TiO2-Based SPE for the Purification

TiO2-Based SPE for the Purification of 2′-O-Methylated Ribonucleosides from RNA.
2′-O-Methylation is present in various cellular RNAs and has been considered crucial for RNA functionality and biogenesis.
32,33 As the 2′-Omethylated modifications exist on RNA chains, it is even impossible for a traditional enzymatic digestion method to clear up the normal ribonucleosides. Here, we employed the TiO2- based SPE method to purify 2′-O-methylated ribonucleosides from the bulky unmodified ribonucleosides in RNA of HeLa cells.
As shown in Figure 6A, the signals of the high-abundance normal ribonucleosides dominated the chromatogram by direct analysis.
While after extraction, all the high-abundance normal ribonucleosides have been entirely removed, and only 2′-Omethylated ribonucleosides were observed (Figure 6B).
The results provided a proof-of-concept for the enrichment of 2′-Omethylated modified ribonucleosides from bulky normal ribonucleosides, which can be further applied to the purification
of other relevant modified ribonucleosides (such as modifications in both the nucleobase and 2′ position of the pentose) for their subsequent sensitive analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

SPE ที่ใช้ TiO2 สำหรับฟอกของ Ribonucleosides 2′-O-Methylated จากอาร์เอ็นเอ
2′-O-ปรับอยู่ใน RNAs ต่าง ๆ โทรศัพท์มือถือ และได้รับการพิจารณาในการทำงานของอาร์เอ็นเอและ biogenesis
32, 33 เป็นการแก้ไขที่ 2′-Omethylated อยู่ในอาร์เอ็นเอโซ่ แม้จะไม่สามารถย่อยอาหารเอนไซม์ในระบบดั้งเดิมวิธีการล้างค่า ribonucleosides ปกติ ที่นี่ เราจ้าง TiO2 - ตามวิธี SPE ต้องทำ 2′-O-methylated ribonucleosides จาก ribonucleosides unmodified ขนาดใหญ่ในเซลล์อาร์เอ็นเอของ HeLa นั้น
ดังแสดงในรูปที่ 6A สัญญาณของ ribonucleosides ปกติความอุดมสมบูรณ์สูงครอบงำ chromatogram ที่ โดยวิเคราะห์โดยตรง
ขณะหลังจากสกัด ทั้งหมดความสูงปกติ ribonucleosides ได้ถูกลบออกทั้งหมด และเฉพาะ 2′ Omethylated ribonucleosides สุภัค (รูปที่ 6B)
ผลลัพธ์ให้เป็นหลักฐานของแนวคิดที่โดดเด่นของ ribonucleosides 2′-Omethylated การปรับเปลี่ยนจากขนาดใหญ่ปกติ ribonucleosides ซึ่งสามารถต่อไปใช้เพื่อทำให้บริสุทธิ์
ของอื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องปรับเปลี่ยน ribonucleosides (เช่นการปรับเปลี่ยนในตำแหน่ง nucleobase และ 2′ ของการ pentose) สำหรับการวิเคราะห์ความสำคัญต่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

SPE TiO2-Based สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ 2'-O-Methylated Ribonucleosides จากอาร์เอ็นเอ
2'-O-Methylation อยู่ใน RNAs เซลล์ต่างๆและได้รับการพิจารณาที่สำคัญสำหรับการทำงานอาร์เอ็นเอและ biogenesis
32,33 เป็น 2'-Omethylated การปรับเปลี่ยนที่มีอยู่บนเครือข่ายอาร์เอ็นเอจะเป็นไปไม่ได้สำหรับวิธีการย่อยของเอนไซม์แบบดั้งเดิมที่จะชัดเจนขึ้น ribonucleosides ปกติ ที่นี่เราใช้วิธีการ SPE TiO2- ตามการชำระล้าง 2'-O-methylated ribonucleosides จาก ribonucleosides แปรใหญ่ในอาร์เอ็นเอของเซลล์ HeLa
ดังแสดงในรูปที่ 6A สัญญาณของความอุดมสมบูรณ์สูง ribonucleosides ปกติครอบงำ chromatogram โดยตรง การวิเคราะห์
ในขณะที่หลังจากการสกัดทั้งหมดสูงอุดมสมบูรณ์ ribonucleosides ปกติได้ถูกลบออกทั้งหมดและเพียง ribonucleosides 2'-Omethylated ถูกตั้งข้อสังเกต (รูปที่ 6B)
ผลการให้หลักฐานของแนวคิดสำหรับการตกแต่งของ 2'-Omethylated แก้ไข ribonucleosides จาก ribonucleosides ปกติขนาดใหญ่ซึ่งสามารถนำไปใช้ต่อไปทำให้บริสุทธิ์
ของ ribonucleosides อื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องแก้ไข (เช่นการปรับเปลี่ยนทั้งใน nucleobase และ 2 'ตำแหน่งของ pentose) สำหรับการวิเคราะห์ความอ่อนไหวของพวกเขาต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ TiO2 ที่ใช้เอสพี 2 นั้น - o-methylated ribonucleosides จาก RNA
2 - เมตทิเลชั่นนั้นอยู่ในเซลล์ต่าง ๆและ RNAs ได้รับการพิจารณาที่สำคัญสำหรับการทำงาน RNA และเครื่องกรองอากาศ .
32,33 นั้นเป็น 2 - omethylated ปรับเปลี่ยนที่มีอยู่บนอาร์เอ็นเอโซ่ มันเป็นไปไม่ได้สำหรับเอนไซม์ย่อยแบบดั้งเดิมวิธีการชัดเจนขึ้น ribonucleosides ปกติ ที่นี่เราใช้วิธีการฟอกสาร TiO2 ตาม - 2 - o-methylated นั้น ribonucleosides จากเทิงแปร ribonucleosides ใน RNA ของล่าเซลล์
ดังแสดงในรูปที่ 6 , สัญญาณของความอุดมสมบูรณ์สูง ปกติ ribonucleosides dominated โดยโครมาการวิเคราะห์โดยตรง
ในขณะที่หลังจากการสกัดทั้งหมดความอุดมสมบูรณ์สูง ปกติ ribonucleosides ได้รับทั้งหมดออกและเพียง 2 - omethylated นั้น ribonucleosides พบ ( รูปบน )
ผลให้หลักฐานของแนวคิดการดูแล omethylated 2 - ribonucleosides ดัดแปลงจาก ribonucleosides ขนาดใหญ่ปกติ ซึ่งสามารถใช้เพิ่มเติมเพื่อผลิต
ของอื่น ๆที่เกี่ยวข้อง ( เช่น การปรับเปลี่ยน ดัดแปลง ribonucleosides ทั้งนิวคลีโอเบส 2 ได้รับตำแหน่งของนาคร ) สำหรับการวิเคราะห์ความไวของพวกเขาที่ตามมา