bstractBackgroundSmall diameter cha

bstract

Background

Small diameter characterizes epidermal progenitor/stem cells. We have developed Gravity Assisted Cell Sorting (GACS) to simply enrich small-sized epidermal progenitor/stem cells.

Objective

The cells sorted by GACS were characterized by fluorescence-activated cell sorting analysis, and cultured for up to 7 weeks. The cultured cells were then used for reconstruction of skin equivalent.

Methods

GACS was performed on primary cultures (primary cell) and passage 6–7 cultures (cultured cell) of keratinocytes. A keratinocyte suspension was sized into two groups: cells trapped by a 20 μm filter (trapped cells), and cells flowing through both a 20 and 11 μm filter (non-trapped cells).

Results

In the primary cell groups, viability of the trapped cells was 62.5 ± 7.2% compared to 77.0 ± 3.7% for the non-trapped cells. In the cultured cell groups, viability of the trapped cells was 64.3 ± 14.9%, compared to the non-trapped cells (93.1 ± 2.0%). Flow cytometric analysis showed better discrimination by cell size between trapped and non-trapped cells in culture than in the primary cell suspension. Non-trapped cells contained a larger number of cells with high levels of α6 integrin and low levels of CD71 (α6 integrinbriCD71dim), indicating an enriched progenitor/stem cell population. The difference in these markers between the non-trapped and trapped cells was seen in both the primary and cultured cell groups although this difference was more distinct in cultured cells. Culture of both groups showed that cultures originating from the trapped cells senesced after approximately 15 days while the non-trapped keratinocytes grew for up to 40 days. Manufacture of an epidermis/dermal device (artificial skin) showed that non-trapped cells formed a significantly thicker epithelial layer than the trapped cells, demonstrating the enhanced regenerative capability of the smaller diameter, α6 integrinbriCD71dim cells separated by GACS.

Conclusion

These results indicate that GACS is simple and useful technique to enrich for epidermal progenitor/stem cell populations, and is more efficient when used on cells in culture.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

bstractพื้นหลังขนาดเล็กเส้นผ่านศูนย์กลางระบุลักษณะ progenitor epidermal สเต็มเซลล์ เราได้พัฒนาแรงโน้มถ่วงช่วยเซลล์เรียงลำดับ (GACS) เพียงแค่กายเล็ก epidermal progenitor/สเต็ม เซลล์วัตถุประสงค์เซลล์ที่เรียงลำดับตาม GACS โดยเรียกใช้ fluorescence เซลล์เรียงลำดับวิเคราะห์ และอ่างถึง 7 สัปดาห์ เซลล์ที่อ่างแล้วใช้สำหรับฟื้นฟูผิวเทียบเท่ากับการวิธีการGACS ที่ดำเนินการกับวัฒนธรรมหลัก (เซลล์ปฐมภูมิ) และพาส 6 – 7 วัฒนธรรม (อ่างเซลล์) ของ keratinocytes ระงับ keratinocyte ที่ขนาดเป็น 2 กลุ่ม: เซลล์ที่ติดกับดัก โดยตัวกรอง 20 μm (เซลล์ติดอยู่), และเซลล์ไหลผ่านทั้ง 11 และ 20 μm ตัว (ไม่ใช่ติดเซลล์)ผลลัพธ์ในกลุ่มเซลล์ปฐมภูมิ ชีวิตของเซลล์ติดอยู่ 62.5 ± 7.2% เมื่อเทียบกับ 77.0 ± 3.7% สำหรับเซลล์ไม่ติดกัน ในกลุ่มเซลล์อ่าง ชีวิตของเซลล์ติดอยู่ได้ 64.3 ± 14.9% เมื่อเทียบกับเซลล์ไม่ติด (93.1 ± 2.0%) วิเคราะห์กระแส cytometric แสดงให้เห็นว่าเลือกปฏิบัติดี โดยขนาดของเซลล์ระหว่างเซลล์ติดอยู่ และไม่ติดอยู่ในวัฒนธรรมมากกว่าในการระงับเซลล์ปฐมภูมิ เซลล์ที่ไม่ติดอยู่ใหญ่กว่าจำนวนเซลล์กับ α6 integrin ระดับสูงและระดับต่ำสุดของ CD71 (α6 integrinbriCD71dim), ระบุเป็น progenitor อุดมสเต็มเซลล์ประชากร ได้เห็นความแตกต่างของเครื่องหมายเหล่านี้ระหว่างเซลล์ไม่ติด และติดอยู่ในกลุ่มทั้งสองเซลล์หลัก และอ่างแม้ว่าความแตกต่างนี้มีแตกต่างกันมากขึ้นในเซลล์อ่าง วัฒนธรรมของทั้งสองแสดงให้เห็นว่า วัฒนธรรมเกิดจาก senesced เซลล์ที่ติดอยู่หลังจาก 15 วันขณะที่ keratinocytes ไม่ติดเพิ่มขึ้นถึง 40 วัน ผลิตของอุปกรณ์ประมาณ/หนังกำพร้า (ผิวหนังเทียม) พบว่า เซลล์ที่ไม่ติดรูปแบบมากหนา epithelial ชั้นกว่าติดอยู่เซลล์ เห็นความสามารถขั้นสูงสำหรับของขนาดเล็ก α6 integrinbriCD71dim เซลล์โดย GACSบทสรุปผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า GACS เป็นเทคนิคที่ง่าย และเป็นประโยชน์แก่ประชากร progenitor epidermal สเต็มเซลล์ และจะมีประสิทธิภาพเมื่อใช้กับเซลล์ในวัฒนธรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

