Clavulina amazonensis TH8742 JN2282

Clavulina amazonensis TH8742 JN228249 Guyana

Clavulina rosiramea TH8954 JQ677048 Guyana

Clavulina cirrhata TH8940 JQ677046 Guyana

Clavulina guyanensis TH9245 JQ677049 Guyana

TH9194 JQ677047 Guyana

basidiospores (Thacker & Henkel 2004;Henkel et al.2005;Uehling

et al. 2012). Molecular systematics studies have confirmed the

monophyly of Clavulina within the Cantharellales, and sup-
ported the placement of morphologically diverse taxa in the ge-
nus (Thacker & Henkel 2004; Moncalvo et al. 2006; Uehling et al.

2012). Recent sporocarp collecting efforts and belowground mo-
lecular studies suggest that Clavulina is most diverse in the

tropics (e.g. Tedersoo et al. 2003, 2007, 2008; Moyersoen 2006;

Peay et al. 2010; Smith et al. 2011; Henkel et al. 2012).

In the central Guiana Shield region of South America some

forests are dominated by ECM trees in the genera Dicymbe (Faba-
ceae subfam. Caesalpinioideae), Aldina (Fabaceae subfam. Papil-
ionoideae) or Pakaraimaea (Dipterocarpaceae subfam.

Pakaraimoideae) (Singer et al. 1983; Moyersoen 2006; Degagne

et al. 2009; Smith et al. 2011). In the Upper Potaro Basin of Guyana

ECM fungi have been collected in Dicymbe forests over the past

14 y, and w20 of the 174 known species belong to Clavulina

(Henkel et al. 2012). As part of our ongoing effort to document

the Guyanese Clavulina assemblage we here describe three new

species and a new distribution record for Clavulina cirrhata

(Berk.) Corner, a taxon previously known from a single 1856 col-
lection from the northern Brazilian Amazon (Thacker & Henkel

2004;Henkel et al. 2005,2011;Uehling et al. 2012).We providemor-
phological, DNA sequence, habitat, and fruiting occurrence data

for each species. The new species conform to an expanded

Materials and methods

Collections

Most collections were made during the MayeJul. and Dec.eJan.

rainy seasons of 2000e2003 and 2008e2010 from Guyana’s Up-
per Potaro River Basin, within a 10 km radius of a permanent

base camp at 5180

weremade in Jun.eJul. 2011 from the Upper Demerara River Ba-
sin at the Mabura Ecological Reserve within a 5 km radius of

a base camp at 5090

collected from forests dominated by the ECM canopy trees

Dicymbe corymbosa and/or Dicymbe altsonii. Macroscopic fea-
tures of basidiomata were described fresh in the field. Colours

were described subjectively and coded according to Kornerup

& Wanscher (1978), with colour plates noted in parentheses

(e.g. 3C3). Fungi were dried in the field with silica gel.

Micromorphology

Micromorphological features of fresh specimens were exam-
ined with an EPOI field microscope with light optics; dried spec-
imens were examined with an Olympus BX51 microscope with

light and phase contrast optics. For basidiospores, basidia, ste-
rigmata, and hyphal features, rehydrated fungal tissue was

mounted in water, 3 % potassium hydroxide (KOH), or Melzer’s

solution and at least 20 individual structures were measured.

Line drawings were made using tracing paper with digital pho-
tomicrographs, and edited with Photoshop CS5 (Adobe, San

Jose, CA, USA). Specimens of all four species were deposited in

each the following herbaria (Holmgren et al. 1990): BRG e

Uehling et al.: neotropical Clavulina species 1265

University of Guyana, HSU e Humboldt State University, PUL e

Purdue University, and NY e New York Botanical Garden, with

the destination of specific numbered collections noted in the

‘Specimens Examined’ sections for each species.

