Impact of single-site mutation on t

Impact of single-site mutation on thermostability
A systematic protein engineering strategy, namely, the first
round of single-site mutation followed by the second round of combinational mutation, was adopted to improve the pullulanase thermostability. The primary round of screening included 39 residues
from all 4 approaches. There were 444 (9×46+30×1 = 444)
colonies need to be screened. Positive clones with had higher protein thermostability than that of the WT were related to 13 residues.
The mutants E235V, T264Y, S662R, and N737K were determinedvia
DNA sequencing. Negative mutants of semi-saturation mutagenesis were not shown. The WT enzyme retained 55% of the initial
activity after incubation at 60
◦
C for 30 min. After the same treatment, the mutants E235V, T264Y, S662R, N737K, D253P, E518P,
Q706P, T752P, E591Y, E518I, V434I, Q600R, and Q777H exhibited
enhanced resistance to heat treatment. In particular, the mutants
E235V, V434I, E518I, S662R and Q706P retained 74%, 74%, 76%,
80%, and 75% of the initial activities of these mutants, respectively
(Fig. 2A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลกระทบของการกลายพันธุ์เดียวเว็บไซต์ทนร้อนกลยุทธ์วิศวกรรมโปรตีนระบบคือครั้งแรกรอบของการกลายพันธุ์เดียวเว็บไซต์ตามด้วยรอบที่สองของการกลายพันธุ์ผสม, ถูกนำมาใช้ในการปรับปรุง pullulanase ทนร้อน รอบหลักของการตรวจคัดกรองรวม 39 ตกค้างจากทั้ง4 วิธี มีอยู่ 444 (9 × 46 × 30 + 1 = 444) โคโลนีที่จำเป็นต้องได้รับการคัดเลือก โคลนบวกกับมีโปรตีนทนร้อนสูงกว่าของ WT ที่เกี่ยวข้องกับสารตกค้าง 13. กลายพันธุ์ E235V, T264Y, S662R และ N737K เป็น determinedvia ลำดับดีเอ็นเอ การกลายพันธุ์เชิงลบของการกลายพันธุ์กึ่งอิ่มตัวไม่ได้แสดงให้เห็นว่า เอนไซม์ WT เก็บไว้ 55% ของการเริ่มต้นกิจกรรมหลังจากการบ่มที่60 ◦ C เป็นเวลา 30 นาที หลังจากการรักษาเดียวกันกลายพันธุ์ E235V, T264Y, S662R, N737K, D253P, E518P, Q706P, T752P, E591Y, E518I, V434I, Q600R และจัดแสดง Q777H ต้านทานการปรับปรุงการรักษาความร้อน โดยเฉพาะอย่างยิ่งกลายพันธุ์E235V, V434I, E518I, S662R และ Q706P เก็บไว้ 74%, 74%, 76%, 80% และ 75% ของกิจกรรมเริ่มต้นของการกลายพันธุ์เหล่านี้ตามลำดับ(รูป. 2A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลกระทบของการกลายพันธุ์เว็บไซต์เดียวในทดล
อย่างเป็นระบบโปรตีนวิศวกรรมกลยุทธ์ คือ รอบแรก
การกลายพันธุ์เว็บไซต์เดียวตามด้วยรอบสองชนิดของการกลายพันธุ์เป็นบุญเพิ่มพูลลูแลนเนสทดล . รอบหลักของการตรวจคัดกรองรวม 39 ตกค้าง
จาก 4 วิธี มี 444 ( 9 × 46 30 × 1 = 444 )
อาณานิคมต้องติดมุ้งลวดโคลน บวกกับมีทดลโปรตีนสูงกว่าของ WT มีความสัมพันธ์กับ 13 ตกค้าง .
e235v t264y s662r , สายพันธุ์ , และ n737k ถูกจัดลำดับดีเอ็นเอ determinedvia

พันธ์เชิงลบของการกึ่งอิ่มตัวไม่แสดง WT เอนไซม์รักษา 55% ของกิจกรรมเริ่มต้นที่ 60

หลังจากบ่ม◦
C เป็นเวลา 30 นาที หลังจากการรักษาเดียวกัน พวก e235v t264y s662r , , ,n737k d253p e518p q706p
, , , , e591y t752p e518i v434i , , , , q600r และ q777h จัดแสดง
เพิ่มความต้านทานการรักษาความร้อน โดยเฉพาะ พวก e235v v434i e518i
, , , และการ s662r q706p 74% , 74% , 76 %
% 80 และ 75 % ของกิจกรรมแรกของสายพันธุ์เหล่านี้ตามลำดับ
( รูปที่ 2A )