E. coli from an overnight culture on Nutrient Agar plates were
resuspended in Ringer’s solution to a turbidity of McFarland
0.5 and from this suspension serially diluted 1/10 in Ringer’s
solution. The MUG substrate from the FluorAce kit (Bio-Rad,
Hemel Hempstead, UK) was prepared as described in the
manual and dispensed into black 96-well plates (Greiner Bio-
One, Frickenhausen, Germany). The E. coli dilutions were
assayed with the MUG substrate. The commercially available
miniaturised method, FluorAce kit, for the quantification of b-
D-glucuronidase activity, was modified as described by Garcia-
Armisen et al. (2005). The plates were freeze dried over night,
sealed and stored at 20 C until use. E. coli suspensions
(100 ml) and controls (b-D-glucuronidase from kit, Ringer’s)
were added to the freeze dried MUG substrate and plates
incubated for 24 h at 37 C. Stopping Buffer (100 ml) was added
and the fluorescence measured with a FLUOstar OPTIMA plate
reader (BMG Labtech, Offenburg, Germany)
เชื้อ E. coli จากวัฒนธรรมค้างคืนบนแผ่นธาตุอาหารวุ้นถูก
resuspended ในการแก้ปัญหา Ringer เพื่อความขุ่นของ McFarland
0.5 และจากการระงับนี้ลำดับเจือจาง 1/10 ใน Ringer
ของการแก้ปัญหา พื้นผิวแก้วจากชุด FluorAce (Bio-Rad,
Hemel Hempstead สหราชอาณาจักร)
ถูกจัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ในคู่มือและจ่ายเป็นสีดำแผ่น96 หลุม (Greiner Bio-
หนึ่ง Frickenhausen, เยอรมนี) อีโคไลที่ถูกเจือจาง
assayed ที่มีพื้นผิวแก้ว ที่มีอยู่ในเชิงพาณิชย์วิธีการขนาดเล็กชุด FluorAce สำหรับปริมาณ B- กิจกรรม D-glucuronidase ก็แก้ไขตามที่อธิบาย Garcia- Armisen et al, (2005) แผ่นถูกแช่แข็งแห้งข้ามคืน, ปิดผนึกและเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสจนการใช้งาน E. coli สารแขวนลอย(100 มล.) และการควบคุม (BD-glucuronidase จากชุด, ริงเกอร์) ที่ถูกเพิ่มเข้าแช่แข็งแห้งพื้นผิวแก้วและจานบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หยุดบัฟเฟอร์ (100 มล.) ถูกบันทึกและเรืองแสงที่วัดได้กับแผ่นOPTIMA FLUOstar อ่าน (BMG Labtech, Offenburg, เยอรมนี)
การแปล กรุณารอสักครู่..
