5.5. Assay of plasma membrane integ

5.5. Assay of plasma membrane integrity
Mycelia from 2-d-old cultures of S. sclerotiorum grown in
PDB were collected, washed and dehydrated on filter paper.
The obtained mycelia were then transferred into conical
flasks (250 mL) containing 50 mL of sterile water (control)
or 1% chitosan (pH 5.0), and incubated at 180 r min–1 at
25°C for 20, 40 and 60 min. The mycelia were collected on
filter paper, and rinsed with 50 mmol L–1 sodium phosphate
buffer (pH 7.0) twice to remove residual medium. Fresh
mycelia were stained with 10 μg mL–1 propidium iodide
(PI) for 5 min at 30°C (Liu et al. 2007). Mycelia were
then collected and washed twice with the buffer to remove
residual dye. The mycelia were observed with a Zeiss
Axioskop 40 microscope (Carl Zeiss, Germany) equipped with an individual fluorescein rhodamine filter set (Zeiss No.
15: excitation BP 546/12 nm, emission LP 590 nm). Three
fields of view from each cover slip were chosen randomly,
and the experiment was repeated twice.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5.5. การทดสอบความสมบูรณ์ของเยื่อMycelia จากวัฒนธรรมเก่า 2 d ของ S. sclerotiorum ปลูกในPDB ที่เก็บ ล้าง และอบแห้งบนกระดาษกรองMycelia ได้รับแล้วถ่ายโอนเข้าไปในกรวยขวด (250 มล.) ที่ประกอบด้วยขนาดบรรจุ 50 mL ของน้ำผ่านการฆ่าเชื้อ (การควบคุม)หรือไคโตซาน 1% (ค่า pH 5.0), และได้รับการกก 180 r นาที – 1 ที่25° C 20, 40 และ 60 นาที Mycelia ถูกจัดเก็บในกรองกระดาษ และกลั้ว ด้วย 50 mmol L-1 โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) สองครั้งเพื่อเอาออกเหลือปานกลาง สดใหม่mycelia ถูกย้อม ด้วยไอโอไดด์ propidium มล. – 1 ไมโครกรัม 10(ผี) 5 นาทีที่ 30° C (Liu et al. 2007) มี myceliaแล้วเก็บ และล้าง ด้วยบัฟเฟอร์การเอาสองครั้งการย้อมสีที่ตกค้าง ข้อสังเกตการ mycelia กับ ZeissAxioskop 40 กล้องจุลทรรศน์ (Carl Zeiss เยอรมนี) พร้อมกับชุดการกรอง rhodamine ละ fluorescein (หมายเลข Zeiss15: รุ่น BP 546/12 nm ปล่อย LP 590 nm) สามของมุมมองจากบันทึกการจัดส่งในแต่ละฝาถูกเลือกแบบสุ่มและการทดลองซ้ำครั้งสองครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5.5 การทดสอบความสมบูรณ์ของพลาสมาเมมเบรน
Mycelia จาก 2-D-เก่าวัฒนธรรมของเอส sclerotiorum ปลูกใน
PDB ได้เก็บล้างและแห้งบนกระดาษกรอง.
เส้นใยที่ได้มาจากนั้นก็ย้ายเข้าไปในกรวย
ขวด (250 มิลลิลิตร) มี 50 มิลลิลิตรของน้ำหมัน ( Control)
หรือ 1% ไคโตซาน (pH 5.0) และบ่มที่ 180 R-1 นาทีที่
อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20, 40 และ 60 นาที เส้นใยที่ถูกเก็บบน
กระดาษกรองและล้างด้วย 50 มิลลิโมล L-1 โซเดียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) สองครั้งเพื่อเอากลางที่เหลือ สด
เส้นใยถูกย้อมด้วยสี 10 ไมโครกรัม ML-1 propidium ไอโอไดด์
(PI) เป็นเวลา 5 นาทีที่ 30 ° C (Liu et al. 2007) เส้นใยที่ถูก
เก็บรวบรวมแล้วสองครั้งและล้างด้วยบัฟเฟอร์ที่จะเอา
สีย้อมที่เหลือ เส้นใยถูกตั้งข้อสังเกตกับ Zeiss
Axioskop 40 กล้องจุลทรรศน์ (Carl Zeiss, เยอรมนี) พร้อมกับ fluorescein ชุดกรอง rhodamine บุคคล (ฉบับที่ Zeiss
15: กระตุ้นความดันโลหิต 546/12 นาโนเมตรปล่อยก๊าซ LP 590 นาโนเมตร) สาม
ด้านของมุมมองจากแต่ละฝาครอบใบถูกสุ่มเลือก
และการทดสอบซ้ำเป็นครั้งที่สอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5.5 . การทดสอบความสมบูรณ์ของพลาสมาเมมเบรนเส้นใยจากวัฒนธรรม 2-d-old S . sclerotiorum ปลูกในการเก็บรวบรวม PDB , ล้างและแห้งบนกระดาษกรองนำเส้นใยแล้วโอนลงในจานขวด ( 250 มิลลิลิตร ) ผสม 50 มิลลิลิตร น้ำหมัน ( ควบคุม )หรือไคโตซาน 1% ( pH 5.0 ) , และบ่มที่อุณหภูมิ 180 R นาที– 1 ที่25 ° C เป็นเวลา 20 , 40 และ 60 นาทีแต่ละครั้งนี้กระดาษกรอง และล้างด้วย 50 mmol l ( 1 โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) สองครั้งเพื่อเอาอาหารที่เหลือ สดเส้นใยย้อมสีด้วย 10 μกรัมมิลลิลิตร– 1 propidium ไอโอไดด์( PI ) สำหรับ 5 นาทีที่ 30 ° C ( Liu et al . 2007 ) เส้นใยแล้วเก็บและล้าง 2 ครั้งกับบัฟเฟอร์เพื่อลบสีที่เหลือ เส้นใยที่พบกับ Zeissaxioskop 40 กล้องจุลทรรศน์ ( Carl Zeiss , เยอรมนี ) พร้อมกับบุคคลี่จากกรองชุด ( Zeiss ครับ15 : 12 และ BP 546 / nm ปล่อยแผ่นเสียง 590 nm ) สามเขตของมุมมองจากแต่ละปกใบถูกเลือกแบบสุ่มและทำการทดลองซ้ำ 2 ครั้ง