The nitrilase from Pseudomonas fluo

The nitrilase from Pseudomonas fluorescens EBC191 converted 2-methyl-2-phenylpropionitrile, which contains a quaternary
carbon atom in the
-position toward the nitrile group, and also similar sterically demanding substrates, such as 2-hydroxy-2-
phenylpropionitrile (acetophenone cyanohydrin) or 2-acetyloxy-2-methylphenylacetonitrile. 2-Methyl-2-phenylpropionitrile
was hydrolyzed to almost stoichiometric amounts of the corresponding acid. Acetophenone cyanohydrin was transformed to the
corresponding acid (atrolactate) and amide (atrolactamide) at a ratio of about 3.4:1. The (R)-acid and the (S)-amide were formed
preferentially from acetophenone cyanohydrin. A homology model of the nitrilase suggested that steric hindrance with amino
acid residue Tyr54 could impair the binding or conversion of sterically demanding substrates. Therefore, several enzyme variants
that carried mutations in the respective residues were generated and subsequently analyzed for the substrate specificity and
enantioselectivity of the reactions. Enzyme variants that demonstrated increased relative activities for the conversion of acetophenone
cyanohydrin were identified. The chiral analysis of these reactions demonstrated peculiar reaction kinetics, which suggested
that the enzyme variants converted the nonpreferred (S)-enantiomer of acetophenone cyanohydrin with a higher reaction
rate than that of the (preferred) (R)-enantiomer. Recombinant whole-cell catalysts that simultaneously produced the nitrilase
from P. fluorescens EBC191 and a plant-derived (S)-oxynitrilase from cassava (Manihot esculenta) converted acetophenone plus
cyanide at pH 4.5 to (S)-atrolactate and (S)-atrolactamide. These recombinant cells are promising catalysts for the synthesis of
stable chiral quaternary carbon centers from ketones.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Nitrilase จาก Pseudomonas fluorescens EBC191 แปลง 2-methyl-2-phenylpropionitrile ควอเทอร์นารีประกอบด้วยคาร์บอนอะตอมในตำแหน่งไปทางระบบรอบกลุ่ม และยังคล้าย sterically ต้องพื้นผิว เช่น 2-hydroxy-2 -phenylpropionitrile (acetophenone cyanohydrin) หรือ 2-acetyloxy-2-methylphenylacetonitrile 2-methyl-2-phenylpropionitrilehydrolyzed ได้ยอดเงินเกือบ stoichiometric ของกรดที่สอดคล้องกัน Acetophenone cyanohydrin ถูกแปลงต่อไปนี้กรดที่สอดคล้องกัน (atrolactate) และ amide (atrolactamide) ที่อัตราส่วนของเกี่ยวกับ 3.4:1 (R) -กรดและ (S) -amide ถูกก่อตั้งขึ้นจาก acetophenone cyanohydrin โน้ต แบบ homology ของ nitrilase แนะนำที่น๊อต steric กับอะมิโนกรดตกค้าง Tyr54 สามารถทำการผูกการแปลง sterically เรียกร้องได้ ดังนั้น หลายเอนไซม์ย่อยที่มีการกลายพันธุ์ในตกเกี่ยวข้องสร้าง และมาวิเคราะห์สำหรับ specificity พื้นผิว และenantioselectivity ของปฏิกิริยาที่ เอนไซม์ย่อยที่แสดงกิจกรรมเพิ่มญาติของ acetophenonecyanohydrin ที่ระบุ การวิเคราะห์สารเคมี chiral อนุปฏิกิริยาเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าแปลกประหลาดปฏิกิริยาจลนพลศาสตร์ ที่แนะนำที่ย่อยเอนไซม์แปลง nonpreferred (S) -enantiomer ของ cyanohydrin acetophenone มีปฏิกิริยาสูงขึ้นกว่าที่จะ (ต้อง) (R) -enantiomer อัตรา Recombinant เซลล์ทั้งสิ่งที่ส่งเสริมที่พร้อมผลิตได้ nitrilaseจาก P. fluorescens EBC191 และโรงงานได้รับ (S) -acetophenone oxynitrilase จากมันสำปะหลัง (Manihot esculenta) แปลงบวกไซยาไนด์ที่ pH 4.5 (S) - atrolactate และ (S) - atrolactamide เซลล์ recombinant เหล่านี้เป็นสิ่งที่กำหนดการส่งเสริมการสังเคราะห์ของศูนย์มีเสถียรภาพสารเคมี chiral อนุ quaternary คาร์บอนจากคีโตน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

