In the present work, a specific fas

In the present work, a specific fast real-time PCR method for fishdetection was designed. A successful real-time PCR assay requires amplification and detection under optimal conditions and each component of the reaction can affect the result. The quality and integrity of DNA is essential to conducting a successful experiment. One way to measure
these characteristics in the DNA is by absorbance ratio A260/ A280, and in all samples this ratio was between 1.7 and 2. Values outside this range may indicate the presence of impurities or contaminant in the solution such as proteins or phenol, which may affect the results. On the other hand, optimal performance is achieved by selecting
the primer and probe concentrations that provide the lowest quantification cycle (Cq) and highest DRn (normalised reporter, defined
as emission intensity of reporter/emission intensity of passive
reference) (Bustin, 2004).
The optimal conditions in terms of specificity and sensitivity for
detecting fish were established. Finally, the optimal concentrations
were 900 nmol/L for both primers and 250 nmol/L for the probe.
The specificity of the primer/probe set was confirmed using pure
genomic DNA from different species of bivalves, cephalopods, crustaceans,
meats, vegetables and spices (normally used as a condiment
in prepared food). Processed food products, especially precooked
plates, contain a large number of ingredients. For this reason,
it is necessary to verify the specificity of the method against
with these ingredients although they are not related genetically
to the fish. No cross-reactivity was detected with any of the samples
tested (Table 1). The optimal annealing temperature that allowed
correct detection of the fish was 60 C. The mean values of
Cq obtained were 20 ± 2 in fresh and frozen fish with a concentration
of 100 ng of DNA.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธี PCR เร็วจริงเฉพาะใน fishdetection ถูกออกแบบในงานนำเสนอ ทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์ที่ประสบความสำเร็จจำเป็นต้องขยายและตรวจสอบภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม และแต่ละส่วนของปฏิกิริยามีผลต่อผลลัพธ์ คุณภาพและความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอเป็นสิ่งจำเป็นในการดำเนินการทดลองที่ประสบความสำเร็จ วิธีหนึ่งในการวัดลักษณะเหล่านี้ในดีเอ็นเอมีอัตราส่วน absorbance A260 / A280 และในตัวอย่างทั้งหมด นี้อัตราส่วนระหว่าง 1.7 และ 2 ค่าอยู่นอกช่วงนี้อาจบ่งชี้สถานะของสิ่งสกปรกหรือสารปนเปื้อนในการแก้ปัญหาเช่นโปรตีนหรือวาง ซึ่งอาจส่งผลต่อผลลัพธ์ บนมืออื่น ๆ บรรลุประสิทธิภาพสูงสุด โดยการเลือกการรองพื้นและโพรบความเข้มข้นที่ต่ำที่สุดนับรอบ (ซี) และสูงสุด DRn (normalised โปรแกรมรายงาน กำหนดเป็นมลพิษความเข้มของความเข้มโปรแกรมรายงาน/มลพิษของพาสซีฟอ้างอิง) (Bustin, 2004)สภาวะ specificity และความสำคัญตรวจสอบปลาได้ก่อตั้ง ในที่สุด ที่ความเข้มข้นที่เหมาะสมมี 900 nmol/L สำหรับไพรเมอร์ทั้งและ 250 nmol/L สำหรับการโพรบSpecificity ชุดรองพื้น/โพรบได้รับการยืนยันใช้บริสุทธิ์genomic DNA จากต่างชนิด bivalves, cephalopods พบเนื้อสัตว์ ผัก และเครื่องเทศ (โดยปกติใช้เป็นรสในการเตรียมอาหาร) ผลิตภัณฑ์อาหารแปรรูป precooked โดยเฉพาะแผ่น ประกอบด้วยส่วนผสมเป็นจำนวนมาก ด้วยเหตุนี้จำเป็นต้องตรวจสอบ specificity ของวิธีการกับมีส่วนผสมเหล่านี้แม้ว่าจะไม่เกี่ยวข้องแปลงพันธุกรรมปลา Cross-reactivity ไม่พบกับตัวอย่างทดสอบ (ตาราง 1) หลอมอุณหภูมิสูงสุดที่อนุญาตตรวจสอบถูกต้องของปลาถูกค. 60 ค่าเฉลี่ยของซีรับได้ 20 ± 2 ในปลาสด และแช่แข็งเข้มข้น100 ng ของดีเอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในงานปัจจุบัน มีเฉพาะได้อย่างรวดเร็วแบบเรียลไทม์ วิธีพีซีอาร์เพื่อ fishdetection ออกแบบมา เป็นวิธี PCR แบบเรียลไทม์ที่ประสบความสำเร็จจะต้องขยายและตรวจสอบภายใต้สภาวะที่เหมาะสม และแต่ละส่วนประกอบของปฏิกิริยาสามารถส่งผลกระทบต่อผล คุณภาพและความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อดำเนินการทดลองที่ประสบความสำเร็จ วิธีหนึ่งในการวัด
เหล่านี้คุณลักษณะในดีเอ็นเอ โดยค่าอัตราส่วน a260 / a280 และในตัวอย่างนี้ คือ อัตราส่วนระหว่าง 1.7 และ 2 ค่าภายนอก ช่วงนี้อาจบ่งชี้ของสิ่งสกปรก หรือสิ่งปนเปื้อนในการแก้ปัญหา เช่น โปรตีน หรือฟีนอล ซึ่งอาจส่งผลกระทบต่อผล บนมืออื่น ๆที่ประสิทธิภาพสูงสุดได้โดยการเลือก
ไพรเมอร์และตรวจสอบความเข้มข้นที่ให้วงจรปริมาณต่ำสุด ( CQ ) และสูงสุด drn ( กลุ่มนักข่าว การกำหนดความเข้มของ
เป็นนักข่าว / ความเข้มของการอ้างอิงเรื่อยๆ
) ( bustin , 2004 ) .
สภาวะที่เหมาะสมในแง่ของความจำเพาะและความไวของการตรวจหาปลา
ตั้งขึ้น ในที่สุด ,
ความเข้มข้นที่เหมาะสมจำนวน 900 nmol / L ทั้งไพรเมอร์และ 250 nmol / ลิตร สำหรับการสอบสวน
ความจำเพาะของไพรเมอร์ / สอบสวนชุดได้รับการยืนยันใช้เพียว
genomic DNA จากสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของน้ำ , หมึก , กุ้ง
, เนื้อสัตว์ , ผักและเครื่องเทศ ( ปกติใช้เป็นเครื่องปรุงอาหาร
ในอาหารที่เตรียมไว้ ) ผลิตภัณฑ์แปรรูปอาหาร โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื่อง
แผ่น มีตัวเลขขนาดใหญ่ของส่วนผสม ด้วยเหตุนี้
มันเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อตรวจสอบความจำเพาะของวิธีกับ
กับส่วนผสมเหล่านี้ถึงแม้ว่าพวกเขาไม่ได้มีความสัมพันธ์ทางพันธุกรรม
กับปลา ไม่พบปฏิกิริยาข้ามกับใด ๆของตัวอย่าง
ทดสอบ ( ตารางที่ 1 ) ที่เหมาะสมที่อุณหภูมิการอบอ่อนที่อนุญาต
ตรวจสอบปลาที่ถูกต้องคือ 60  C หมายถึงค่า
CQ ได้ 20 ± 2 ในอาหารสดและแช่แข็งปลาอย่างใจจดจ่อ
100 กรัมของดีเอ็นเอ