alpacas have
not been fully elucidated. In this study, we observed the localization
of HGF/c-Met protein within the skin tissue using immunohistochemistry
and analyzed its transcript and protein expression level
in the skin of white and brown alpacas. Results indicated that
HGF/c-Met signaling may have a function in coat-color regulation
and melanogenesis in alpacas.
Materials and methods
Animals and tissue collection
Housing and care of alpacas and collection of skin samples
that were used in the experiments were conducted in accordance
with the International Guiding Principles for Biomedical
Research Involving Animals (http://www.cioms. ch/frame 1985
texts of guidelines.htm) and approved by the Animal Experimentation
Ethics Committee of Shanxi Agricultural University, Taigu,
China. Three pieces of skin were harvested from the hindquarters of
each alpaca (3 white and 3 brown) by 8 mm (biopsy punches Miltex,
Japan). Two biopsies were immediately stored in liquid nitrogen
for RNA and protein extractions, and the third biopsy was fixed in
Bouin’s solution for 24 h at 4 ◦C and then extensively washed in
70% ethanol. Subsequently, the fixed samples were dehydrated in a
graded series of ethanol(85%, 95%, and 100%), cleared in xylene, and
embedded in paraffin wax. Sections of skin tissue (5 m) were prepared
and mounted onto 2% 3-aminopropyltriethoxysilane-coated
slides for immunohistochemical localization of HGF and c-Met.
Immunohistochemistry of HGF and c-Met in the skin
A polyclonal rabbit anti-HGF (or c-Met) antibody was utilized
for the localization studies. All incubations were performed in
a humidified chamber. Sections of paraffin-embedded skin were
deparaffinized and rehydrated in a graded series of ethanol (100%,
95%, 90%, 85%, 80%, and 70%). Endogenous peroxidase activity was
blocked with 0.3% hydrogen peroxide for 10 min. After three rinses
(5 min each) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4), sections
were incubated with 5% bovine serum albumin (BSA) in PBS at
room temperature for 20 min to block the non-specific binding,
then incubated overnight at 4 ◦C in the presence of polyclonal rabbit
anti-HGF (Cat. No. bs-1025R; 1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis
Biotechnology Co., Beijing, China) or anti-c-Met(Cat. No. bs-0668R;
1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China).
For determination of non-specific staining, the primary antibody
was replaced by non-immune bovine serum. After rinsing, HGF and
c-Met staining was carried out according to the HGF and c-Met programs.
In the HGF program, sections were incubated in biotinylated
goat anti-rabbit second antibody (Boster,Wuhan, China) at 37 ◦C for
30 min, and then rinsed three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity
was visualized by incubating sections in the presence
of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate/Nitroblue Tetrazolium
(BCIP/NBT, 1:20, Boster, Wuhan, China) substrate at RT for 20 min.
The sections were then rinsed and counterstained with nuclear fast
red (Boster, Wuhan, China), and coverslips were sealed with neutral
balsam. In the c-Met program, sections were incubated with
polymerized HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody
(Cat. No. bs-0295G; 1:100 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology
Co., Beijing, China) at 37 ◦C for 30 min, and then rinsed
three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity was visualized
by incubating sections in the presence of 3,3-diaminobenzidine
(DAB, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China) substrate
at RT for 5 min. The sections were then counterstained with
hemotoxylin, and coverslips were sealed with neutral balsam.
After the completion of immunostaining, sections were examined
using a Leica DMIRB computerized microscope (Leica,Wetzlar,
Germany) with a Leica digital camera DFC 320 attachment (Leica
Microsystems Imaging Solutions Ltd., Cambridge, UK). Images were
captured and stored for analysis. The SPSS statistical package version
17.0 (SPSS Inc., USA) was used to analyze all data. ANOVA
testing was used to determine statistical differences in the data.
All results were expressed as mean ± SD; P-values below 0.05 were
considered statistically significant.
Western blot analysis of HGF and c-Met proteins
Total protein was extracted from six alpaca full-thickness buttock
skin samples (3 white and 3 brown) using a protein extraction
kit (Beyotime, Beijing, China). The protein concentration was measured
using the BCA protein assay kit (CWBIO, Beijing, China).
Twenty five g of denatured protein from each sample were
separated using 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel
electrophoresis (SDS-PAGE) and transferred to polyvinylidene fluoride
membranes. Membranes were blocked with 5% skimmed
milk in TBST (150 mM NaCl,
natural coat color formation (Lupton et al., 2006, Mcgregor,
2006). Previous studies, including those we conducted, demonstrated
that the three pigmentation critical enzymes, namely,
tyrosinase (Tyr), tyrosinase-related protein 1 (Tyrp1), tyrosinaserelated
protein 2 (DCT), and the critical factors, which include
melanocortin-1 receptor protein (Mc1r), inducible nitric oxide synthase,
micropthalmia-associated transcription factor (MITF), solute
carrier family 7 member 11(Slc7a11), and -catenin, were stimulators
of melanogenesis in alpaca and agouti signaling proteins (Asip),
miR-25 and miR-137 were inhibitors of melanogenesis in alpaca
(Feeley and Munyard, 2009, Zhu, 2010, Chandramohan, 2013, Dong,
2012, Xue et al., 2014).
Although the role of numerous genes in regulating the coat
color of mice, dog, cat, and sheep has been verified (Kaelin and
Barsh, 2013, Fan et al., 2013, Sturm, 2009, Montoliu et al., 2015),
minimal knowledge on the potential role of hepatocyte growth
factor (HGF)/c-Met signaling in the forming of alpaca coat color
is available. HGF is a polypeptide growth factor consisting of heavy
and light chains linked by a disulfide bond; the receptor
for HGF is a 145 kDa protein with tyrosine kinase activity that is
the product of the c-Met proto-oncogene (Hirobe et al., 2004). In
normal skin, c-Met present on epithelial cells and melanocytes
http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2015.06.002
0065-1281/© 2015 Elsevier GmbH. All rights reserved.
X. Yu et al. / Acta Histochemica 117 (2015) 624–628 625
control multiple aspects of melanocyte function in response to
HGF, which is upregulated by ultraviolet radiation (UVR) exposure
in keratinocytes and fibroblasts (Mildner, 2007, Soong, 2012).
In normal melanocytes, HGF/c-Met signaling has been observed
to play a role not only for survival, proliferation, and differentiation
of melanocyte precursors, but also for melanogenesis by
regulating Tyr and MITF (Kos, 1999, Mcgill, 2006, Cheli et al., 2010).
Although previous evidence has indicated that HGF/c-Met has a
function in melanocyte development and melanogenesis regulation,
the expression and localization of HGF/c-Met in alpacas have
not been fully elucidated. In this study, we observed the localization
of HGF/c-Met protein within the skin tissue using immunohistochemistry
and analyzed its transcript and protein expression level
in the skin of white and brown alpacas. Results indicated that
HGF/c-Met signaling may have a function in coat-color regulation
and melanogenesis in alpacas.