bstract พื้นหลังขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางขนาดเล็กลักษณะรากเหง้าผิวหนัง / เซลล์ต้นกำเนิด เราได้มีการพัฒนาของเซลล์ช่วยแรงโน้มถ่วงเรียงลำดับ (GACS) เพียงแค่เสริมสร้างรากเหง้าผิวหนังขนาดเล็ก / เซลล์ต้นกำเนิด. วัตถุประสงค์เซลล์เรียงตาม GACS โดดเด่นด้วยเซลล์เรืองแสงที่ทำงานโดยใช้การวิเคราะห์การเรียงลำดับและการเพาะเลี้ยงนานถึง 7 สัปดาห์ที่ผ่านมา เซลล์เพาะเลี้ยงจากนั้นถูกนำมาใช้สำหรับการฟื้นฟูของผิวเทียบเท่า. วิธีGACS ได้ดำเนินการเกี่ยวกับวัฒนธรรมหลัก (เซลล์หลัก) และ 6-7 ทางวัฒนธรรม (เซลล์เพาะเลี้ยง) ของ keratinocytes ระงับ keratinocyte ถูกขนาดเป็นสองกลุ่มเซลล์ที่ติดอยู่ตามตัวกรองไมครอน 20 (เซลล์ติดอยู่) และเซลล์ที่ไหลผ่านทั้ง 20 และ 11 ไมครอนกรอง (เซลล์ที่ไม่ติดอยู่). ผลในกลุ่มมือถือหลักความมีชีวิตของติดอยู่ เซลล์เป็น 62.5 ± 7.2% เมื่อเทียบกับ 77.0 ± 3.7% สำหรับเซลล์ที่ไม่ติดกับดัก ในกลุ่มเซลล์เพาะเลี้ยงที่มีศักยภาพของเซลล์ที่ติดอยู่เป็น 64.3 ± 14.9% เมื่อเทียบกับเซลล์ที่ไม่ติดกับดัก (93.1 ± 2.0%) การวิเคราะห์การไหลของ cytometric แสดงให้เห็นว่าการเลือกปฏิบัติที่ดีขึ้นโดยขนาดของเซลล์ระหว่างเซลล์ติดและไม่ติดอยู่ในวัฒนธรรมกว่าในการระงับเซลล์หลัก เซลล์ที่ไม่ได้ติดอยู่ที่มีอยู่เป็นจำนวนมากของเซลล์ที่มีระดับสูงของ integrin α6และระดับต่ำของ CD71 (α6 integrinbriCD71dim) แสดงให้เห็นรากเหง้าอุดม / ต้นกำเนิดประชากรเซลล์ ความแตกต่างในเครื่องหมายเหล่านี้ระหว่างเซลล์ที่ไม่ติดกับดักและถูกขังอยู่ก็เห็นทั้งในกลุ่มเซลล์เพาะเลี้ยงระดับประถมศึกษาและแม้ว่าความแตกต่างนี้ได้มากขึ้นที่แตกต่างกันในเซลล์เพาะเลี้ยง วัฒนธรรมของทั้งสองกลุ่มพบว่าวัฒนธรรมที่เกิดจากเซลล์ที่ติดอยู่ senesced หลังจากนั้นประมาณ 15 วันในขณะที่ keratinocytes ที่ไม่ติดกับดักเติบโตได้ถึง 40 วัน การผลิตหนังกำพร้า / อุปกรณ์ผิวหนัง (ผิวหนังเทียม) แสดงให้เห็นว่าเซลล์ที่ไม่ติดกับดักที่เกิดขึ้นในชั้นเยื่อบุผิวหนากว่าเซลล์ติดอยู่แสดงให้เห็นถึงความสามารถในการปฏิรูปการเพิ่มขึ้นของขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางขนาดเล็กα6เซลล์ integrinbriCD71dim แยกจากกันโดย GACS. สรุปผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า GACS เป็นวิธีที่ง่ายและมีประโยชน์ในการเสริมสร้างรากเหง้าสำหรับผิวหนัง / ต้นกำเนิดประชากรมือถือและมีประสิทธิภาพมากขึ้นเมื่อใช้กับเซลล์ในวัฒนธรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นหลัง bstract



