2.3. HPLC analysisThe carotenoids w

2.3. HPLC analysis
The carotenoids were quantified as previously described, withminor modifications (Chung et al., 2004), using a C30 column(3 mL, 150 mm 4.6 mm, YMC, Wilmington, NC). All carotenoids were monitored at 445 nm with Waters 2996 photodiode array detector (Milford, MA). The HPLC mobile phase was methanol:MTBE: water (95:3:2, v/v, with 1.5% ammonium acetate in water,solvent A) and methanol:MTBE:water (8:90:2, v/v, with 1.0% ammonium acetate in water, solvent B). The gradient procedure, at a flow rate 0.4 mL/min (10 8C), was as follows: (1) start at 100% solvent A, (2) a 21-min linear gradient to 45% solvent A and 55% solvent B, (3) 1-min hold at 45% solvent A and 55% solvent B, (4) an 11-min linear gradient to 5% solvent A and 95% solvent B, (5) a 4- min hold at 5% solvent A and 95% solvent B, (6) a 2-min linear gradient back to 100% solvent A, and (7) a 28-min hold at 100% solvent A. Lutein, zeaxanthin, crypoxanthin, a-carotene, all-transb- carotene, 9- and 13-cis-b-carotene, 5-, 9-, 13-, and 15-cis- and trans-lycopene were adequately separated by using this method.
Peak identification in food samples was based on comparisons with retention time and absorption spectra of known carotenoid standards (b-carotene and lycopene from Aldrich–Sigma Chemical Co.; lutein, zeaxanthin, and b-cryptoxanthin from DSM Nutritionals). Carotenoids were quantified by integrating peak areas in the HPLC chromatograms. Each food was analyzed in duplicate. If analysis of duplicate samples were different by more that 10%, it was repeated in duplicate and all analyses were used. Carotenoid analysis was performed two to six times. These foods are indicated in the appropriate table. The %CV was less than 10% for foods analyzed more than twice. The final results were expressed in mg/100 g. The lower limit of detection of our extraction and HPLC procedures is 0.2 pmol for carotenoids. Our laboratory has participated in the National Institute of Standards & Technology (NIST) Round-Robins and has a

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 วิเคราะห์ HPLCCarotenoids ถูก quantified เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ แก้ไข withminor (Chung et al., 2004), ใช้คอลัมน์ C30 (3 mL, 150 มม. 4.6 มม. YMC วิลมิ NC) Carotenoids ทั้งหมดถูกตรวจสอบที่ 445 nm ด้วยน้ำ 2996 photodiode เรย์จับ (ลฟอร์ด MA) ระยะเคลื่อน HPLC มี MTBE: เมทานอล: น้ำ (95:3:2, v/v มี 1.5% acetate แอมโมเนียในน้ำ ตัวทำละลาย A) และเมทานอล: MTBE:water (8:90:2, v/v กับ 1.0% acetate แอมโมเนียในน้ำ ตัวทำละลาย B) กระบวนการไล่โทนสี ที่อัตราการไหล 0.4 mL/min (10 8C), เป็นดังนี้: (1) เริ่มต้นที่ 100% ค้าง A ตัวทำละลาย, (2) 21 นาทีเส้นไล่ตัวทำละลาย 45% A และ 55% ตัวทำละลาย B, (3) 1 นาทีที่ 45% ตัวทำละลาย A และตัวทำละลาย 55% B, (4) การไล่ระดับเส้น 11 นาที 5% ตัวทำละลาย A และ 95% ตัวทำละลาย B , (5) 4 นาทีพัก 5% ตัวทำละลาย A และตัวทำละลาย 95% B, (6) 2 นาทีไล่เส้นกลับไป A ตัวทำละลาย 100% และ (7) 28-นาทีค้างไว้ในตัวทำละลาย 100% อ.