Materials and methods
Animals and tissue collection
Housing and care of alpacas and collection of skin samples
that were used in the experiments were conducted in accordance
with the International Guiding Principles for Biomedical
Research Involving Animals (http://www.cioms. ch/frame 1985
texts of guidelines.htm) and approved by the Animal Experimentation
Ethics Committee of Shanxi Agricultural University, Taigu,
China. Three pieces of skin were harvested from the hindquarters of
each alpaca (3 white and 3 brown) by 8 mm (biopsy punches Miltex,
Japan). Two biopsies were immediately stored in liquid nitrogen
for RNA and protein extractions, and the third biopsy was fixed in
Bouin’s solution for 24 h at 4 ◦C and then extensively washed in
70% ethanol. Subsequently, the fixed samples were dehydrated in a
graded series of ethanol(85%, 95%, and 100%), cleared in xylene, and
embedded in paraffin wax. Sections of skin tissue (5 m) were prepared
and mounted onto 2% 3-aminopropyltriethoxysilane-coated
slides for immunohistochemical localization of HGF and c-Met.
Immunohistochemistry of HGF and c-Met in the skin
A polyclonal rabbit anti-HGF (or c-Met) antibody was utilized
for the localization studies. All incubations were performed in
a humidified chamber. Sections of paraffin-embedded skin were
deparaffinized and rehydrated in a graded series of ethanol (100%,
95%, 90%, 85%, 80%, and 70%). Endogenous peroxidase activity was
blocked with 0.3% hydrogen peroxide for 10 min. After three rinses
(5 min each) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4), sections
were incubated with 5% bovine serum albumin (BSA) in PBS at
room temperature for 20 min to block the non-specific binding,
then incubated overnight at 4 ◦C in the presence of polyclonal rabbit
anti-HGF (Cat. No. bs-1025R; 1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis
Biotechnology Co., Beijing, China) or anti-c-Met(Cat. No. bs-0668R;
1:50 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China).
For determination of non-specific staining, the primary antibody
was replaced by non-immune bovine serum. After rinsing, HGF and
c-Met staining was carried out according to the HGF and c-Met programs.
In the HGF program, sections were incubated in biotinylated
goat anti-rabbit second antibody (Boster,Wuhan, China) at 37 ◦C for
30 min, and then rinsed three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity
was visualized by incubating sections in the presence
of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate/Nitroblue Tetrazolium
(BCIP/NBT, 1:20, Boster, Wuhan, China) substrate at RT for 20 min.
The sections were then rinsed and counterstained with nuclear fast
red (Boster, Wuhan, China), and coverslips were sealed with neutral
balsam. In the c-Met program, sections were incubated with
polymerized HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody
(Cat. No. bs-0295G; 1:100 in PBS, Beijing Biosynthesis Biotechnology
Co., Beijing, China) at 37 ◦C for 30 min, and then rinsed
three times in PBS (5 min each). Immunoreactivity was visualized
by incubating sections in the presence of 3,3-diaminobenzidine
(DAB, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Beijing, China) substrate
at RT for 5 min. The sections were then counterstained with
hemotoxylin, and coverslips were sealed with neutral balsam.
After the completion of immunostaining, sections were examined
using a Leica DMIRB computerized microscope (Leica,Wetzlar,
Germany) with a Leica digital camera DFC 320 attachment (Leica
Microsystems Imaging Solutions Ltd., Cambridge, UK). Images were
captured and stored for analysis. The SPSS statistical package version
17.0 (SPSS Inc., USA) was used to analyze all data. ANOVA
testing was used to determine statistical differences in the data.
All results were expressed as mean ± SD; P-values below 0.05 were
considered statistically significant.
Western blot analysis of HGF and c-Met proteins
Total protein was extracted from six alpaca full-thickness buttock
skin samples (3 white and 3 brown) using a protein extraction
kit (Beyotime, Beijing, China). The protein concentration was measured