เล็กเส้นผ่าศูนย์กลาง characterizes epidermal ต้นตระกูล / สเต็มเซลล์ . เราได้พัฒนาแรงโน้มถ่วงช่วยเซลล์เรียง ( gacs ) เพียงแค่เพิ่มสเต็มเซลล์ epidermal ต้นตระกูล / เล็ก



มีเซลล์เรียงโดย gacs ถูก characterized โดยการกระตุ้นเซลล์การวิเคราะห์ และเพาะเลี้ยงนานถึง 7 สัปดาห์เซลล์เพาะเลี้ยงแล้วใช้เพื่อการฟื้นฟูของเทียบเท่าผิว



gacs วิธีการคือใช้หลักวัฒนธรรม ( เซลล์ปฐมภูมิและทางเดิน 6 – 7 วัฒนธรรม ( เพาะเลี้ยงเซลล์คีราติโนไซต์ ) . มีเคราติโนไซต์ถูกระงับขนาดออกเป็น 2 กลุ่ม คือ เซลล์ที่ติดอยู่ โดย 20 μ M กรอง ( ติดเซลล์ ) และเซลล์ไหลผ่านทั้ง 20 11 μ M กรอง ( ไม่ติดเซลล์ผล



)ในกลุ่มเซลล์หลักความมีชีวิตของติดเซลล์คือ 62.5 ± 7.2% เมื่อเทียบกับต่างประเทศ± 3.7 % ไม่ติดเซลล์ ในกลุ่มเซลล์เพาะเลี้ยงสามารถติดเซลล์คืองาน± 14.9% เมื่อเทียบกับไม่ติดเซลล์ ( 93.1 ± 2.0% )การวิเคราะห์ลักษณะการไหลแสดงดีกว่าแบ่งแยกโดยเซลล์ขนาดระหว่างติดและไม่ติดเซลล์ในวัฒนธรรมกว่าในเซลล์ปฐมภูมิระงับ ไม่ติดเซลล์มีขนาดใหญ่จำนวนของเซลล์ที่มีระดับสูงของα 6 อินทีกรินและระดับต่ำของ cd71 ( α 6 integrinbricd71dim ) แสดงว่ามีอุดมต้นตระกูล / ประชากรสเต็มเซลล์ความแตกต่างระหว่างเครื่องหมายเหล่านี้ไม่ติด และติดเซลล์ที่เห็นทั้งในระดับประถมศึกษาและเพาะเลี้ยงเซลล์กลุ่มแม้ว่าความแตกต่างนี้แตกต่างกันมากในการเพาะเลี้ยงเซลล์ วัฒนธรรมของทั้งสองกลุ่ม พบว่า วัฒนธรรมที่มาจากเซลล์ที่ติดอยู่ senesced หลังจากประมาณ 15 วันในขณะที่ไม่ติดคีราติโนไซต์เติบโตถึง 40 วันผลิตของผิวหนัง / ผิวหนังอุปกรณ์ ( หนังเทียม ) พบว่าไม่ติดเซลล์เกิดขึ้นอย่างหนาเยื่อบุชั้นกว่าติดเซลล์ แสดงให้เห็นถึงการปรับปรุงเปลี่ยนแปลงความสามารถของขนาดเล็กเส้นผ่าศูนย์กลางα 6 integrinbricd71dim เซลล์แยกออกจากกันโดย gacs .



สรุปผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า gacs เป็นเรื่องง่ายและมีประโยชน์สำหรับเทคนิคเพื่อเพิ่ม epidermal ต้นตระกูล / ก้านประชากรเซลล์ และมีประสิทธิภาพมากขึ้นเมื่อใช้ในเซลล์ในวัฒนธรรม