DNA extraction, polymerase chain reactions (PCR),

DNA extractions were performed on dried basidioma tissue for

each species reported here. Tissues were homogenized with

sterile forceps or a micropestle, and DNA was extracted with

the DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). The

ITS1-5.8s-ITS2 (ITS) and partial large subunit (28S) of the ribo-
somal DNA were amplified with the forward primers ITS1F

and LROR and the reverse primers ITS4B, LR3, LR5F in various

combinations with protocols of Vilgalys & Hester (1990),

Gardes & Bruns (1993) and Tedersoo et al. (2008). The second

largest subunit of DNA-dependant RNA polymerase II (rpb2)

gene was successfully amplified from Clavulina specimens us-
ing the protocols of Uehling et al. (2012). PCR products were

viewed on 1.5 % agarose gels stained with SYBR Green I (Molec-
ular Probes, Eugene, Oregon, USA). Amplicons were cleaned

with Exonuclease I and shrimp alkaline phosphatase (Glenn

& Schable 2005) and sequenced with Big Dye 3.1 (Applied Bio-
systems, Foster City, CA, USA) with the same primers used

for amplification. Sequencing reactions were cleaned and pro-
cessed on an ABI 3730xl genetic analyzer (Applied Biosystems,

Foster City, CA, USA) at the Duke University Genome Sequenc-
ing & Analysis Core Facility. Newly generated sequences were