using the BCA protein assay kit (CWBIO, Beijing, China).
Twenty five g of denatured protein from each sample were
separated using 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel
electrophoresis (SDS-PAGE) and transferred to polyvinylidene fluoride
membranes. Membranes were blocked with 5% skimmed
milk in TBST (150 mM NaCl,
การแปล กรุณารอสักครู่..
Acta Histochemica 117 (2015) 624-628
รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect
Acta Histochemica
เจอู rnal หน้าแรก: www.elsevier.de/acthis~~V
การแสดงออกและการกระจายของเนื้อเยื่อตับปัจจัยการเจริญเติบโต (HGF)
และรับของ (c-Met) ใน Alpacas ( Vicugna Pacos)
หนังที่เกี่ยวข้องกับเสื้อคลุมสีขาวและสีน้ำตาล
Xiuju Yu1, Xiaoyan เขา 1, Junbing เจียง Junping เขา, พัดลม Ruiwen, Haidong วัง
Jianjun เกิง Changsheng ดง *
วิทยาลัยวิทยาศาสตร์สัตว์และสัตวแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยชานซีการเกษตร Taigu, ชานซี, 030801, PR จีน
rticleinfo
ประวัติศาสตร์บทความที่ได้รับ 19 มีนาคม 2015 ได้รับในรูปแบบปรับปรุง 28 พฤษภาคม 2015 ได้รับการยอมรับ 4 มิถุนายน 2015 คำสำคัญ: HGF ค-Met Alpaca ชุบสีผิวbstract hepatocyte ปัจจัยการเจริญเติบโต (HGF) / ส่งสัญญาณค-Met มี รับการพิจารณาเป็นทางเดินที่สำคัญทั้งในการพัฒนาและmelanocyte melanogenesis เพื่อให้เข้าใจดีกว่ารูปแบบการแสดงออกและเนื้อเยื่อลักษณะการกระจายของ HGF และรับของคพบในผิวขาวเมื่อเทียบกับ alpaca สีน้ำตาล (Pacos Vicugna) เราตรวจพบการกระจายเนื้อเยื่อของ HGF และค-Met ใช้ immunohistochemistry และวิเคราะห์รูปแบบการแสดงออกโดยใช้ดวงตะวันเชิงปริมาณและเวลาจริง PCR (qPCR) immunohistochemistry การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าการย้อมสี HGF แข็งแกร่งที่เพิ่มขึ้นในตุ่มผิวหนังและเซลล์mesenchymal ของผิว alpaca สีขาวเมื่อเทียบกับที่ของน้ำตาล อย่างไรก็ตามการย้อมสีค-Met แสดงให้เห็นผลในเชิงบวกอย่างมากโดยเฉพาะอย่างยิ่งinhair เมทริกซ์และเปลือกรากในผิว alpaca สีน้ำตาล ดวงตะวันและผล qPCR ชี้ให้เห็นว่า HGF และค-Met ถูกแสดงอยู่ในระดับสูงอย่างมีนัยสำคัญในสีขาวและสกินalpaca สีน้ำตาลตามลำดับและโปรตีนและยีนที่มีรูปแบบการแสดงออกเหมือนกันในหนังalpaca สีขาวและสีน้ำตาล ผลการชี้ให้เห็นว่า HGF / C-Met ฟังก์ชั่นการส่งสัญญาณใน alpaca เสื้อสีก่อให้ทฤษฎีพื้นฐานที่จำเป็นสำหรับการตรวจสอบข้อเท็จจริงต่อไปของบทบาทของHGF / C-Met สัญญาณในการสร้างเม็ดสี. © 2015 เอลส์ GmbH สงวนลิขสิทธิ์. บทนำในสัตว์ผู้ใหญ่สีขนจะขึ้นอยู่กับเม็ดสีที่ผลิตmelanocytes ที่ จำกัด ที่ชายแดนทางผิวหนังและโอนorganelles เมลานินที่มีการ keratinocytes ที่อยู่ใกล้เคียงที่ได้รับการผลักดันให้สูงขึ้นขณะที่พวกเขาขยาย(Barsh 2007) melanocyte สร้างสองประเภทที่แตกต่างของเมลานินคือสีเหลืองสีแดงและสีดำ pheomelanins เพื่อ eumelanins สีน้ำตาล (อิโตะและ Wakamatsu 2008 Pape et al., 2008) การสังเคราะห์เมลานินจะถูกควบคุมโดยมากกว่า 350 ยีนในสัตว์รวมทั้งเอนไซม์melanogenic ปัจจัยถอดความฮอร์โมนสารสื่อประสาท, cytokines และปัจจัยการเจริญเติบโต (Slominski et al., 2004 ยามากูชิและได้ยิน 2009 Montoliu et al., 2015) อย่างไรก็ตามกลไกระดับโมเลกุลและเซลล์ควบคุมสีขนในwoolproducing. สัตว์ไม่ได้รับการอธิบายอย่างสมบูรณ์Alpacas มีมากกว่า 22 เสื้อคลุมสีธรรมชาติ เพราะฉะนั้นชนิดจึงเหมาะสำหรับการศึกษาเกี่ยวกับกลไกของผู้เขียนที่สอดคล้องกัน* Tel .: +86 354 628 9208; แฟ็กซ์: 86 354 628 9208. อีเมล์: sxnddcs@126.com (คตง) 1 ผู้เขียนสนับสนุนอย่างเท่าเทียมกันในการทำงาน. ก่อเสื้อคลุมสีธรรมชาติ (Lupton et al., 2006 Mcgregor, 2006) การศึกษาก่อนหน้ารวมทั้งผู้ที่เราดำเนินการแสดงให้เห็นว่าสีสามเอนไซม์ที่สำคัญคือไทโรซิเน(เทอร์), โปรตีนไทโรซิเนเกี่ยวข้อง 1 (Tyrp1) tyrosinaserelated โปรตีน 2 (DCT) และปัจจัยที่สำคัญซึ่งรวมถึงการรับmelanocortin-1 โปรตีน (MC1R) inducible เทสไนตริกออกไซด์micropthalmia เกี่ยวข้องถอดความปัจจัย (MITF) ตัวละลายให้บริการสมาชิกในครอบครัว7 11 (Slc7a11) และ -catenin ถูกกระตุ้นของmelanogenesis ใน alpaca และหนูบางชนิดส่งสัญญาณโปรตีน (ASIP) miR-25 และ miR-137 เป็นสารยับยั้งของ melanogenesis ใน alpaca (ฟีลีและ Munyard 2009 จู้ 2010 Chandramohan 2013 ดง, 2012, Xue et al., 2014). แม้ว่าบทบาทของยีนจำนวนมากในการควบคุมการขนสีของหนูสุนัขแมวและแกะได้รับการยืนยัน (Kaelin และBarsh 2013, พัดลม et al., 2013 พายุ 2009 Montoliu et al., 2015) ความรู้น้อยที่สุดในบทบาทที่มีศักยภาพของการเจริญเติบโต hepatocyte ปัจจัย (HGF) / ค-Met การส่งสัญญาณในการขึ้นรูปของสีขน alpaca ใช้ได้ HGF เป็นปัจจัยการเจริญเติบโต polypeptide