Cells were prepared as previously d

Cells were prepared as previously described [10,11] and used for virus titrations and hemadsorption tests. Both methods were carried out according to standard procedures [12]. For quantitative real-time PCR (qPCR),viral DNA was extracted using the QIAamp®DNA Mini Kit (QIAGEN)according to the manufacturer’s instructions. Subsequently, qPCRwas performed according to the protocol published by King et al.[13] using a Bio-Rad CFX Cycler (Bio-Rad Laboratories). A dilutionseries of a synthetic standard with known copy numbers was used to quantify genome copies in the respective samples. To confirmintegrity of the p73 antigen after inactivation, immunogen preparations were tested in the commercial antigen ELISA Ingezim PPADAS K2 (INGENASA) according to the manufacturer‘s instructions.Moreover, genome copy numbers were compared prior and afterinactivation.Sera were tested for the presence of ASFV p73- and p30-specific antibodies using the INGEZIM PPA COMPAC ELISA (Ingenasa)and the SVANOVIR ASFV-Ab (SVANOVA) according to the manufacturer’s instructions. To assess neutralizing capacities of sera obtained prior to challenge infection, macrophage infection inhibition assays were carried out along with neutralization tests on permanent wild boar lung cells (WSL). Hemadsorption inhibition and indirect immunofluorescence staining was used asreadout (methodological details are available from the authors upon request).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีเตรียมเซลล์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [10,11] และใช้ทดสอบไวรัส titrations และ hemadsorption ทั้งสองวิธีได้ดำเนินตามขั้นตอนมาตรฐาน [12] สำหรับเชิงปริมาณแบบ real-time PCR (qPCR), ดีเอ็นเอไวรัสถูกสกัดโดยใช้การ QIAamp ®ดีเอ็นเอขนาดเล็กชุด (QIAGEN) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในเวลาต่อมา qPCRwas ปฏิบัติตามโพรโทคอลประกาศโดยกษัตริย์ร้อยเอ็ด al. [13] โดยใช้แบบไบ-Rad CFX Cycler (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad) Dilutionseries มาตรฐานสังเคราะห์มีหมายเลขสำเนาชื่อดังถูกใช้เพื่อกำหนดปริมาณกลุ่มสำเนาในตัวอย่างนั้น ๆ การ confirmintegrity ตรวจหา p73 หลังจากยกเลิกการเรียก immunogen เตรียมทดสอบในการตรวจหาเชิงพาณิชย์ ELISA Ingezim PPADAS K2 (INGENASA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต นอกจากนี้ กลุ่มสำเนาเลขถูกเปรียบเทียบก่อนและ afterinactivation จะถูกทดสอบสำหรับสถานะของแอนตี้ p73 และ p30-เฉพาะ ASFV ใช้ ELISA COMPAC PPA INGEZIM (Ingenasa) และ SVANOVIR ASFV Ab (SVANOVA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การประเมินกำลังการผลิตของจะได้รับก่อนที่จะติดเชื้อท้าทาย neutralizing, assays ยับยั้งเชื้อ macrophage ได้ดำเนินการพร้อมกับทดสอบปฏิกิริยาสะเทินบนเซลล์ปอดหมูป่าถาวร (WSL) Hemadsorption ยับยั้งและย้อมสี immunofluorescence ทางอ้อมที่ใช้ asreadout (methodological มีรายละเอียดจากผู้เขียนตามคำขอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ที่ถูกจัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [10,11] และใช้สำหรับการไทเทรตไวรัสและการทดสอบ hemadsorption ทั้งสองวิธีได้ดำเนินการตามขั้นตอนมาตรฐาน [12] สำหรับวิธี PCR เรียลไทม์เชิงปริมาณ (qPCR) ดีเอ็นเอไวรัสถูกสกัดโดยใช้QIAamp®DNA Mini Kit (QIAGEN) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ต่อมา qPCRwas ดำเนินการตามโปรโตคอลที่ตีพิมพ์โดยกษัตริย์ et al. [13] โดยใช้ Bio-Rad CFX Cycler (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ) dilutionseries มาตรฐานสังเคราะห์ที่มีตัวเลขที่รู้จักกันสำเนาถูกใช้ในการวัดปริมาณสำเนาจีโนมในตัวอย่างนั้น เพื่อ confirmintegrity ของแอนติเจน p73 หลังจากการใช้งาน, การเตรียมแอนติเจนได้รับการทดสอบในเชิงพาณิชย์ ELISA แอนติเจน Ingezim PPADAS K2 (INGENASA) ตาม instructions.Moreover ของผู้ผลิตตัวเลขจีโนมสำเนาถูกนำมาเปรียบเทียบก่อนและ afterinactivati​​on.Sera ได้มีการทดสอบการปรากฏตัวของ ASFV p73 - P30 และแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงใช้ INGEZIM PPA COMPAC ELISA (Ingenasa) และ SVANOVIR ASFV-Ab (SVANOVA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อประเมินความสามารถของ neutralizing ซีรั่มที่ได้รับก่อนที่จะท้าทายการติดเชื้อการตรวจการยับยั้งการติดเชื้อ macrophage ได้ดำเนินการพร้อมกับการทดสอบการวางตัวเป็นกลางในหมูป่าถาวรเซลล์ปอด (WSL) ยับยั้ง Hemadsorption และการย้อมสี immunofluorescence อ้อมถูกใช้ asreadout (รายละเอียดวิธีการที่มีอยู่จากผู้เขียนตามคำขอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์ที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้ 10,11 [ ] และใช้ titrations ไวรัสและการทดสอบ hemadsorption . ทั้งสองวิธี ได้ดำเนินการตามขั้นตอนมาตรฐาน [ 12 ] สำหรับปริมาณ PCR แบบเรียลไทม์ ( qpcr ) , ไวรัสดีเอ็นเอโดยใช้ qiaamp ®ดีเอ็นเอมินิชุด ( เพิ่ม ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ต่อมาqpcrwas การปฏิบัติตามโปรโตคอลที่ตีพิมพ์โดยกษัตริย์ et al . [ 13 ] การใช้ไบโอ ราด cfx รอบ ( ห้องปฏิบัติการราดไบโอ ) เป็น dilutionseries ของมาตรฐานสังเคราะห์ด้วยจักคัดลอกหมายเลขถูกใช้เพื่อหาสำเนาพันธุกรรมในตัวอย่างนั้น เพื่อ confirmintegrity ของ p73 เมื่อแอนติเจนหลัง ,การเตรียมอิมทดสอบพาณิชย์แอนติเจน ELISA ingezim ppadas K2 ( ingenasa ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต นอกจากนี้ ตัวเลขการคัดลอกพันธุกรรมเปรียบเทียบก่อนและ afterinactivation .เซรา ทดสอบสถานะของ asfv p73 - p30 แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงโดยใช้ ingezim PPA compac ELISA ( ingenasa ) และ svanovir asfv AB ( svanova ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อประเมินความสามารถของเซร่าได้ว่าก่อนที่จะท้าทายการติดเชื้อแมโครฟาจยับยั้งหรือการติดเชื้อที่เกิดขึ้นพร้อมกับการทดสอบถาวรหมูป่าปอดเซลล์ ( wsl ) การยับยั้ง hemadsorption และทางอ้อมวิธีย้อมที่ใช้ asreadout ( รายละเอียดไม่สมบูรณ์จะพร้อมใช้งานจากผู้เขียนตามคำขอ )