ลูทีน zeaxanthin, crypoxanthin เป็นแคโรทีน ออ-transb-แคโรทีน 9 - และ 13-cis-บีแคโรทีน 5, 9- 13- และ 15 cis - และทรานส์-lycopene มีเพียงพอแยกโดยวิธีนี้ แบบพีครหัสในตัวอย่างอาหารเปรียบเทียบกับเวลาคงดูดซึมแรมสเป็คตรามาตรฐานรู้จัก carotenoid (บีแคโรทีนและ lycopene จาก บริษัทเคมี Aldrich – ซิก ลูทีน zeaxanthin และ b-cryptoxanthin จาก DSM Nutritionals) Carotenoids มี quantified โดยรวมพื้นที่สูงสุดใน HPLC chromatograms ร้านอาหารถูกวิเคราะห์ในซ้ำ ถ้าวิเคราะห์ตัวอย่างซ้ำแตกต่างกันมากว่าร้อย 10 มีการทำซ้ำสำเนา และใช้วิเคราะห์ทั้งหมด วิเคราะห์ carotenoid ทำสองถึงหกเท่านั้น อาหารเหล่านี้จะแสดงในตารางที่เหมาะสม % CV ไม่น้อยกว่า 10% สำหรับอาหารที่วิเคราะห์มากกว่าสองครั้ง ผลสุดท้ายถูกแสดงใน mg/100 g ขีดจำกัดล่างของการตรวจสอบของเราสกัดและวิธี HPLC เป็น pmol 0.2 สำหรับ carotenoids ห้องปฏิบัติการของเราได้เข้าร่วมในชาติสถาบันมาตรฐานและเทคโนโลยี (NIST) กลม Robins และมีเป็น < 5% การเปลี่ยนแปลงสำหรับ carotenoidsระบบของ HPLC จะปรับเทียบ ด้วยวัสดุอ้างอิงมาตรฐาน (SRM) 968a — วิตามินละลายไขมันในซีรั่มมนุษย์และพลาสม่า โดยใน NIST เพื่อตรวจสอบความแม่นยำของกระบวนการวิเคราะห์ของเรา triplicates พลาสม่าเก็บตัวอย่างสระว่ายน้ำ (เก็บไว้ที่ 80 8C) จะถูกแยก และ assayed ทุกไม่กี่เดือน เราพบว่า CV ของเรา interassay สำหรับกลุ่มนี้ (n = 25) 4% ประวัติอินทราทดสอบ (n = 9) 4% กู้คืนมาตรฐานภายในหาค่าเฉลี่ยร้อยละ 97 ความถูกต้อง ตามการฟื้นตัวของเพิ่มบีแคโรทีนเพื่อตัวอย่างพลาสมา averaged 95% เมื่อเร็ว ๆ นี้ เราเข้าร่วมในการวิเคราะห์ผักโขม ๒๓๘๕ วัสดุอ้างอิงมาตรฐาน NIST และมีเป็น < 5% การเปลี่ยนแปลงสำหรับลูทีน zeaxanthin และแคโรที นบี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การวิเคราะห์ HPLC
นอยด์ถูกวัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ withminor การปรับเปลี่ยน (Chung et al., 2004) โดยใช้คอลัมน์ C30 (3 มิลลิลิตร 150 มิลลิเมตร 4.6 มิลลิเมตร YMC, Wilmington, NC) นอยด์ทั้งหมดได้รับการตรวจสอบที่ 445 นาโนเมตรมีน้ำ 2996 โฟโตไดโอดเครื่องตรวจจับอาร์เรย์ (ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) ขั้นตอนวิธี HPLC ถือเป็นเมทานอล: MTBE: น้ำ (95: 3: 2, v / V ด้วยอะซิเตท 1.5% แอมโมเนียในน้ำเป็นตัวทำละลาย A) และเมทานอล: MTBE: น้ำ (8: 90: 2, ปริมาตร / ปริมาตรด้วย 1.0% อะซิเตตแอมโมเนียในน้ำเป็นตัวทำละลาย B) ขั้นตอนการไล่ระดับสีที่อัตราการไหล 0.4 มิลลิลิตร / นาที (10 8C) ได้ดังต่อไปนี้ (1) เป็นตัวทำละลายเริ่มต้นที่ 100% A, (2) 21 นาทีลาดเชิงเส้น 45% ตัวทำละลายและ 55% ทำละลาย B (3) 1 นาทีที่ถือ 45% ตัวทำละลายและตัวทำละลาย 55% B, (4) 11 นาทีลาดเชิงเส้น 5% ตัวทำละลายและตัวทำละลาย 95% B, (5) ไว้ 4 นาทีที่ 5% ตัวทำละลายและตัวทำละลาย 95% B, (6) ลาดเชิงเส้น 2 นาทีกลับไป 100% ตัวทำละลายและ (7) ถือ 28 นาทีที่ 100% ตัวทำละลายเอลูทีน, ซีแซนทีน, crypoxanthin เป็นแคโรทีนทั้งหมด แคโรทีน -transb-, 9 และ 13-CIS-B แคโรทีน, 5, 9, 13 และ 15 cis- และทรานส์ไลโคปีนที่ถูกแยกออกจากกันอย่างเพียงพอโดยใช้วิธีการนี้.
บัตรประจำตัวสูงสุดในตัวอย่างอาหารอยู่บนพื้นฐานของ เปรียบเทียบกับระยะเวลาการเก็บรักษาและสเปกตรัมการดูดซึมของมาตรฐาน carotenoid ที่รู้จักกัน (ขแคโรทีนและไลโคปีนจากดิช-Sigma Chemical Co .; ลูทีนซีแซนทีนและ B-cryptoxanthin จาก DSM Nutritionals) Carotenoids ถูกวัดโดยการบูรณาการพื้นที่สูงสุดใน HPLC chromatograms อาหารที่แต่ละคนได้รับการวิเคราะห์ในที่ซ้ำกัน หากการวิเคราะห์ตัวอย่างที่ซ้ำกันที่แตกต่างกันโดยที่ 10% มันก็ซ้ำในที่ซ้ำกันและการวิเคราะห์ทั้งหมดถูกนำมาใช้ การวิเคราะห์ carotenoid ได้ดำเนินการ 2-6 ครั้ง อาหารเหล่านี้จะมีการแสดงในตารางที่เหมาะสม CV% ที่ได้รับน้อยกว่า 10% สำหรับอาหารการวิเคราะห์มากขึ้นกว่าสองเท่า ผลสุดท้ายถูกแสดงในมก. / 100 กรัม ขีด จำกัด ล่างของการตรวจสอบขั้นตอนการสกัดและการ HPLC ของเราคือ 0.2 pmol สำหรับนอยด์ ห้องปฏิบัติการของเราได้มีส่วนร่วมในสถาบันมาตรฐานและเทคโนโลยี (NIST) รอบร็อบบินส์และมี <เปลี่ยนแปลง 5% carotenoids.
ระบบ HPLC ของเรามีการปรับเทียบกับวัสดุอ้างอิงมาตรฐาน (SRM) วิตามิน 968a-ที่ละลายในไขมันในซีรั่มของมนุษย์และ พลาสม่าในการให้บริการโดย NIST เพื่อตรวจสอบความแม่นยำของขั้นตอนการวิเคราะห์ของเรา triplicates ตัวอย่างสระว่ายน้ำพลาสม่าที่เก็บไว้ (เก็บไว้ที่ 80 8C) จะสกัดและ assayed ทุกสองสามเดือน เราพบว่า CV กันมีสระว่ายน้ำของเราสำหรับการนี้ (n = 25) เป็น 4%; งาน CV ภายในทดสอบ (n = 9) เป็น 4% การฟื้นตัวของค่าเฉลี่ยมาตรฐานภายใน 97% ความถูกต้องที่กำหนดโดยการฟื้นตัวของการเพิ่มขแคโรทีนตัวอย่างพลาสม่าที่เฉลี่ย 95% เร็ว ๆ นี้เรามีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ของ NIST อ้างอิงมาตรฐานวัสดุ 2385 ผักโขมและมี <เปลี่ยนแปลง 5% สำหรับลูทีนซีแซนทีนและขแคโรทีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การวิเคราะห์ HPLC
carotenoids ถูก quantified ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ withminor ปรับเปลี่ยน ( Chung et al . , 2004 ) การใช้ C30 คอลัมน์ ( 3 ml 150 มม. 4.6 มม. ymc Wilmington , NC ) โวนอยด์ถูกตรวจสอบใน 445 nm ด้วยน้ำ 1 โฟโตไดโอดเรย์ตรวจจับ ( Milford , MA ) พบเฟสเคลื่อนที่เป็นเมทานอล : น้ำ 95:3:2 มทีบีอี ( V / V , 1.5% แอมโมเนียมอะซิเตทในน้ำตัวทำละลาย ) และเมทานอล : น้ำ : มทีบีอี ( 8:90:2 , V / V 1.0 % ammonium acetate ในน้ำ ตัวทำละลาย B ) วิธีการไล่ระดับ อัตราการไหลของ 0.4 มล. / นาที ( 8B ) ดังนี้ ( 1 ) เริ่มต้นที่ 100 % ละลาย , ( 2 ) 21 นาทีเส้นระดับ 45% และ 55% ตัวทำละลายตัวทำละลาย B ( 3 ) 1-min อยู่ที่ 45% และ 55% ตัวทำละลายตัวทำละลาย B ( 4 ) 11 นาทีเส้นระดับ 5% ตัวทำละลายและ 95% เป็นตัวทำละลาย B( 5 ) 4 - มิน ถือ 5% และตัวทำละลาย 95% เป็นตัวทำละลาย B ( 6 ) 2-min เส้นลาดกลับ 100% ตัวทำละลาย และ ( 7 ) 28 นาทีค้างที่ 100% ตัวทำละลาย . ลูทีนซีแซน crypoxanthin a-carotene , , , , transb - แคโรทีน และ 13-cis-b-carotene 9 , 5 - 9 - 13 - 15 - ทรานส์ไลโคปีนมีอย่างเพียงพอและถูกต้องแยกโดยใช้วิธีนี้
สูงสุดที่ระบุในตัวอย่างอาหาร โดยเปรียบเทียบกับเวลาการเก็บรักษาและการดูดกลืนรังสีที่รู้จักของแคโรทีนอยด์ ( เบต้า - แคโรทีน ไลโคปีนจากมาตรฐานและอัลดริช - Sigma Chemical Co . ; ลูทีนและซีแซนทีน , , b-cryptoxanthin จาก DSM ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร ) คาโรทีนอยด์ถูก quantified โดยรวมสูงสุดในพื้นที่ และให้กลิ่น อาหารถูกวิเคราะห์ในแต่ละซ้ำถ้าการวิเคราะห์ตัวอย่างที่ซ้ำกันจะแตกต่างกันมากกว่า 10% มันซ้ำซ้ำและในการวิเคราะห์แบบ การวิเคราะห์ในการสองถึงหกครั้ง อาหารเหล่านี้จะแสดงในตารางที่เหมาะสม % CV น้อยกว่า 10 % สำหรับอาหารวิเคราะห์มากกว่าสองครั้ง ผลลัพธ์สุดท้ายที่ถูกแสดงออกในมิลลิกรัม / 100 กรัมขีดจำกัดของการตรวจหาการสกัดและขั้นตอน HPLC ของเราคือ 0.2 pmol สำหรับโวนอยด์ ห้องปฏิบัติการของเราได้มีส่วนร่วมในสถาบันเทคโนโลยีแห่งชาติ&มาตรฐาน ( NIST ) รอบโรบินส์และมี < 5 % การเปลี่ยนแปลงสำหรับ carotenoids .
ระบบ HPLC ของเราเทียบกับวัสดุอ้างอิงมาตรฐาน ( SRM ) 968a ละลายในไขมันวิตามินในเลือดและในพลาสมาของมนุษย์ โดย NIST .เพื่อตรวจสอบความถูกต้องของขั้นตอนการวิเคราะห์ของเราล้อมของการเก็บตัวอย่าง Pool พลาสมา ( เก็บไว้ที่ 80 8C ) สกัดเอนไซม์ทุกสองสามเดือน เราพบว่า พันธุ์ interassay ของเราสำหรับสระว่ายน้ำ ( n = 25 ) 4 % ; อัฟกานิสถาน CV ( n = 9 ) 4 % การกู้คืนของภายในมาตรฐานค่าเฉลี่ย 97% ความถูกต้องที่กำหนดโดยการกู้คืนเพื่อเพิ่มเบต้าแคโรทีน พลาสมา ตัวอย่าง ร้อยละ 95เมื่อเร็วๆนี้ , เราได้เข้าร่วมในการวิเคราะห์ของ NIST มาตรฐานวัสดุอ้างอิง 2385 ผักโขมมี < 5 % การเปลี่ยนแปลงสำหรับลูทีนและซีแซนทีน , ,
- .