edited in Sequencher v.4.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Clavulina amazonensis TH8742 JN228249 กายอานาClavulina rosiramea TH8954 JQ677048 กายอานาClavulina cirrhata TH8940 JQ677046 กายอานาClavulina guyanensis TH9245 JQ677049 กายอานาTH9194 กายอานา JQ677047basidiospores (Thacker & เฮงเค็ล 2004 เฮงเค็ล et al.2005 Uehlinget al. 2012) การศึกษาอนุกรมวิธานของโมเลกุลจะยืนยันการmonophyly ของ Clavulina ภายใน Cantharellales และหนะการวางตำแหน่งของ morphologically หลากหลายใน ge - portednus (Thacker & เฮงเค็ล 2004 Moncalvo et al. 2006 Uehling et al2012) . ล่า sporocarp รวบรวมความพยายามและ mo belowground -lecular ศึกษาแนะนำว่า Clavulina มีความหลากหลายมากที่สุดในการเขตร้อน (เช่น Tedersoo et al. 2003, 2007, 2008 Moyersoen 2006Peay et al. 2010 Smith et al. 2011 เฮงเค็ล et al. 2012)ในกิอานากลางโล่ภูมิภาคของทวีปอเมริกาใต้บางป่าถูกครอบงำ โดย ECM ต้นไม้ในสกุล Dicymbe (Faba-ceae subfam วงศ์ย่อยราชพฤกษ์), Aldina (ซี้อี้ subfam Papil-ionoideae) หรือ Pakaraimaea (วงศ์ยางนา subfamPakaraimoideae) (นักร้อง et al. 1983 Moyersoen 2006 Degagneet al. 2009 Smith et al. 2011) ในอ่างบน Potaro ของกายอานาECM เชื้อสะสมไว้ใน Dicymbe ป่าผ่านมา14 y และ w20 รู้จักพันธุ์ 174 เป็น Clavulina(เฮงเค็ล et al. 2012) เป็นส่วนหนึ่งของความพยายามอย่างต่อเนื่องกับเอกสารassemblage ชาว Clavulina ที่เรานี่อธิบายสามใหม่สายพันธุ์และบันทึกการแจกจ่ายใหม่สำหรับ Clavulina cirrhata(หญิง) มุม มันเป็นที่รู้จักกันก่อนหน้านี้ จาก 1856 คอลัมน์แบบเดี่ยวคำจากอเมซอนบราซิลเหนือ (Thacker & เฮงเค็ล2004 เฮงเค็ล et al. 2005,2011 Uehling et al. 2012) เรา providemor -phological ลำดับดีเอ็นเอ อยู่อาศัย และข้อมูลปรากฏผลสำหรับแต่ละสายพันธุ์ สายพันธุ์ใหม่ให้สอดคล้องกับการขยายวัสดุและวิธีการคอลเลกชันคอลเลกชันส่วนใหญ่ทำในระหว่างการ MayeJul และ Dec.eJanฤดูฝนของ 2000e2003 และ 2008e2010 จากขึ้นของกายอานา-ต่อ Potaro ลุ่มน้ำ ภายในรัศมี 10 กิโลเมตรของถาวรค่ายฐานที่ 5180weremade ใน Jun.eJul จากแม่น้ำบน Demerara Ba - 2011บาปที่ Mabura นิเวศวิทยาสำรองภายในรัศมี 5 กิโลเมตรค่ายฐานที่ 5090รวบรวมจากครอบงำ โดย ECM หลังคาต้นไม้ป่าDicymbe corymbosa หรือ Dicymbe altsonii ด้วยตาเปล่า fea-tures ของ basidiomata ได้อธิบายใหม่ในฟิลด์ สีอธิบายการกระทำ และตายตาม Kornerupและ Wanscher (1978), กับแผ่นสีที่ระบุไว้ในวงเล็บ(เช่น 3C 3) เชื้อราถูกอบแห้งในฟิลด์ด้วยซิลิกาเจลMicromorphologyคุณสมบัติ Micromorphological ของสดอย่างถูกสอบ-ined ด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟิลด์ EPOI กับเลนส์แสง อบแห้งข้อมูลจำเพาะ-imens ถูกตรวจสอบ ด้วยกล้องจุลทรรศน์ Olympus BX51 ด้วยเลนส์คมชัดแสงและระยะ สำหรับ basidiospores, basidia, ste-rigmata และคุณลักษณะ hyphal, rehydrated ราถูกเนื้อเยื่อติดน้ำ 3% โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ (เกาะ), หรือของ Melzerมีวัดน้อย 20 แต่ละโครงสร้างและการแก้ไขปัญหาภาพวาดเส้นทำด้วยติดตามกระดาษดิจิตอลโพธิ์-tomicrographs และแก้ไข ด้วย Photoshop CS5 (Adobe ซานJose, CA, USA) เข้าทดสอบของทั้งสี่สายพันธุ์แต่ละอื่นต่อ (Holmgren et al. 1990): e ทUehling et al.: พันธุ์ Clavulina neotropical 1265มหาวิทยาลัยของประเทศกายอานา ซูอีฮุมมหาวิทยาลัย PUL eมหาวิทยาลัยเพอร์ดู และสวนพฤกษศาสตร์ที่นิวยอร์ก NY e ด้วยปลายทางของคอลเลกชันเลขเฉพาะที่ระบุไว้ในการส่วน 'ตัวอย่าง Examined' สำหรับแต่ละสายพันธุ์สกัดดีเอ็นเอ ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR),ดำเนินการสกัดดีเอ็นเอเนื้อเยื่อแห้ง basidioma สำหรับรายงานแต่ละสายพันธุ์ที่นี่ เนื้อเยื่อถูก homogenized ด้วยคีมเป็นหมัน หรือเป็น micropestle และดีเอ็นเอที่ถูกแยกด้วยชุดมินิโรงงาน DNeasy (Qiagen วาเลนเซีย CA, USA) การITS1-5.8s-ITS2 (ของ) และบางส่วนของ ribo ใหญ่ย่อย (28S)ถูกขยาย somal ดีเอ็นเอ ด้วยไพรเมอร์ไปข้างหน้า ITS1Fและ LROR และการย้อนกลับไพรเมอร์ ITS4B, LR3, LR5F ในต่าง ๆรวมกับโพรโทคอของ Vilgalys & Hester (1990),Gardes & บรันซ์ (1993) และ Tedersoo et al. (2008) ครั้งที่สองย่อยที่ใหญ่ที่สุดของขึ้นกับดีเอ็นเออาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส II (rpb2)ยีนคือสำเร็จขยายจากตัวอย่าง Clavulina เรา-ing โพรโทคอของ Uehling et al. (2012) ผลิตภัณฑ์ PCRดูบน 1.5% agarose เจเลอะ SYBR Green I (Molec-ular หัว ยูจีน โอเรกอน สหรัฐอเมริกา) ห้อง Ampliconsมี Exonuclease ฉัน และกุ้งด่าง phosphatase (Glenn& Schable 2005) และตามลำดับ ด้วยใหญ่ย้อม 3.1 (ใช้ไบโอ--ระบบ เมืองฟอสเตอร์ CA, USA) ด้วยไพรเมอร์ที่เดียวที่ใช้สำหรับขยาย ลำดับปฏิกิริยาถูกทำความสะอาด และ pro-cessed บนการ ABI 3730xl พันธุกรรมวิเคราะห์ (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพฟอสเตอร์ซิตี้ CA, USA) ในกลุ่มมหาวิทยาลัย Duke Sequenc -ing และวิเคราะห์สินเชื่อหลัก ลำดับที่สร้างขึ้นใหม่ได้แก้ไขใน Sequencher v.4

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Clavulina amazonensis TH8742 JN228249 กายอานาClavulina rosiramea TH8954 JQ677048 กายอานาClavulina cirrhata TH8940 JQ677046 กายอานาClavulina guyanensis TH9245 JQ677049 กายอานาTH9194 JQ677047 กายอานาbasidiospores (แท้กเกอร์ & เฮงเค็ล 2004 เฮงเค็ล et al.2005; Uehling . et al, 2012) การศึกษาระบบโมเลกุลได้รับการยืนยันmonophyly ของ Clavulina ภายใน Cantharellales และสนับสนุนรังเพลิงตำแหน่งของแท็กซ่าที่มีความหลากหลายของสัณฐานวิทยาในจีNUS (แท้กเกอร์ & เฮงเค็ล 2004 Moncalvo et al, 2006. Uehling et al. 2012) sporocarp การเก็บรวบรวมความพยายามที่ผ่านมาและ belowground mo- การศึกษาชี้ให้เห็นว่า lecular Clavulina มีความหลากหลายมากที่สุดในเขตร้อน (เช่น Tedersoo et al, 2003, 2007, 2008. Moyersoen 2006 . Peay et al, 2010 สมิ ธ et al, 2011. เฮงเค็ล et al, 2012). ในภาคกลางกิอานาโล่ของทวีปอเมริกาใต้บางป่าถูกครอบงำด้วยต้นไม้ ECM ในจำพวก Dicymbe นี้ (Faba- ceae subfam. Caesalpinioideae) Aldina (ซี้อี้ subfam. Papil- ionoideae) หรือ Pakaraimaea (วงศ์ยางนา subfam. Pakaraimoideae) ( นักร้อง et al, 1983;. Moyersoen 2006 Degagne et al, 2009;.. สมิ ธ et al, 2011) ในสังคม Potaro ลุ่มน้ำของประเทศกายอานาเชื้อรา ECM ได้รับการเก็บในป่า Dicymbe ที่ผ่านมา14 ปีและ W20 ของ 174 สปีชีส์ที่รู้จักกันเป็น Clavulina (เฮงเค็ล et al. 2012) ในฐานะที่เป็นส่วนหนึ่งของความพยายามอย่างต่อเนื่องของเราในการจัดทำเอกสารการชุมนุมกายอานา Clavulina เราที่นี่อธิบายใหม่สามสายพันธุ์และบันทึกการจัดจำหน่ายใหม่สำหรับ Clavulina cirrhata (Berk.) เปิดเตะมุม, แท็กซอนที่รู้จักกันก่อนหน้านี้จากเดียว 1856 จะเก็บรวบรวมLection จากบราซิล Amazon ภาคเหนือ (แท้กเกอร์ & เฮงเค็ล2004. เฮงเค็ล et al, 2005,2011; Uehling et al, 2012) เรา providemor-. phological ลำดับดีเอ็นเอที่อยู่อาศัยและติดผลเกิดข้อมูลสำหรับแต่ละสายพันธุ์ สายพันธุ์ใหม่ให้สอดคล้องกับการขยายวัสดุและวิธีการของสะสมคอลเลกชันส่วนใหญ่ที่ถูกสร้างขึ้นในช่วง MayeJul และ Dec.eJan. ฤดูฝนของ 2000e2003 และ 2008e2010 จากกายอานาของขึ้นต่อ Potaro ลุ่มน้ำภายใน 10 กมรัศมีถาวรค่ายที่ 5180 weremade ใน Jun.eJul 2011 จากด้านบน Demerara แม่น้ำ Ba- บาปที่ Mabura นิเวศวิทยาสำรองภายในรัศมี 5 กิโลเมตรของค่ายที่ 5090 ที่เก็บมาจากป่าที่โดดเด่นด้วยต้นไม้ ECM หลังคาDicymbe corymbosa และ / หรือ Dicymbe altsonii fea- เปล่าตูเรสของ basidiomata ถูกอธิบายสดในสนาม สีถูกอธิบายจิตใจและรหัสตาม Kornerup & Wanscher (1978) ด้วยแผ่นสีที่ระบุไว้ในวงเล็บ(เช่น 3C3) เชื้อราแห้งในเขตที่มีซิลิกาเจล. Micromorphology