Inoculum cultures were prepared by

Inoculum cultures were prepared by spreading a small piece off rozen seed bank onto LB-agar plates supplemented with 50 g/mLof kanamycin. Plates were incubated for 16–20 h at 30◦C to obtainconfluent growth. Cells were suspended from the plate with 5 mLof sterile LB medium, and the absorbance at 600 nm was measured.The batch phase medium (6 L) contained either 10 g/L of glycerolor 10 g/L of glucose. Bioreactors were inoculated with the volumeof the prepared inoculum required to set the initial OD600to 0.005.Fed-batch operation started at hour 15, by exponentially feedinga concentrated nutrient solution containing 600 g/L of glycerol or500 g/L of glucose. The feed rate was calculated according to theequation F(t) = (XbVb/SfYx/s)etwith  = 0.12 h−1. At a biomass of50–55 OD600the temperature was shifted from 30◦C to 42◦C. Thefed-batch cultures were ended when the biomass stopped increas-ing or partial cell lysis was observed.Culture samples were analyzed immediately for biomass(OD600). Plasmid yields were determined by quantification of plas-mid obtained from Qiagen (Hilden, Germany) Spin Miniprep Kitpreparations. Acetate concentrations in culture media supernatantsamples were measured using an enzymatic acetic acid test kit (Cat.No. 10148261035, R-Biopharm, Darmstadt, Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรม inoculum ได้เตรียม โดยการกระจายชิ้นส่วนเล็ก ๆ ปิด rozen ธนาคารเมล็ดพันธุ์บนแผ่น agar ปอนด์เสริมกับกานามัยซิน 50 g/mLof แผ่นที่ incubated สำหรับ h 16 – 20 ที่ 30◦C การเจริญเติบโต obtainconfluent เซลล์ถูกหยุดชั่วคราวจากแผ่นกับ 5 mLof กอซปอนด์ขนาดกลาง และ absorbance ที่ 600 nm ที่วัด10 g/L ใดของ glycerolor อยู่ชุดระยะกลาง (6 L) 10 g/L ของกลูโคส Bioreactors ได้ inoculated กับ volumeof inoculum เตรียมที่จำเป็นในการตั้งค่าการ 0.005.Fed-batch OD600to เริ่มต้นเริ่มที่ชั่วโมง 15 โดยสร้าง feedinga เข้มข้นธาตุอาหารโซลูชันประกอบด้วย 600 g/L ของกลีเซอร or500 g/L ของกลูโคส คำนวณอัตราอาหารตาม theequation F(t) = twith e (XbVb/SfYx/s) = 0.12 h−1 ที่เป็นชีวมวล อุณหภูมิ OD600the of50 – 55 ถูกจัดเปลี่ยนจาก 30◦C เพื่อ 42◦C Thefed-ชุดวัฒนธรรมได้สิ้นสุดลงเมื่อชีวมวลที่หยุด increas ing หรือ lysis เซลล์บางส่วนถูกตรวจสอบตัวอย่างของวัฒนธรรมได้วิเคราะห์ทันทีสำหรับ biomass(OD600) Plasmid อัตราผลตอบแทนได้กำหนด โดยนับของ plas กลางรับจาก Qiagen (Hilden เยอรมนี) หมุน Miniprep Kitpreparations Acetate ความเข้มข้นใน supernatantsamples สื่อวัฒนธรรมถูกวัดโดยใช้เป็นกรดอะซิติกเอนไซม์ในระบบทดสอบชุด (Cat.No 10148261035, R-Biopharm ดาร์มส เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมเชื้อได้จัดทำขึ้นโดยการกระจายเป็นชิ้นเล็ก ๆ ออกจากธนาคารเมล็ดพันธุ์กุหลาบใส่ลงในจานอาหารเลี้ยงเชื้อ LB-เสริมด้วย 50? g / mLof KANAMYCIN แผ่นถูกบ่มเป็นเวลา 16-20 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ30◦Cการเจริญเติบโต obtainconfluent เซลล์ที่ถูกระงับจากแผ่นที่มี 5 mLof หมันกลาง LB และดูดกลืนแสงที่ 600 นาโนเมตรเป็น measured.The กลางเฟสชุด (6 ลิตร) ที่มีอยู่ทั้ง 10 กรัม / ลิตรของ glycerolor 10 กรัม / ลิตรของกลูโคส Bioreactors ถูกเชื้อด้วย volumeof เชื้อที่เตรียมไว้ต้องตั้งเริ่มต้นการดำเนินการ OD600to 0.005.Fed ชุดเริ่มต้นที่ 15 ชั่​​วโมงโดยชี้แจง feedinga สารละลายธาตุอาหารที่มีความเข้มข้น 600 กรัม / ลิตรของกลีเซอรอล or500 กรัม / ลิตรของกลูโคส อัตราการป้อนที่คำนวณได้ตาม theequation F (t) = (? XbVb / SfYx / s) อี twith? = 0.12 h-1 ที่ชีวมวล of50-55 อุณหภูมิ OD600the ขยับจาก30◦Cจะ42◦C วัฒนธรรม Thefed ชุดก็สิ้นสุดลงเมื่อชีวมวลหยุดเพิ่มกว่าไอเอ็นจีหรือสลายเซลล์บางส่วนถูก observed.Culture ตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์ได้ทันทีสำหรับชีวมวล (OD600) อัตราผลตอบแทนพลาสมิดที่ถูกกำหนดโดยปริมาณของพลาสกลางที่ได้รับจาก Qiagen (ฮิลเดน, เยอรมนี) ปั่น miniprep Kitpreparations ความเข้มข้นใน Acetate supernatantsamples สื่อวัฒนธรรมถูกวัดโดยใช้กรดอะซิติกเอนไซม์ชุดทดสอบ (Cat.No. 10148261035 R-Biopharm, Darmstadt, เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 วัฒนธรรม เตรียมกระจายเป็นชิ้นเล็ก ๆ จากธนาคารเมล็ดพันธุ์ โรเซ็นลงบนจานวุ้นปอนด์เติม 50  กรัม / mlof ทั้งสอง จานถูกบ่ม 16 – 20 ชั่วโมง 30 ◦ C เพื่อการเจริญเติบโต obtainconfluent . เซลล์ที่ถูกระงับจากแผ่น 5 mlof เป็นหมันปอนด์ขนาดกลางและการดูดกลืนแสงที่ 600 nm เป็นวัดชุดระยะปานกลาง ( 6 ลิตร ) ที่มีอยู่ทั้ง 10 กรัม / ลิตร glycerolor 10 กรัมต่อลิตรและกลูโคส เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ( หัวเชื้อที่มีปริมาณเชื้อที่เตรียมไว้ต้องตั้งค่าเริ่มต้น od600to 0.005.fed-batch เริ่มปฏิบัติการในเวลา 15 ปี โดยชี้แจง feedinga ความเข้มข้นสารละลายธาตุอาหารที่ 600 กรัม / ลิตรของกลีเซอรอล or500 กรัมต่อลิตรและกลูโคสอัตราการป้อนคํานวณตาม theequation f ( t ) = (  xbvb / sfyx / s ) E  twith  = 0.12 H − 1 ที่สามารถ of50 – 55 od600the อุณหภูมิเปลี่ยนจาก 30 ◦ C 42 ◦ C thefed วัฒนธรรมชุดจบเมื่อสามารถหยุดการสลายเซลล์สินค้าไอเอ็นจีหรือบางส่วนพบว่า ตัวอย่างวัฒนธรรมวิเคราะห์ทันที ชีวมวล ( od600 )ถูกกำหนดโดยปริมาณของผลผลิต ในพลาสมิดที่ได้จาก QIAGEN ( Hilden เยอรมนี ) ปั่น miniprep kitpreparations . เตตความเข้มข้นใน supernatantsamples วัฒนธรรมสื่อถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบเอนไซม์ กรด ( cat.no . 10148261035 r-biopharm ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี , , )