To prepare each gill homogenate, 4–

To prepare each gill homogenate, 4–5 crabs acclimated to each salinity for 10 days, or to 21‰ for each exposure time, were used. The gills were carefully blotted on filter paper to remove excess buffer, weighed, diced and homogenized in homogenization buffer (20 mL buffer/g wet tissue) using a Potter homogenizer. After centrifuging the crude extract at 20,000 × g for 35 min at 4 °C, the centrifuge tubes containing the supernatant were placed in crushed ice and the pellet was resuspended in an equal volume of homogenization buffer. After further centrifuging as above, the two supernatants were pooled and centrifuged at 100,000 × g for 2 h at 4 °C. The resulting pellet was homogenized in 20 mmol L− 1 imidazole buffer, pH 6.8, containing 250 mmol L− 1 sucrose (5 mL buffer/g wet tissue). Finally, 0.5-mL aliquots were rapidly frozen in an acetone/dry ice bath and stored at − 20 °C. No appreciable loss of activity was seen after 2-month's storage. When required, the aliquots were thawed, placed on crushed ice and used immediately.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีใช้ 4 – 5 acclimated ปูเค็มละ 10 วัน หรือ 21‰ สำหรับกันแสง การเตรียมแต่ละ homogenate เหงือก Gills รอบคอบ blotted บนกระดาษกรองเอาบัฟเฟอร์ส่วนเกิน น้ำหนัก วุ้น และ homogenized เป็นกลุ่มในบัฟเฟอร์ homogenization (20 mL/g บัฟเฟอร์เปียกเนื้อเยื่อ) ใช้ homogenizer พอตเตอร์ หลังจาก centrifuging สารสกัดหยาบที่ 20000 × g สำหรับ 35 นาทีที่ 4 ° C ท่อเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ประกอบด้วย supernatant ถูกวางในน้ำแข็งบด และเม็ดถูก resuspended ในปริมาณเท่ากัน homogenization บัฟเฟอร์ หลังจากเพิ่มเติม centrifuging ด้านบน supernatants สองทางถูกพู และ centrifuged ที่ 100000 × g สำหรับ h 2 ที่ 4 องศาเซลเซียส เม็ดได้ถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 20 mmol L− 1 อิมิดาโซลบัฟเฟอร์ pH 6.8 ประกอบด้วย 250 mmol ซูโครส L− 1 (5 mL/g บัฟเฟอร์เปียกเนื้อเยื่อ) สุดท้าย aliquots 0.5 mL อย่างรวดเร็วในการอาบน้ำแข็งอะซิโตนรูม และเก็บที่− 20 องศาเซลเซียส สูญเสียไม่เห็นกิจกรรมที่เห็นหลังจาก 2 เดือนเก็บ เมื่อจำเป็น aliquots thawed วางบนน้ำแข็งบด และใช้ทันที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อเตรียมความพร้อมในแต่ละ homogenate เหงือก 4-5 ปูเค็มปรับตัวละ 10 วันหรือ 21 ‰สำหรับแต่ละเวลารับแสงที่ถูกนำมาใช้ เหงือกถูกเปื้อนอย่างรอบคอบบนกระดาษกรองเพื่อเอา​​กันชนเกินชั่งน้ำหนักหั่นสี่เหลี่ยมลูกเต๋าและปั่นในบัฟเฟอร์เป็นเนื้อเดียวกัน (20 บัฟเฟอร์มิลลิลิตร / กรัมเนื้อเยื่อเปียก) โดยใช้ homogenizer พอตเตอร์ หลังจากเหวี่ยงสารสกัดที่ 20,000 ×กรัมเป็นเวลา 35 นาทีที่ 4 ° C หลอดหมุนเหวี่ยงที่มีใสถูกวางไว้ในน้ำแข็งบดและอัดเม็ดที่ถูก resuspended ในปริมาณที่เท่ากันของบัฟเฟอร์เป็นเนื้อเดียวกัน หลังจากเหวี่ยงต่อไปข้างต้นทั้งสอง supernatants ถูกรวบรวมและหมุนเหวี่ยงที่ 100,000 ×กรัมเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เม็ดส่งผลทำให้เป็นเนื้อเดียวกันใน 20 มิลลิโมล L- 1 บัฟเฟอร์ imidazole ค่า pH 6.8 ที่มี 250 มิลลิโมล L- 1 ซูโครส (5 บัฟเฟอร์มิลลิลิตร / กรัมเนื้อเยื่อเปียก) สุดท้าย aliquots 0.5 มิลลิลิตรถูกแช่แข็งอย่างรวดเร็วในอะซีโตน / ห้องอาบน้ำน้ำแข็งแห้งและเก็บไว้ที่ - 20 องศาเซลเซียส ไม่มีการสูญเสียที่เห็นได้จากการทำกิจกรรมที่เห็นหลังการเก็บรักษา 2 เดือน เมื่อต้อง aliquots ถูกละลายที่วางอยู่บนน้ำแข็งบดและใช้งานได้ทันที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เตรียมแยกแต่ละกิล 4 – 5 ปู acclimated แต่ละความเค็ม 10 วัน หรือ 21 ‰แต่ละเวลาใช้ เหงือกเป็นอย่างที่เปื้อนบนกระดาษกรองเพื่อลบบัฟเฟอร์ส่วนเกิน , หนัก , diced และบดในการบัฟเฟอร์ ( Buffer / กรัมเนื้อเยื่อเปียก 20 ml ) ใช้เครื่องปั่นพอตเตอร์ . หลังจากสารสกัดหยาบที่ 20000 × g 35 นาทีที่ 4 ° Cเครื่องหมุนท่อที่มีนำอยู่ในน้ำแข็ง และ เม็ด เป็น resuspended ในปริมาณเท่ากัน การบัฟเฟอร์ หลังจากเติมสารข้างต้นสอง supernatants ถูกรวมไฟฟ้าที่ 100000 × G 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศา ส่งผลให้เม็ดถูกบดใน 20 mmol l − 1 อิมิดาโซลบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ,บรรจุ 250 มิลลิโมล L − 1 ซูโครส ( บัฟเฟอร์ / กรัมเนื้อเยื่อเปียก 5 ml ) ในที่สุด 0.5-ml เฉยๆได้อย่างรวดเร็วแช่แข็งในอะซิโตน / บริการนํ้าแข็งและเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 องศา ไม่สำนึกบุญคุณ การสูญเสียของ บริษัท เวสเทิร์น กิจกรรมที่เห็นหลังจากเก็บ 2 เดือน . เมื่อต้องการ , เฉยๆก็ละลายวางไว้บนน้ำแข็งและใช้งานได้ทันที .