2. Materials and methods2.1. Virus

2. Materials and methods
2.1. Virus and cells
The cytopathogenic HM-175 strain of HAV (ATCC VR-1402) was
propagated and assayed in confluent FRhK-4 cells (courtesy of Prof.
Albert Bosch, University of Barcelona). Semi-purified stocks were obtained
from infected FRhK-4 cells by three freeze–thaw cycles after
8–11 days post-infection. Cell debris was pelleted at 660 ×g for
30 min. Infectious viruses were quantified by determining the 50% tissue
culture infectious dose (TCID50) with eight wells per dilution and
20 μl of inoculum per well (Pintó et al., 1994).
2.2. Reagents
Viability dyes, propidium monoazide (PMA) and ethidium
monoazide (EMA), were purchased from Geniul (Spain). Both reagents
were dissolved in 20% dimethylsulfoxide (DMSO) at 2 mM and stored at

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. ไวรัสและเซลล์ไม่ต้องใช้ HM-175 cytopathogenic ของ HAV (ATCC VR-1402)propagated assayed ใน confluent FRhK-4 เซลล์ และ (เอื้อเฟื้อศาสตราจารย์อัลเบิร์ Bosch มหาวิทยาลัยบาร์เซโลนา) รับหุ้นกึ่งบริสุทธิ์จากการติดเชื้อ FRhK-4 เซลล์ โดยสามหยุด – ทรานรอบหลังการติดเชื้อหลังวันที่ 8 – 11 เศษเซลล์ถูกสัตว์ที่ 660 × g สำหรับ30 นาทีไวรัสติดเชื้อถูกวัด โดยกำหนด 50% ในเนื้อเยื่อวัฒนธรรมยาติดเชื้อ (TCID50) กับบ่อแปดต่อเจือจาง และΜl 20 ของ inoculum ต่อด้วย (Pintó et al. 1994)2.2. สารชีวิตสี propidium monoazide (PMA) และ ethidiummonoazide (EMA), ซื้อมาจาก Geniul (สเปน) สารทั้งสองละลายใน 20% dimethylsulfoxide (DMSO) 2 มม. และเก็บไว้ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ไวรัสและเซลล์
cytopathogenic ความเครียด HM-175 ของ HAV (ATCC VR-1402) ได้รับการ
แพร่กระจายและไหลมารวมกันใน assayed FRhK-4 เซลล์ (มารยาทของศ.
อัลเบิร์บ๊อชมหาวิทยาลัยบาร์เซโลนา) หุ้นกึ่งบริสุทธิ์ที่ได้รับ
จากการติดเชื้อ FRhK-4 เซลล์โดยสามรอบแช่แข็งละลายหลังจาก
8-11 วันหลังการติดเชื้อ เศษเซลล์เม็ดที่ 660 ×กรัมสำหรับ
30 นาที ไวรัสติดเชื้อถูกวัดโดยกำหนด 50% เนื้อเยื่อ
วัฒนธรรมติดเชื้อยา (TCID50) กับแปดหลุมต่อการเจือจางและ
20 ไมโครลิตรของเชื้อต่อกัน (Pinto et al., 1994).
2.2 รีเอเจนต์
สีย้อมศักยภาพ propidium monoazide (PMA) และ ethidium
monoazide (EMA) ที่ซื้อมาจาก Geniul (สเปน) ทั้งน้ำยา
ละลายใน Dimethylsulfoxide 20% (DMSO) ที่ 2 mm และเก็บไว้ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . ไวรัสและเซลล์การ cytopathogenic hm-175 เมื่อย hav ( ATCC vr-1402 ) คือทำให้เอนไซม์ในเซลล์และกระจู๋กระจี๋ frhk-4 ( มารยาทของลเบิร์ต บอช มหาวิทยาลัยบาร์เซโลนา ) หุ้นที่ได้รับกึ่งบริสุทธิ์จาก frhk-4 เซลล์ติดเชื้อโดยสามรอบละลายหลังแช่แข็งจำกัด8 – 11 วันหลังการติดเชื้อ เศษเซลล์เป็นเม็ดที่ 660 × G สำหรับ30 นาที โรคติดเชื้อไวรัส quantified โดยกำหนดร้อยละ 50 ของเนื้อเยื่อวัฒนธรรมติดเชื้อ dose ( tcid50 ) กับแปดต่อการเจือจางและเวลส์20 μ L ของเชื้อต่อ ( ไพน์ó et al . , 1994 )2.2 . สารเคมี3 สี , propidium monoazide ( PMA ) และคู่monoazide ( EMA ) ซื้อมาจาก geniul ( สเปน ) ทั้งสองสารเคมีละลายใน 20 % ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ ( DMSO ) ที่ 2 มม. และเก็บไว้ที่