คุณสมบัติจุลสัณฐานวิทยาของตัวอย่างสดถูก exam- วาดภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟิลด์ EPOI กับเลนส์แสง; แห้ง spec- imens ถูกตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์โอลิมปั BX51 กับแสงและเฟสเลนส์คมชัด สำหรับ basidiospores, basidia, ste- rigmata และคุณสมบัติเส้นใย, rehydrated เนื้อเยื่อเชื้อราได้รับการติดตั้งในน้ำ, 3% โพแทสเซียมไฮดรอกไซ (เกาะ) หรือ Melzer ของการแก้ปัญหาและอย่างน้อย 20 โครงสร้างแต่ละวัด. ภาพวาดลายเส้นที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้กระดาษลอกลายพร้อมดิจิตอล pho- tomicrographs และแก้ไขด้วย Photoshop CS5 (Adobe, San Jose, CA, USA) ตัวอย่างของทั้งสี่สายพันธุ์ที่ได้รับการฝากในแต่ละ herbaria ต่อไปนี้ (ฮัวเกรน et al, 1990.) BRG E Uehling et al .: Neotropical Clavulina สายพันธุ์ 1265 มหาวิทยาลัยกายอานา HSU E Humboldt State University, PUL E มหาวิทยาลัย Purdue และนิวยอร์ก E ใหม่ สวนพฤกษศาสตร์นิวยอร์กกับปลายทางของคอลเลกชันเลขที่เฉพาะเจาะจงที่ระบุไว้ใน'ตัวอย่างการตรวจสอบ' ส่วนสำหรับแต่ละชนิด. สกัดดีเอ็นเอปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR) สกัดดีเอ็นเอได้ดำเนินการในเนื้อเยื่อ basidioma แห้งสำหรับแต่ละชนิดการรายงานที่นี่ เนื้อเยื่อถูกปั่นด้วยคีมหมันหรือ micropestle และดีเอ็นเอถูกสกัดด้วยชุด DNeasy โรงงานขนาดเล็ก (Qiagen, วาเลนเซีย, CA, USA) ITS1-5.8s-ITS2 (ITS) และบางส่วน subunit ขนาดใหญ่ (28S) ของ ribo- Somal ดีเอ็นเอถูกขยายด้วยไพรเมอร์ไปข้างหน้า ITS1F และ LROR และไพรเมอร์กลับ ITS4B, LR3, LR5F ในหลาย ๆ ด้านรวมกันกับโปรโตคอลของ Vilgalys และเฮสเตอร์ (1990), Gardes & Bruns (1993) และ Tedersoo et al, (2008) ที่สองหน่วยย่อยที่ใหญ่ที่สุดของดีเอ็นเอขึ้นอยู่กับอาร์เอ็นเอ ii โพลิเมอร์ (rpb2) ยีนถูกขยายประสบความสำเร็จจากตัวอย่าง Clavulina US- ing โปรโตคอลของ Uehling et al, (2012) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกดูได้บน 1.5% agarose เจลย้อมด้วยสีเขียว SYBR ฉัน (Molec- ular Probes, ออริกอนสหรัฐอเมริกา) Amplicons ทำความสะอาดด้วย exonuclease ฉันและกุ้งอัลคาไลน์ฟอสฟา (เกล็นและ Schable 2005) และติดใจกับบิ๊กย้อม 3.1 (ประยุกต์ Bio- ระบบอุปถัมภ์ City, CA, USA) กับไพรเมอร์เดียวกับที่ใช้สำหรับการขยาย ปฏิกิริยา Sequencing ถูกทำความสะอาดและโปรcessed บน ABI 3730xl วิเคราะห์ทางพันธุกรรม (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ที่มหาวิทยาลัยดยุคจีโนม Sequenc- สิ่งอำนวยความสะดวกและการวิเคราะห์ของไอเอ็นจีแกน ลำดับที่สร้างขึ้นใหม่ได้รับการแก้ไขใน v.4 SEQUENCHER