ประกอบด้วยหนักและโซ่แสงเชื่อมโยงโดยพันธบัตรซัลไฟด์; ตัวรับสำหรับ HGF เป็น 145 กิโลดาลตันโปรตีนที่มีฤทธิ์ไคเนสซายน์ที่เป็นผลิตภัณฑ์ของc-Met โปรอองโคยีน (ที่ Hirobe et al., 2004) ในผิวปกติปัจจุบันคพบในเซลล์เยื่อบุผิวและ melanocytes http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2015.06.002 0065-1281 / 2015 ©เอลส์ GmbH สงวนลิขสิทธิ์. เอ็กซ์ Yu et al, / Acta Histochemica 117 (2015) 624-628 625 การควบคุมหลายแง่มุมของฟังก์ชั่น melanocyte ในการตอบสนองHGF ซึ่งเป็น upregulated โดยรังสีอัลตราไวโอเลต (รังสี UV) การเปิดรับในkeratinocytes และรบรา (Mildner 2007 Soong 2012). ใน melanocytes ปกติ HGF / C-Met สัญญาณได้รับการปฏิบัติที่จะมีบทบาทไม่เพียงแต่เพื่อความอยู่รอดงอกและความแตกต่างของสารตั้งต้น melanocyte แต่ยัง melanogenesis โดยควบคุมเทอร์และMITF (คอสปี 1999 กิล 2006 Cheli et al., 2010 ). แม้ว่าหลักฐานก่อนหน้านี้ได้ชี้ให้เห็นว่า HGF / C-Met มีฟังก์ชั่นในการพัฒนาและการควบคุมmelanocyte melanogenesis, การแสดงออกและการแปลของ HGF / C-Met ใน Alpacas ได้ไม่ได้รับการอธิบายอย่างเต็มที่ ในการศึกษานี้เราสังเกตได้ถึงการแปลของ HGF / C-Met โปรตีนภายในเนื้อเยื่อผิวโดยใช้ immunohistochemistry และวิเคราะห์หลักฐานและโปรตีนระดับการแสดงออกของมันในผิวของ Alpacas สีขาวและสีน้ำตาล ผลการศึกษาพบว่าHGF / ส่งสัญญาณค-Met อาจจะมีฟังก์ชั่นในการควบคุมเสื้อสีและmelanogenesis ใน Alpacas. วัสดุและวิธีการสัตว์และคอลเลกชันของเนื้อเยื่อที่อยู่อาศัยและการดูแลAlpacas และเก็บตัวอย่างผิวที่ถูกนำมาใช้ในการทดลองได้รับการดำเนินการตามกับหลักการระหว่างประเทศเพื่อชีวการแพทย์การวิจัยที่เกี่ยวข้องกับสัตว์ (http:. //www.cioms CH / กรอบ 1,985 ตำรา guidelines.htm) และได้รับอนุมัติจากสัตว์ทดลองคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยชานซีการเกษตรTaigu, ประเทศจีน สามชิ้นของผิวเก็บเกี่ยวจากขาของแต่ละ alpaca (3 สีขาวและสีน้ำตาล 3) 8 มิลลิเมตร (เจาะตรวจชิ้นเนื้อ Miltex, ญี่ปุ่น) ขริบสองถูกเก็บไว้ทันทีในไนโตรเจนเหลวสำหรับอาร์เอ็นเอและโปรตีนสกัดและการตรวจชิ้นเนื้อสามคือการแก้ไขในการแก้ปัญหาของBouin 24 ชั่วโมงที่ 4 ◦Cแล้วล้างอย่างกว้างขวางในเอทานอล70% ต่อจากนั้นกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการแก้ไขที่ถูกคายน้ำในซีรีส์เอทานอลอย่างช้า ๆ (85%, 95% และ 100%) เคลียร์ในไซลีนและฝังตัวอยู่ในขี้ผึ้งพาราฟิน ในส่วนของเนื้อเยื่อผิว (5? ม.) ได้จัดทำและติดตั้งลงบน2% 3 aminopropyltriethoxysilane เคลือบภาพนิ่งสำหรับการแปลimmunocytochemistry ของของ HGF และค-Met. immunohistochemistry ของ HGF และคพบในผิวหนังกระต่ายโพลีต่อต้านHGF (หรือ ค-Met) แอนติบอดีถูกใช้สำหรับการศึกษาท้องถิ่น ฟักตัวของเชื้อทั้งหมดได้รับการดำเนินการในห้องความชื้น ในส่วนของผิวพาราฟินฝังตัวถูกdeparaffinized และคืนรูปในชุดเอทานอลอย่างช้า ๆ (100%, 95%, 90%, 85%, 80% และ 70%) กิจกรรม peroxidase ภายนอกถูกปิดกั้นด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์0.3% เป็นเวลา 10 นาที หลังจากสาม rinses (5 นาทีในแต่ละ) ในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอสพีเอช 7.4) ส่วนที่ถูกบ่ม5% โปรตีนชนิดหนึ่งในซีรั่มวัว (BSA) ในพีบีเอสที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา20 นาทีเพื่อป้องกันไม่เฉพาะเจาะจงผูกพันบ่มแล้วค้างคืนที่ 4 ◦Cในการปรากฏตัวของกระต่ายโพลีต่อต้านHGF (ฉบับที่แมว BS-1025R. 01:50 ในพีบีเอส, ปักกิ่งสังเคราะห์เทคโนโลยีชีวภาพCo. , ปักกิ่ง, จีน). หรือต่อต้านค-Met (ฉบับที่แมว BS-0668R; 01:50 ในพีบีเอส, ปักกิ่งสังเคราะห์เทคโนโลยีชีวภาพ Co. , ปักกิ่ง, จีน). สำหรับความมุ่งมั่นของการย้อมสีที่ไม่เฉพาะเจาะจง, แอนติบอดีหลักก็ถูกแทนที่ด้วยซีรั่มวัวที่ไม่ภูมิคุ้มกัน หลังจากล้าง HGF และค-Met ย้อมสีได้ดำเนินการตามที่ HGF และโปรแกรมค-Met. ในโปรแกรม HGF ส่วนถูกบ่มใน biotinylated แพะต่อต้านกระต่ายแอนติบอดีที่สอง (Boster หวู่ฮั่น, จีน) ที่ 37 ◦Cสำหรับ30 นาทีและล้างแล้วสามครั้งในพีบีเอส (5 นาทีในแต่ละครั้ง) ภูมิคุ้มกันจะถูกมองเห็นโดยฟักส่วนในการปรากฏตัวของ5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl ฟอสเฟต / nitroblue Tetrazolium (BCIP / NBT, 01:20, Boster หวู่ฮั่น, จีน) ที่พื้นผิว RT เป็นเวลา 20 นาที. ส่วนที่มี ล้างแล้วและ counterstained รวดเร็วนิวเคลียร์สีแดง(Boster หวู่ฮั่นประเทศจีน) และ coverslips ถูกปิดผนึกด้วยความเป็นกลางยาหม่อง ในโปรแกรมค-Met ในส่วนที่ถูกบ่มกับpolymerized แพะ HRP-ผันป้องกันกระต่ายแอนติบอดีรอง(ฉบับที่แมว BS-0295G; 1:. 