nitrilase จาก Pseudomonas fluorescens EBC191 แปลง 2-methyl-2-phenylpropionitrile ซึ่งประกอบด้วยสี่
อะตอมของคาร์บอนใน? -position ที่มีต่อกลุ่มไนไตรล์และยังพื้นผิวที่คล้ายกันเรียกร้อง sterically เช่น 2-hydroxy-2-
phenylpropionitrile (acetophenone cyanohydrin ) หรือ 2-acetyloxy-2-methylphenylacetonitrile 2-Methyl-2-phenylpropionitrile
ถูกไฮโดรไลซ์กับจำนวนเงิน stoichiometric เกือบกรดที่สอดคล้อง acetophenone cyanohydrin ถูกเปลี่ยนเป็น
กรดที่สอดคล้องกัน (atrolactate) และเอไมด์ (atrolactamide) ในอัตราส่วนประมาณ 3.4: 1 (R) และ -acid (S) -amide ถูกสร้างขึ้น
พิเศษจาก acetophenone cyanohydrin รูปแบบที่คล้ายคลึงกันของ nitrilase ชี้ให้เห็นว่าอุปสรรค steric กับอะมิโน
สารตกค้างกรด Tyr54 อาจทำให้เสียผลผูกพันหรือการแปลงของพื้นผิวที่เรียกร้อง sterically ดังนั้นสายพันธุ์เอนไซม์หลาย
ที่ดำเนินการกลายพันธุ์ในสารตกค้างที่เกี่ยวข้องถูกสร้างและวิเคราะห์ต่อมาสำหรับพื้นผิวและความจำเพาะ
enantioselectivity ของปฏิกิริยา สายพันธุ์ของเอนไซม์เพิ่มขึ้นแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมที่สัมพันธ์กันสำหรับการแปลง acetophenone
cyanohydrin ถูกระบุ การวิเคราะห์ chiral ของปฏิกิริยาเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงปฏิกิริยาจลนพลศาสตร์แปลกซึ่งชี้ให้เห็น
ว่าสายพันธุ์เอนไซม์แปลง nonpreferred (S) -enantiomer ของ acetophenone cyanohydrin กับปฏิกิริยาสูงกว่า
อัตรากว่า (ที่ต้องการ) (R) -enantiomer ตัวเร่งปฏิกิริยาทั้งเซลล์ Recombinant ที่พร้อมผลิต nitrilase
จาก P. fluorescens EBC191 และมาโรงงาน (S) -oxynitrilase จากมันสำปะหลัง (Manihot esculenta) แปลง acetophenone บวก
ไซยาไนด์ที่ค่า pH 4.5 ที่จะ (S) และ -atrolactate (S) -atrolactamide . เซลล์เหล่านี้มีแนวโน้ม recombinant ตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับการสังเคราะห์
ที่มีความเสถียร chiral ศูนย์คาร์บอนสี่จากคีโตน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ nitrilase จาก Pseudomonas fluorescens ebc191 แปลง 2-methyl-2-phenylpropionitrile ซึ่งประกอบด้วยอะตอมของคาร์บอนใน
Quaternary
- ตำแหน่งทางกลุ่มไน , และยัง ที่คล้ายกัน sterically เรียกร้องพื้นผิว เช่น 2-hydroxy-2 -
phenylpropionitrile ( อะเซโตฟีโนนลูกแหง่ ) หรือ 2-acetyloxy-2-methylphenylacetonitrile . 2-methyl-2-phenylpropionitrile
ถูกไฮโดรไลซ์เกือบอัตราส่วนปริมาณกรดที่สอดคล้องกัน อะเซโตฟีโนนลูกแหง่ได้ถูก
กรดที่สอดคล้องกัน ( atrolactate ) และเอไมด์ ( atrolactamide ) ในสัดส่วนประมาณ 3.4:1 . ( R ) - กรดและ ( S ) - ไมด์ขึ้น
preferentially จากอะเซโตฟีโนนลูกแหง่ . ซึ่งเป็นรูปแบบของ nitrilase แนะนำว่าตัวเอด้วย
.tyr54 กรดตกค้างทำให้ผูกพันหรือการแปลง sterically ความต้องการท ดังนั้น หลายสายพันธุ์
เอนไซม์ที่นำการกลายพันธุ์ในกากนั้นถูกสร้างขึ้นและสามารถวิเคราะห์พื้นผิวความจำเพาะและ
ค่าของปฏิกิริยา ตัวแปรที่แสดงให้เห็นว่าเอนไซม์เพิ่มขึ้นสัมพันธ์กิจกรรมสำหรับการแปลงของอะเซโตฟีโนน
ลูกแหง่ถูกระบุ การวิเคราะห์ปฏิกิริยาจลนพลศาสตร์ปฏิกิริยาเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าจวนตัวประหลาดซึ่งชี้ให้เห็นว่าเอ็นไซม์สายพันธุ์
แปลง nonpreferred ( s ) - ibuprofen ของอะเซโตฟีโนนลูกแหง่ด้วยปฏิกิริยา
อัตราที่สูงกว่าของ ( ที่ต้องการ ) ( R ) - ibuprofen . เซลล์ทั้งเซลล์ตัวเร่งปฏิกิริยาที่พร้อมผลิต nitrilase
จากหน้าโรค ebc191 และพืชที่มา ( s ) - oxynitrilase จากมันสำปะหลัง ( มันสำปะหลัง ) แปลงอะเซโตฟีโนนบวก
ไซยาไนด์ที่ pH 4.5 ( s ) - atrolactate และ ( S ) - atrolactamide . เซลล์เซลล์เหล่านี้เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับการสังเคราะห์
สัญญามั่นคง chiral Quaternary คาร์บอนศูนย์จากคีโตน .