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

clavulina amazonensis th8742 jn228249 กายอานาclavulina rosiramea th8954 jq677048 กายอานาclavulina cirrhata th8940 jq677046 กายอานาclavulina guyanensis th9245 jq677049 กายอานาth9194 jq677047 กายอานาการถ่ายทอดเชื้อ ( แทกเกอร์ & Henkel 2004 ; Henkel et al . uehling 2005et al . 2012 ) โมเลกุลของระบบการศึกษาได้ยืนยันmonophyly ของ clavulina ภายใน cantharellales และ sup -ให้ตำแหน่งและจากความหลากหลายใน GE -เรา ( แทกเกอร์ & Henkel 2004 ; มอนซาลโว et al . 2006 ; uehling et al .2012 ) sporocarp รวบรวมความพยายามและ belowground โม - ล่าสุดlecular การศึกษาแสดงให้เห็นว่า clavulina มีความหลากหลายมากที่สุดในเขตร้อน เช่น tedersoo et al . 2003 , 2007 , 2008 ; moyersoen 2006 ;peay et al . 2010 ; Smith et al . 2011 ; Henkel et al . 2012 )ในโล่กลางแห่งภูมิภาคอเมริกาใต้บ้างป่าเป็น dominated โดย ECM ต้นไม้ในสกุล dicymbe ( faba -เดซีอี subfam . caesalpinioideae ) aldina ( Fabaceae subfam . papil -ionoideae ) หรือ pakaraimaea ( Dipterocarpaceae subfam .pakaraimoideae ) ( นักร้อง et al . 1983 ; moyersoen 2006 ; degagneet al . 2009 ; Smith et al . 2011 ) ในส่วนบน potaro ลุ่มน้ำของกายอานาECM ราได้รับการรวบรวมใน dicymbe ป่าที่ผ่านมา14 Y และ w20 ของ 174 ชนิดที่รู้จักเป็น clavulina( Henkel et al . 2012 ) เป็นส่วนหนึ่งของความพยายามของเราอย่างต่อเนื่องเพื่อเอกสารในกายอานา clavulina ชุมนุมเราที่นี่อธิบายสามใหม่ชนิดและการกระจาย clavulina cirrhata บันทึกใหม่สำหรับ( Berk . ) มุม ชนิดที่รู้จักกันก่อนหน้านี้จาก 1856 Col - เดี่ยวlection จาก Amazon บราซิลตอนเหนือ ( แทกเกอร์ & Henkel2004 ; Henkel et al . เพื่อเรียนภาษาระยะสั้นและท่องเที่ยว ; uehling et al . เรา providemor - 2012 )phological ที่อยู่อาศัยลำดับ DNA และผลข้อมูลการเกิดสำหรับแต่ละชนิด ชนิดใหม่ที่สอดคล้องกับการขยายวัสดุและวิธีการคอลเลกชันคอลเลกชันส่วนใหญ่เกิดขึ้นในช่วง mayejul . และ dec.ejan .ฤดูฝน และจาก 2000e2003 2008e2010 ขึ้น - กายอานาต่อ potaro ลุ่มน้ำในระยะ 10 กิโลเมตร รัศมีถาวรค่ายที่ 5180วัดใน jun.ejul . 2011 จากบนเดเมอราราบา - แม่น้ำบาปที่ mabura นิเวศวิทยาสำรองภายในรัศมี 5 กิโลเมตรเป็นค่ายที่ 5090เก็บมาจากป่า dominated โดย ECM เรือนยอดต้นไม้dicymbe corymbosa และ / หรือ dicymbe altsonii . หน้ายาง -ตูเรส ของ basidiomata ถูกอธิบายใหม่ในฟิลด์ สีได้ถูกอธิบายไว้อย่าง kornerup และรหัสตาม& wanscher ( 1978 ) , สีแผ่นระบุไว้ในวงเล็บ( เช่น 3c3 ) เชื้อราแห้งในเขตที่มีซิลิกาเจลmicromorphologyคุณสมบัติ micromorphological ตัวอย่างสดสอบ -การวาดภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ epoi ฟิลด์กับเลนส์สว่าง สเป็คแห้งในขณะเดียวกัน มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์ Olympus bx51 กับความคมชัดแสงและระยะเลนส์ . เบซิเดียสำหรับการถ่ายทอดเชื้อ , - , รับผลิตrigmata และคุณสมบัติของเส้นใยเนื้อเยื่อได้ทำการ รีไฮเดรทม , เชื้อราติดตั้งในน้ำ 3 % โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ ( KOH ) หรือ เมลเซอร์คือโซลูชั่นและโครงสร้างแต่ละอย่างน้อย 20 คนวัดวาดเส้นให้ใช้กับดิจิตอลโพธิ์ - กระดาษลอกลายtomicrographs และแก้ไขด้วยโปรแกรม Adobe Photoshop CS5 ( ซานJose , CA , USA ) ตัวอย่างของทั้งหมด 4 ชนิด คือ ฝากในแต่ละ herbaria ต่อไปนี้ ( โฮล์มเกรน et al . 1990 ) : brg อีuehling et al . : Neotropical 936 clavulina ชนิดมหาวิทยาลัยกายอานา ซูอี ฮัมมหาวิทยาลัยรัฐ ปูลุมหาวิทยาลัยเพอร์ดูและ NY E นิวยอร์กสวนพฤกษศาสตร์ด้วยปลายทางของคอลเลกชันเฉพาะหมายเลขที่ระบุไว้ใน" " ส่วนตัวอย่างตรวจแต่ละชนิดการสกัดดีเอ็นเอ , ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส ( พีซีอาร์ )ดีเอ็นเอที่สกัดได้ในเนื้อเยื่อ basidioma แห้งสำหรับแต่ละชนิดรายงานที่นี่ เนื้อเยื่อที่เป็นโฮโมด้วยคีมเป็นหมันหรือ micropestle และดีเอ็นเอด้วยการ dneasy พืช Mini Kit ( QIAGEN , Valencia , CA , USA ) ที่its1-5.8s-its2 ( ของมัน ) และหน่วยย่อยขนาดใหญ่บางส่วน ( 28s ) ของ ribo -somal ดีเอ็นเอถูกขยายด้วย its1f ชนิดไปข้างหน้าlror และและย้อนกลับจาก its4b lr3 lr5f ต่าง ๆ , ,ผสมกับโปรโตคอลของ vilgalys & เฮสเตอร์ ( 1990 )gardes & บรันส์ ( 1993 ) และ tedersoo et al . ( 2008 ) สองหน่วยย่อยที่ใหญ่ที่สุดของดีเอ็นเออาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส II ( ขึ้นอยู่กับ rpb2 )จีนได้ขยายจาก clavulina ตัวอย่าง - เราโดย : uehling et al . ( 2012 ) ผลิตภัณฑ์ PCR คือดูได้ใน 1.5 % เจล ( ย้อมด้วยสีเขียว SYBR ( molec -ular probes , ยูจีน , ออริกอน , สหรัฐอเมริกา amplicons สะอาดผมกับเอกโซนิวคลีเอส และกุ้ง อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส ( เกล็น& schable 2005 ) และลำดับเบสด้วยสีใหญ่ 3.1 ( ไบโอ - ประยุกต์ระบบ , Foster City , CA , USA ) ด้วยไพรเมอร์ที่ใช้เหมือนกันสำหรับเด็ก . ลำดับปฏิกิริยาสะอาดมืออาชีพcessed บนปลาย 3730xl Analyzer ( Applied Biosystems พันธุกรรม ,ฟอสเตอร์ซิตี , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) ที่มหาวิทยาลัย Duke sequenc - จีโนมไอเอ็นจีและการวิเคราะห์สถานที่หลัก ใหม่สร้างลำดับคือแก้ไข sequencher v.4 .