100 พีบีเอส, ปักกิ่งเทคโนโลยีชีวภาพสังเคราะห์จำกัด , ปักกิ่ง, จีน) ที่ 37 ◦C เป็นเวลา 30 นาทีและล้างแล้วสามครั้งในพีบีเอส(5 นาทีในแต่ละครั้ง) ภูมิคุ้มกันจะถูกมองเห็นโดยฟักส่วนในการปรากฏตัวของ 3,3 ?? - การ diaminobenzidine (DAB, ปักกิ่งสังเคราะห์เทคโนโลยีชีวภาพ Co. , ปักกิ่ง, จีน) พื้นผิวที่RT เป็นเวลา 5 นาที ส่วนที่ถูก counterstained แล้วกับhemotoxylin และ coverslips ถูกปิดผนึกด้วยยาหม่องเป็นกลาง. หลังจากเสร็จสิ้นการ immunostaining ที่ส่วนมีการตรวจสอบโดยใช้Leica DMIRB กล้องจุลทรรศน์คอมพิวเตอร์ (Leica, Wetzlar, เยอรมนี) กับ Leica กล้องดิจิตอล DFC 320 ไฟล์แนบ (Leica Microsystems การถ่ายภาพ โซลูชั่น จำกัด เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) ภาพที่ถูกจับและเก็บไว้สำหรับการวิเคราะห์ รุ่นโปรแกรมสำเร็จรูปทางสถิติ SPSS 17.0 (SPSS อิงค์สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมด ANOVA. การทดสอบที่ถูกใช้ในการกำหนดความแตกต่างทางสถิติในข้อมูลผลทั้งหมดถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD; P ค่าต่ำกว่า 0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ. วิเคราะห์ดวงตะวันของ HGF และโปรตีนค-Met โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดจากหก alpaca เต็มความหนาสะโพกตัวอย่างผิว(3 สีขาวและสี 3 สีน้ำตาล) โดยใช้การสกัดโปรตีนชุด(Beyotime ปักกิ่ง จีน) ความเข้มข้นของโปรตีนที่วัดโดยใช้ชุดทดสอบโปรตีน BCA (CWBIO, ปักกิ่ง, จีน). ยี่สิบห้าคนหรือกรัมของโปรตีนแปลงสภาพจากแต่ละตัวอย่างถูกแยกออกจากกันโดยใช้ 12% โซเดียมเจลซัลเฟต polyacrylamide โดเดซิล electrophoresis (SDS-PAGE) และย้ายไป Polyvinylidene ฟลูออไรเยื่อ เยื่อถูกบล็อก 5% ไขมันต่ำนมTBST (150 มิลลิโซเดียมคลอไรด์,
รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect
Acta Histochemica
เจอู rnal หน้าแรก: www.elsevier.de/acthis~~V
การแสดงออกและการกระจายของเนื้อเยื่อตับปัจจัยการเจริญเติบโต (HGF)
และรับของ (c-Met) ใน Alpacas ( Vicugna Pacos)
หนังที่เกี่ยวข้องกับเสื้อคลุมสีขาวและสีน้ำตาล
Xiuju Yu1, Xiaoyan เขา 1, Junbing เจียง Junping เขา, พัดลม Ruiwen, Haidong วัง
Jianjun เกิง Changsheng ดง *
วิทยาลัยวิทยาศาสตร์สัตว์และสัตวแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยชานซีการเกษตร Taigu, ชานซี, 030801, PR จีน
rticleinfo
ประวัติศาสตร์บทความที่ได้รับ 19 มีนาคม 2015 ได้รับในรูปแบบปรับปรุง 28 พฤษภาคม 2015 ได้รับการยอมรับ 4 มิถุนายน 2015 คำสำคัญ: HGF ค-Met Alpaca ชุบสีผิวbstract hepatocyte ปัจจัยการเจริญเติบโต (HGF) / ส่งสัญญาณค-Met มี รับการพิจารณาเป็นทางเดินที่สำคัญทั้งในการพัฒนาและmelanocyte melanogenesis เพื่อให้เข้าใจดีกว่ารูปแบบการแสดงออกและเนื้อเยื่อลักษณะการกระจายของ HGF และรับของคพบในผิวขาวเมื่อเทียบกับ alpaca สีน้ำตาล (Pacos Vicugna) เราตรวจพบการกระจายเนื้อเยื่อของ HGF และค-Met ใช้ immunohistochemistry และวิเคราะห์รูปแบบการแสดงออกโดยใช้ดวงตะวันเชิงปริมาณและเวลาจริง PCR (qPCR) immunohistochemistry การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าการย้อมสี HGF แข็งแกร่งที่เพิ่มขึ้นในตุ่มผิวหนังและเซลล์mesenchymal ของผิว alpaca สีขาวเมื่อเทียบกับที่ของน้ำตาล อย่างไรก็ตามการย้อมสีค-Met แสดงให้เห็นผลในเชิงบวกอย่างมากโดยเฉพาะอย่างยิ่งinhair เมทริกซ์และเปลือกรากในผิว alpaca สีน้ำตาล ดวงตะวันและผล qPCR ชี้ให้เห็นว่า HGF และค-Met ถูกแสดงอยู่ในระดับสูงอย่างมีนัยสำคัญในสีขาวและสกินalpaca สีน้ำตาลตามลำดับและโปรตีนและยีนที่มีรูปแบบการแสดงออกเหมือนกันในหนังalpaca สีขาวและสีน้ำตาล ผลการชี้ให้เห็นว่า HGF / C-Met ฟังก์ชั่นการส่งสัญญาณใน alpaca เสื้อสีก่อให้ทฤษฎีพื้นฐานที่จำเป็นสำหรับการตรวจสอบข้อเท็จจริงต่อไปของบทบาทของHGF / C-Met สัญญาณในการสร้างเม็ดสี. © 2015 เอลส์ GmbH สงวนลิขสิทธิ์. บทนำในสัตว์ผู้ใหญ่สีขนจะขึ้นอยู่กับเม็ดสีที่ผลิตmelanocytes ที่ จำกัด ที่ชายแดนทางผิวหนังและโอนorganelles เมลานินที่มีการ keratinocytes ที่อยู่ใกล้เคียงที่ได้รับการผลักดันให้สูงขึ้นขณะที่พวกเขาขยาย(Barsh 2007) melanocyte สร้างสองประเภทที่แตกต่างของเมลานินคือสีเหลืองสีแดงและสีดำ pheomelanins เพื่อ eumelanins สีน้ำตาล (อิโตะและ Wakamatsu 2008 Pape et al., 2008) การสังเคราะห์เมลานินจะถูกควบคุมโดยมากกว่า 350 ยีนในสัตว์รวมทั้งเอนไซม์melanogenic ปัจจัยถอดความฮอร์โมนสารสื่อประสาท, cytokines และปัจจัยการเจริญเติบโต (Slominski et al., 2004 ยามากูชิและได้ยิน 2009 Montoliu et al., 2015) อย่างไรก็ตามกลไกระดับโมเลกุลและเซลล์ควบคุมสีขนในwoolproducing. สัตว์ไม่ได้รับการอธิบายอย่างสมบูรณ์Alpacas มีมากกว่า 22 เสื้อคลุมสีธรรมชาติ เพราะฉะนั้นชนิดจึงเหมาะสำหรับการศึกษาเกี่ยวกับกลไกของผู้เขียนที่สอดคล้องกัน* Tel .: +86 354 628 9208; แฟ็กซ์: 86 354 628 9208. อีเมล์: sxnddcs@126.com (คตง) 1 ผู้เขียนสนับสนุนอย่างเท่าเทียมกันในการทำงาน. ก่อเสื้อคลุมสีธรรมชาติ (Lupton et al., 2006 Mcgregor, 2006) การศึกษาก่อนหน้ารวมทั้งผู้ที่เราดำเนินการแสดงให้เห็นว่าสีสามเอนไซม์ที่สำคัญคือไทโรซิเน(เทอร์), โปรตีนไทโรซิเนเกี่ยวข้อง 1 (Tyrp1) tyrosinaserelated โปรตีน 2 (DCT) และปัจจัยที่สำคัญซึ่งรวมถึงการรับmelanocortin-1 โปรตีน (MC1R) inducible เทสไนตริกออกไซด์micropthalmia เกี่ยวข้องถอดความปัจจัย (MITF) ตัวละลายให้บริการสมาชิกในครอบครัว7 11 (Slc7a11) และ -catenin ถูกกระตุ้นของmelanogenesis ใน alpaca และหนูบางชนิดส่งสัญญาณโปรตีน (ASIP) miR-25 และ miR-137 เป็นสารยับยั้งของ melanogenesis ใน alpaca (ฟีลีและ Munyard 2009 จู้ 2010 Chandramohan 2013 ดง, 2012, Xue et al., 2014). แม้ว่าบทบาทของยีนจำนวนมากในการควบคุมการขนสีของหนูสุนัขแมวและแกะได้รับการยืนยัน (Kaelin และBarsh 2013, พัดลม et al., 2013 พายุ 2009 Montoliu et al., 2015) ความรู้น้อยที่สุดในบทบาทที่มีศักยภาพของการเจริญเติบโต hepatocyte ปัจจัย (HGF) / ค-Met การส่งสัญญาณในการขึ้นรูปของสีขน alpaca ใช้ได้ HGF เป็นปัจจัยการเจริญเติบโต polypeptide ประกอบด้วยหนักและโซ่แสงเชื่อมโยงโดยพันธบัตรซัลไฟด์; ตัวรับสำหรับ HGF เป็น 145 กิโลดาลตันโปรตีนที่มีฤทธิ์ไคเนสซายน์ที่เป็นผลิตภัณฑ์ของc-Met โปรอองโคยีน (ที่ Hirobe et al., 2004) ในผิวปกติปัจจุบันคพบในเซลล์เยื่อบุผิวและ melanocytes http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2015.06.002 0065-1281 / 2015 ©เอลส์ GmbH สงวนลิขสิทธิ์. เอ็กซ์ Yu et al, / Acta Histochemica 117 (2015) 624-628 625 การควบคุมหลายแง่มุมของฟังก์ชั่น melanocyte ในการตอบสนองHGF ซึ่งเป็น upregulated โดยรังสีอัลตราไวโอเลต (รังสี UV) การเปิดรับในkeratinocytes และรบรา (Mildner 2007 Soong 2012). ใน melanocytes ปกติ HGF / C-Met สัญญาณได้รับการปฏิบัติที่จะมีบทบาทไม่เพียงแต่เพื่อความอยู่รอดงอกและความแตกต่างของสารตั้งต้น melanocyte แต่ยัง melanogenesis โดยควบคุมเทอร์และMITF (คอสปี 1999 กิล 2006 Cheli et al., 2010 ). แม้ว่าหลักฐานก่อนหน้านี้ได้ชี้ให้เห็นว่า HGF / C-Met มีฟังก์ชั่นในการพัฒนาและการควบคุมmelanocyte melanogenesis, การแสดงออกและการแปลของ HGF / C-Met ใน Alpacas ได้ไม่ได้รับการอธิบายอย่างเต็มที่ ในการศึกษานี้เราสังเกตได้ถึงการแปลของ HGF / C-Met โปรตีนภายในเนื้อเยื่อผิวโดยใช้ immunohistochemistry และวิเคราะห์หลักฐานและโปรตีนระดับการแสดงออกของมันในผิวของ Alpacas สีขาวและสีน้ำตาล ผลการศึกษาพบว่าHGF / ส่งสัญญาณค-Met อาจจะมีฟังก์ชั่นในการควบคุมเสื้อสีและmelanogenesis ใน Alpacas. วัสดุและวิธีการสัตว์และคอลเลกชันของเนื้อเยื่อที่อยู่อาศัยและการดูแลAlpacas และเก็บตัวอย่างผิวที่ถูกนำมาใช้ในการทดลองได้รับการดำเนินการตามกับหลักการระหว่างประเทศเพื่อชีวการแพทย์การวิจัยที่เกี่ยวข้องกับสัตว์ (http:. //www.cioms CH / กรอบ 1,985 ตำรา guidelines.htm) และได้รับอนุมัติจากสัตว์ทดลองคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยชานซีการเกษตรTaigu, ประเทศจีน สามชิ้นของผิวเก็บเกี่ยวจากขาของแต่ละ alpaca (3 สีขาวและสีน้ำตาล 3) 8 มิลลิเมตร (เจาะตรวจชิ้นเนื้อ Miltex, ญี่ปุ่น) ขริบสองถูกเก็บไว้ทันทีในไนโตรเจนเหลวสำหรับอาร์เอ็นเอและโปรตีนสกัดและการตรวจชิ้นเนื้อสามคือการแก้ไขในการแก้ปัญหาของBouin 24 ชั่วโมงที่ 4 ◦Cแล้วล้างอย่างกว้างขวางในเอทานอล70% ต่อจากนั้นกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการแก้ไขที่ถูกคายน้ำในซีรีส์เอทานอลอย่างช้า ๆ (85%, 95% และ 100%) เคลียร์ในไซลีนและฝังตัวอยู่ในขี้ผึ้งพาราฟิน ในส่วนของเนื้อเยื่อผิว (5? ม.) ได้จัดทำและติดตั้งลงบน2% 3 aminopropyltriethoxysilane เคลือบภาพนิ่งสำหรับการแปลimmunocytochemistry ของของ HGF และค-Met. immunohistochemistry ของ HGF และคพบในผิวหนังกระต่ายโพลีต่อต้านHGF (หรือ ค-Met) แอนติบอดีถูกใช้สำหรับการศึกษาท้องถิ่น ฟักตัวของเชื้อทั้งหมดได้รับการดำเนินการในห้องความชื้น ในส่วนของผิวพาราฟินฝังตัวถูกdeparaffinized และคืนรูปในชุดเอทานอลอย่างช้า ๆ (100%, 95%, 90%, 85%, 80% และ 70%) กิจกรรม peroxidase ภายนอกถูกปิดกั้นด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์0.3% เป็นเวลา 10 นาที หลังจากสาม rinses (5 นาทีในแต่ละ) ในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอสพีเอช 7.4) ส่วนที่ถูกบ่ม5% โปรตีนชนิดหนึ่งในซีรั่มวัว (BSA) ในพีบีเอสที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา20 นาทีเพื่อป้องกันไม่เฉพาะเจาะจงผูกพันบ่มแล้วค้างคืนที่ 4 ◦Cในการปรากฏตัวของกระต่ายโพลีต่อต้านHGF (ฉบับที่แมว BS-1025R. 01:50 ในพีบีเอส, ปักกิ่งสังเคราะห์เทคโนโลยีชีวภาพCo. , ปักกิ่ง, จีน). หรือต่อต้านค-Met (ฉบับที่แมว BS-0668R; 01:50 ในพีบีเอส, ปักกิ่งสังเคราะห์เทคโนโลยีชีวภาพ Co. , ปักกิ่ง, จีน). สำหรับความมุ่งมั่นของการย้อมสีที่ไม่เฉพาะเจาะจง, แอนติบอดีหลักก็ถูกแทนที่ด้วยซีรั่มวัวที่ไม่ภูมิคุ้มกัน หลังจากล้าง HGF และค-Met ย้อมสีได้ดำเนินการตามที่ HGF และโปรแกรมค-Met. ในโปรแกรม HGF ส่วนถูกบ่มใน biotinylated แพะต่อต้านกระต่ายแอนติบอดีที่สอง (Boster หวู่ฮั่น, จีน) ที่ 37 ◦Cสำหรับ30 นาทีและล้างแล้วสามครั้งในพีบีเอส (5 นาทีในแต่ละครั้ง) ภูมิคุ้มกันจะถูกมองเห็นโดยฟักส่วนในการปรากฏตัวของ5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl ฟอสเฟต / nitroblue Tetrazolium (BCIP / NBT, 01:20, Boster หวู่ฮั่น, จีน) ที่พื้นผิว RT เป็นเวลา 20 นาที. ส่วนที่มี ล้างแล้วและ counterstained รวดเร็วนิวเคลียร์สีแดง(Boster หวู่ฮั่นประเทศจีน) และ coverslips ถูกปิดผนึกด้วยความเป็นกลางยาหม่อง ในโปรแกรมค-Met ในส่วนที่ถูกบ่มกับpolymerized แพะ HRP-ผันป้องกันกระต่ายแอนติบอดีรอง(ฉบับที่แมว BS-0295G; 1:. 100 พีบีเอส, ปักกิ่งเทคโนโลยีชีวภาพสังเคราะห์จำกัด , ปักกิ่ง, จีน) ที่ 37 ◦C เป็นเวลา 30 นาทีและล้างแล้วสามครั้งในพีบีเอส(5 นาทีในแต่ละครั้ง) ภูมิคุ้มกันจะถูกมองเห็นโดยฟักส่วนในการปรากฏตัวของ 3,3 ?? - การ diaminobenzidine (DAB, ปักกิ่งสังเคราะห์เทคโนโลยีชีวภาพ Co. , ปักกิ่ง, จีน) พื้นผิวที่RT เป็นเวลา 5 นาที ส่วนที่ถูก counterstained แล้วกับhemotoxylin และ coverslips ถูกปิดผนึกด้วยยาหม่องเป็นกลาง. หลังจากเสร็จสิ้นการ immunostaining ที่ส่วนมีการตรวจสอบโดยใช้Leica DMIRB กล้องจุลทรรศน์คอมพิวเตอร์ (Leica, Wetzlar, เยอรมนี) กับ Leica กล้องดิจิตอล DFC 320 ไฟล์แนบ (Leica Microsystems การถ่ายภาพ โซลูชั่น จำกัด เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) ภาพที่ถูกจับและเก็บไว้สำหรับการวิเคราะห์ รุ่นโปรแกรมสำเร็จรูปทางสถิติ SPSS 17.0 (SPSS อิงค์สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมด ANOVA. การทดสอบที่ถูกใช้ในการกำหนดความแตกต่างทางสถิติในข้อมูลผลทั้งหมดถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD; P ค่าต่ำกว่า 0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ. วิเคราะห์ดวงตะวันของ HGF และโปรตีนค-Met โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดจากหก alpaca เต็มความหนาสะโพกตัวอย่างผิว(3 สีขาวและสี 3 สีน้ำตาล) โดยใช้การสกัดโปรตีนชุด(Beyotime ปักกิ่ง จีน) ความเข้มข้นของโปรตีนที่วัดโดยใช้ชุดทดสอบโปรตีน BCA (CWBIO, ปักกิ่ง, จีน). ยี่สิบห้าคนหรือกรัมของโปรตีนแปลงสภาพจากแต่ละตัวอย่างถูกแยกออกจากกันโดยใช้ 12% โซเดียมเจลซัลเฟต polyacrylamide โดเดซิล electrophoresis (SDS-PAGE) และย้ายไป Polyvinylidene ฟลูออไรเยื่อ เยื่อถูกบล็อก 5% ไขมันต่ำนมTBST (150 มิลลิโซเดียมคลอไรด์,
การแปล กรุณารอสักครู่..
ข้อมูล histochemica 117 ( 2015 ) โดยมีเนื้อหารายการไปใช้บริการ
ACT histochemica
J หรือ rnal หน้าแรก : www.elsevier . de / acthis
การแสดงออกและการกระจายของปัจจัยการเจริญเติบโตของเนื้อเยื่อตับ ( ด้วย )
และตัวรับ ( c-met ) ลพากา ( vicugna Pacos ) หนังที่เกี่ยวข้องกับสีขาว และ สีน้ำตาล เสื้อคลุมสี
yu1 เ ่ยวเยี่ยน เขา xiuju , 1 , junbing เจียง junping เขา ruiwen Haidong วัง
พัดลมเจียนจุงเกิง , changsheng ดง∗
วิทยาลัยสัตวศาสตร์และสัตวแพทย์ , Shanxi เกษตรกรรมมหาวิทยาลัย จัดหา , Shanxi , 030801 , PR China
r t i C L E n f o :
บทความประวัติศาสตร์ที่ได้รับ 19 มีนาคม 2015
รับแก้ไขแบบฟอร์ม 28 พฤษภาคม 2015
4 มิถุนายน 2015
คำสำคัญ : ยอมรับ ด้วย
c-met อัลปาก้าสีเสื้อผิวหนัง
B R A C T
T sปัจจัยการเจริญเติบโตของตับ ( ด้วย ) / c-met ส่งสัญญาณได้ถูกถือว่าเป็นเส้นทางหลักในทั้ง
เมลาโนไซต์การพัฒนาและเกิดเม็ดสีผิวเมลานิน . ที่จะเข้าใจการแสดงออกรูปแบบและลักษณะของการกระจายและเนื้อเยื่อ
ด้วย c-met ตัวรับของมันในผิวของสีขาวกับ
อัลปาก้าสีน้ำตาล ( vicugna Pacos ) เราตรวจพบเนื้อเยื่อจำหน่ายและใช้หลอดและ
c-met ด้วยวิเคราะห์การแสดงออกรูปแบบโดยใช้ blot ตะวันตกและปริมาณเวลา PCR จริง ( qpcr ) การวิเคราะห์หลอด
แสดงว่าย้อมด้วยทนทานเพิ่มขึ้นและตุ่ม dermal
มีเซนไคม์ผิวอัลปาก้าขาวเมื่อเทียบกับที่ของบราวน์ อย่างไรก็ตาม c-met staining พบ
ผลในเชิงบวกอย่างมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่ง inhair เมทริกซ์และรากฝักในผิวอัลปาก้าสีน้ำตาลผลลัพธ์
blot ตะวันตกและ qpcr ชี้ให้เห็นว่า ด้วย c-met มีการแสดงออกที่แตกต่างกันและระดับสูง สีขาว และสีน้ำตาล อัลปาก้า
สกิน ตามลำดับ และมีรูปแบบการแสดงออกของโปรตีนและยีนเดียวกันใน
สีขาวและสีน้ำตาลอัลปาก้าสกิน ผลการศึกษาพบว่า การส่งสัญญาณด้วย / c-met ฟังก์ชัน
ขน alpacaสร้างสีให้สรุปทฤษฎีพื้นฐานสำหรับการสำรวจเพิ่มเติมของบทบาทของ ด้วย การสร้างเม็ดสี c-met /
.
สงวนลิขสิทธิ์ 2015 บริษัท Gmbh สงวนลิขสิทธิ์ .
