PFGE samples were prepared accordin

PFGE samples were prepared according to the protocol as published
before (Okuklu, 2005, pp. 33e35). Bacterial cultures were
activated overnight in 10 mL of MRS broth at 42 C. Cells from
300 mL culture were harvested by centrifugation (Hettich Universal
Zentrifugen, 320R) at 10,000 g for 5 min, and washed in Trise
EDTA Buffer (10 mmol/L Tris, pH 7.0, 20 mmol/L NaCl, 50 mmol/L
EDTA, pH 8.0). Cell pellet were resuspended in 100 mL of the same
buffer, mixed with 100 mL of 2 g/100 mL low melting temperature
agarose (Applichem) at 50 C, dispensed into the plug wells, and
stored at 4 C for 30 min. The plugs were taken to 1 mL lysozyme
solution (30 mmol/L Tris, pH 8.0, 50 mmol/L NaCl, 5 mmol/L EDTA,
pH 8.0, 10 mg/mL lysozyme) for lysis at 37 C for 4 h, and washed
with 5mLwashing buffer (20 mmol/L Tris, pH 8.0, 50 mmol/L EDTA,
pH 8.0) for 45 min with gentle agitation. Subsequently the plugs
were incubated in 1mL of proteinase K solution (100 mmol/L EDTA,
pH 8.0, 0.2 g/100 mL sodium deoxycholate, 1 g/100 mL sodium Nlaurylsarcosine,
1 mg/mL proteinase K) at 50 C overnight and
washed twice in washing buffer for 45 min with gentle agitation,
transferred into PMSF buffer (20 mmol/L Tris, pH 8.0, 50 mmol/L
EDTA, pH 8.0, 1 mmol/L PMSF) for 45 min and taken to the final
wash in 10 times diluted washing buffer before restriction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่าง PFGE
ถูกจัดทำขึ้นตามโปรโตคอลที่เป็นที่เผยแพร่ก่อน(Okuklu 2005 ได้ pp. 33e35) วัฒนธรรมแบคทีเรียถูกเปิดใช้งานค้างคืนใน 10 มิลลิลิตรของน้ำซุป MRS ที่ 42 องศาเซลเซียส
เซลล์จากวัฒนธรรมมิลลิลิตร 300 ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง (Hettich สากล Zentrifugen, 320R) 10,000? กรัมเป็นเวลา 5 นาทีและล้างใน Trise EDTA บัฟเฟอร์ (10 มิลลิโมล / ลิตรทริสพีเอช 7.0, 20 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 50 มิลลิโมล / ลิตรEDTA, pH 8.0) ตะกอนเซลล์ถูก resuspended ใน 100 มิลลิลิตรเดียวกันบัฟเฟอร์ผสมกับ100 มิลลิลิตร 2 กรัม / 100 มลอุณหภูมิหลอมละลายต่ำagarose (Applichem) ที่ 50 องศาเซลเซียส, จ่ายลงไปในหลุมปลั๊กและเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ปลั๊กถูกนำไป 1 มิลลิลิตรไลโซไซม์การแก้ปัญหา (30 มิลลิโมล / ลิตรทริสพีเอช 8.0, 50 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 5 มิลลิโมล EDTA / L ค่า pH 8.0 10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรไลโซไซม์) สำหรับสลายที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง และล้างด้วยบัฟเฟอร์5mLwashing (20 มิลลิโมล / ลิตรทริสพีเอช 8.0, 50 มิลลิโมล EDTA / L ค่า pH 8.0) เป็นเวลา 45 นาทีกับการกวนอ่อนโยน ต่อจากปลั๊กถูกบ่มใน 1 mL ของโปร K แก้ปัญหา (100 มิลลิโมล / ลิตร EDTA, พีเอช 8.0, 0.2 กรัม / 100 มิลลิลิตรโซเดียม Deoxycholate 1 กรัม / 100 มิลลิลิตรโซเดียม Nlaurylsarcosine, 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโปร K) ที่ 50 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืนและล้างครั้งที่สองในบัฟเฟอร์ซักผ้าเป็นเวลา 45 นาทีกับการกวนอ่อนโยนโอนเข้าบัฟเฟอร์PMSF (20 มิลลิโมล / ลิตรทริสพีเอช 8.0, 50 มิลลิโมล / ลิตรEDTA, พีเอช 8.0, 1 มิลลิโมล / ลิตร PMSF) เป็นเวลา 45 นาทีและนำสู่รอบสุดท้ายล้างใน 10 ครั้งบัฟเฟอร์ซักผ้าก่อนที่จะปรับลดข้อ จำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่าง PFGE เตรียมตามขั้นตอนที่เผยแพร่
ก่อน ( okuklu , 2005 , pp . 33e35 ) วัฒนธรรมของแบคทีเรียถูก
เปิดค้างคืนใน 10 มิลลิลิตรของ MRS broth ที่ 42  C เซลล์จาก
วัฒนธรรม 300 มล. เก็บโดยการเหวี่ยงแยก ( Hettich สากล
zentrifugen 320r , ที่ 10 , 000  กรัมเป็นเวลา 5 นาที และล้างออก trise
EDTA บัฟเฟอร์ ( 10 มิลลิโมล / ลิตรซึ่ง pH 7.0 , 20 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 50 มิลลิโมล / ลิตร
EDTA pH 8.0 )คือ เซลล์เม็ด resuspended 100 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์เดียวกัน
ผสม 100 มิลลิลิตร 2 กรัม / 100 มิลลิลิตร ( จุดหลอมเหลวต่ำอุณหภูมิ
( applichem ) ที่ 50  C จ่ายเข้าปลั๊กบ่อและ
เก็บไว้ที่ 4  C เป็นเวลา 30 นาที ปลั๊กถูกโซลูชั่นไลโซไซม์
1 ml ( 30 มิลลิโมล / ลิตรซึ่ง pH 8.0 , 50 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ความเข้มข้น 5 มิลลิโมล / ลิตร EDTA ,
pH 8.0 , 10 mg / ml ) ผลิต  ไลโซไซม์ที่ 37 องศาเซลเซียส 4 ชั่วโมงและล้าง
กับ 5mlwashing บัฟเฟอร์ ( 20 mmol / L หรือ pH 8.0 , 50 มิลลิโมล / ลิตร EDTA ,
pH 8.0 ) 45 นาที เบาๆ เขย่า ต่อมาเป็นปลั๊ก
) 1ml ของสารละลาย K โปรตีน ( 100 มิลลิโมล / ลิตร EDTA ,
pH 8.0 , 0.2 กรัม / 100 กรัม โซเดียมดี กซีโชเลต 1 กรัม / 100 มิลลิลิตร โซเดียม nlaurylsarcosine
1 mg / ml , โปรเค ) ที่ 50  C ค้างคืนและล้างบัฟเฟอร์สำหรับ
ล้าง 2 ครั้งใน 45 นาทีด้วยอ่อนโยน การปั่น
ย้ายลงในบัฟเฟอร์ ( PMSF 20 mmol / L หรือ pH 8.0 , 50 มิลลิโมล / ลิตร
EDTA pH 8.0 , 1 มิลลิโมล / ลิตร PMSF ) 45 นาที และนำไปล้างน้ำสุดท้าย
10 ครั้งลดล้างบัฟเฟอร์ก่อนเท่านั้น