สัตว์เบื้องต้นในผู้ใหญ่ เสื้อสีขึ้นอยู่กับเม็ดสีผลิต
melanocytes ที่จำกัดที่ชายแดนเนื้อและโอน
เมลานินที่มีอวัยวะที่อยู่ติดกันกับคีราติโนไซต์ที่
ผลักดันขึ้นเป็นพวกเขา proliferate ( barsh , 2007 ) เมลาโนไซต์
สร้างสองชนิดที่แตกต่างกันของเมลานิน คือ สีเหลืองกับสีแดงและสีดำ
pheomelanins สีน้ำตาลเมลานิน
( ITO และวากา 2008 Pape et al . , 2008 )
การสังเคราะห์เมลานินที่ถูกควบคุมโดยมากกว่า 350 ยีนในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ได้แก่ ปัจจัยการถอดความ
melanogenic เอนไซม์ , ฮอร์โมน , สารสื่อประสาทชนิด
, ,และปัจจัยการเจริญเติบโต ( slominski et al . , 2004 ,
ยามากุจิและการได้ยิน , 2009 , montoliu et al . , 2015 ) อย่างไรก็ตาม
โมเลกุลและเซลล์ กลไกควบคุมสีเสื้อใน woolproducing
สัตว์ได้สมบูรณ์มาก .
ลพากามีมากกว่า 22 เสื้อสีธรรมชาติ ดังนั้น จึงเหมาะสำหรับศึกษาสายพันธุ์
เขียนเกี่ยวกับกลไกที่∗ . โทรศัพท์ : 86 354 628 9208 ; โทรสาร :
ACT histochemica
J หรือ rnal หน้าแรก : www.elsevier . de / acthis
การแสดงออกและการกระจายของปัจจัยการเจริญเติบโตของเนื้อเยื่อตับ ( ด้วย )
และตัวรับ ( c-met ) ลพากา ( vicugna Pacos ) หนังที่เกี่ยวข้องกับสีขาว และ สีน้ำตาล เสื้อคลุมสี
yu1 เ ่ยวเยี่ยน เขา xiuju , 1 , junbing เจียง junping เขา ruiwen Haidong วัง
พัดลมเจียนจุงเกิง , changsheng ดง∗
วิทยาลัยสัตวศาสตร์และสัตวแพทย์ , Shanxi เกษตรกรรมมหาวิทยาลัย จัดหา , Shanxi , 030801 , PR China
r t i C L E n f o :
บทความประวัติศาสตร์ที่ได้รับ 19 มีนาคม 2015
รับแก้ไขแบบฟอร์ม 28 พฤษภาคม 2015
4 มิถุนายน 2015
คำสำคัญ : ยอมรับ ด้วย
c-met อัลปาก้าสีเสื้อผิวหนัง
B R A C T
T sปัจจัยการเจริญเติบโตของตับ ( ด้วย ) / c-met ส่งสัญญาณได้ถูกถือว่าเป็นเส้นทางหลักในทั้ง
เมลาโนไซต์การพัฒนาและเกิดเม็ดสีผิวเมลานิน . ที่จะเข้าใจการแสดงออกรูปแบบและลักษณะของการกระจายและเนื้อเยื่อ
ด้วย c-met ตัวรับของมันในผิวของสีขาวกับ
อัลปาก้าสีน้ำตาล ( vicugna Pacos ) เราตรวจพบเนื้อเยื่อจำหน่ายและใช้หลอดและ
c-met ด้วยวิเคราะห์การแสดงออกรูปแบบโดยใช้ blot ตะวันตกและปริมาณเวลา PCR จริง ( qpcr ) การวิเคราะห์หลอด
แสดงว่าย้อมด้วยทนทานเพิ่มขึ้นและตุ่ม dermal
มีเซนไคม์ผิวอัลปาก้าขาวเมื่อเทียบกับที่ของบราวน์ อย่างไรก็ตาม c-met staining พบ
ผลในเชิงบวกอย่างมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่ง inhair เมทริกซ์และรากฝักในผิวอัลปาก้าสีน้ำตาลผลลัพธ์
blot ตะวันตกและ qpcr ชี้ให้เห็นว่า ด้วย c-met มีการแสดงออกที่แตกต่างกันและระดับสูง สีขาว และสีน้ำตาล อัลปาก้า
สกิน ตามลำดับ และมีรูปแบบการแสดงออกของโปรตีนและยีนเดียวกันใน
สีขาวและสีน้ำตาลอัลปาก้าสกิน ผลการศึกษาพบว่า การส่งสัญญาณด้วย / c-met ฟังก์ชัน
ขน alpacaสร้างสีให้สรุปทฤษฎีพื้นฐานสำหรับการสำรวจเพิ่มเติมของบทบาทของ ด้วย การสร้างเม็ดสี c-met /
.
สงวนลิขสิทธิ์ 2015 บริษัท Gmbh สงวนลิขสิทธิ์ .
สัตว์เบื้องต้นในผู้ใหญ่ เสื้อสีขึ้นอยู่กับเม็ดสีผลิต
melanocytes ที่จำกัดที่ชายแดนเนื้อและโอน
เมลานินที่มีอวัยวะที่อยู่ติดกันกับคีราติโนไซต์ที่
ผลักดันขึ้นเป็นพวกเขา proliferate ( barsh , 2007 ) เมลาโนไซต์
สร้างสองชนิดที่แตกต่างกันของเมลานิน คือ สีเหลืองกับสีแดงและสีดำ
pheomelanins สีน้ำตาลเมลานิน
( ITO และวากา 2008 Pape et al . , 2008 )
การสังเคราะห์เมลานินที่ถูกควบคุมโดยมากกว่า 350 ยีนในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ได้แก่ ปัจจัยการถอดความ
melanogenic เอนไซม์ , ฮอร์โมน , สารสื่อประสาทชนิด
, ,และปัจจัยการเจริญเติบโต ( slominski et al . , 2004 ,
ยามากุจิและการได้ยิน , 2009 , montoliu et al . , 2015 ) อย่างไรก็ตาม
โมเลกุลและเซลล์ กลไกควบคุมสีเสื้อใน woolproducing
สัตว์ได้สมบูรณ์มาก .
ลพากามีมากกว่า 22 เสื้อสีธรรมชาติ ดังนั้น จึงเหมาะสำหรับศึกษาสายพันธุ์
เขียนเกี่ยวกับกลไกที่∗ . โทรศัพท์ : 86 354 628 9208 ; โทรสาร :
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ริ้วรอย
- Uncalled included work as regular employ
- healthcare
- Zinc will corrode to protect which of th
- I hope i'm not disturbing you ?
- Chick
- I hope i'm not disturbing you ?
- very fair
- I will take you wath me to newyork
- we have eaten dinner
- you mean company register is as per atta
- The application will also give an option
- i want imfrom you about cost of party
- คุณชอบนักร้องคนไหนที่สุด
- ฉันอยากให้โลกมีความสามัคคี
- ดูแลคอนโด
- To visited Khun. Somchai. Ask for Genera
- Did you know that the gas-filled planet'
- ริ้วรอย
- ลูกค้าประจำ
- Tabule
- What's going
- แปรงฟัน อาบน้ำ
- The utilization of epigeic earthworms (E
