First Screen. The First Screen incl

First Screen. The First Screen included two sequential rounds of
sorting (see Supporting Information Figure 4 for details). The GMDs
were grown in induction medium, containing purified Ivyc, at 30 °C
for 19 h, after which they were sieved over a 20 μm mesh and then
recovered from the sieve in fresh PBS. SYTOX Orange (Life
Technologies, USA) was added to a final concentration of 100 nM
just before sorting. GMD were sorted on an iCYT Synergy flow
cytometer equipped with a 126 μm nozzle and laser lines of 488 and
561 nm for excitation of yEGFP and SYTOX Orange, respectively.
Individual GMD isolated from high stringency plating sorts were
placed on M. luteus indicator plates (0.5 mg mL−1 M. luteus, 10 μg/mL
E. coli Ivy, 0.5% dextrose, 1.5% galactose, 0.71% Difco YNB without
(NH4)2SO4, 0.25% (NH4)2SO4, 0.077% CSM−ura) and grown 4 days at
30 °C. Prevalent halo-forming colonies were selected for sequencing.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หน้าจอแรก หน้าจอแรกรวมรอบลำดับสองเรียงลำดับ (ดูรูปข้อมูลที่สนับสนุน 4 สำหรับรายละเอียด) GMDsได้เติบโตในการเหนี่ยวนำ ประกอบด้วย Ivyc บริสุทธิ์ ที่ 30 ° Cสำหรับ 19 h หลังจากที่ที่พวกเขามี sieved มากกว่า 20 μm ประกบแล้วกู้คืนจากตะแกรงใน PBS สด SYTOX ส้ม (ชีวิตเทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่มความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 nMก่อนเรียงลำดับ GMD เรียงบน iCYT การไหล Synergycytometer พร้อม 126 μm หัวฉีดและเลเซอร์บรรทัด 488 และ561 nm สำหรับในการกระตุ้น yEGFP และ SYTOX สีส้ม ตามลำดับGMD ละโดดเดี่ยว stringency สูงชุบเรียงลำดับได้วางบน M. luteus แผ่นตัวบ่งชี้ (0.5 mg mL−1 M. luteus, μg 10 mLไอวี่ e. coli กาแล็กโทส 1.5%, 0.71%, 0.5% ขึ้น Difco YNB โดย(NH4) 2SO4, 0.25% (NH4) 2SO4, 0.077% CSM−ura) และเติบโต 4 วันที่30 องศาเซลเซียส อาณานิคม halo ขึ้นแพร่หลายถูกเลือกสำหรับการจัดลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน้าจอแรก หน้าจอแรกรวมสองรอบต่อเนื่องของ
การเรียงลำดับ (ดูข้อมูลสนับสนุนรูปที่ 4 สำหรับรายละเอียด) GMDs
มีปลูกอยู่ในสื่อเหนี่ยวนำที่มีบริสุทธิ์ Ivyc ที่ 30 องศาเซลเซียส
19 ชั่วโมงหลังจากที่พวกเขาถูกร่อนผ่านตะแกรง 20 ไมครอนแล้ว
หายจากตะแกรงในพีบีเอสสด SYTOX สีส้ม (ชีวิต
Technologies ประเทศสหรัฐอเมริกา) ถูกบันทึกอยู่ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 นาโนเมตร
ก่อนที่จะเรียงลำดับ GMD ถูกจัดเรียงในการไหลเวียนของ Synergy iCyt
cytometer พร้อมกับหัวฉีด 126 ไมโครเมตรและเส้นเลเซอร์ 488 และ
561 นาโนเมตรสำหรับการกระตุ้นของ yEGFP และ SYTOX สีส้มตามลำดับ.
GMD บุคคลที่แยกได้จากทุกประเภทชุบเข้มงวดสูงถูก
วางไว้บนแผ่นตัวบ่งชี้ M. luteus ( 0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร-1 M. luteus, 10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร
เชื้อ E. coli Ivy, เดกซ์โทรส 0.5%, กาแลคโต 1.5%, 0.71% Difco YNB โดยไม่ต้อง
(NH4) 2SO4, 0.25% (NH4) 2SO4, 0.077% CSM-ยู) และ เติบโตขึ้น 4 วันที่
อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส อาณานิคมรัศมีขึ้นรูปที่แพร่หลายถูกเลือกสำหรับการเรียงลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หน้าจอแรก หน้าจอแรกรวม 2 นัดต่อเนื่อง
การเรียงลำดับ ( ดูรูปรายละเอียดสนับสนุนข้อมูล 4 ) การ gmds
โตในสื่อเหนี่ยวนำที่มี ivyc ชำระ 30 ° C
19 ชั่วโมงหลังจากที่พวกเขามีขนาดกว่า 20 μเมตรตาข่ายแล้ว
หายจากตะแกรงใน PBS สด sytox สีส้ม ( ชีวิต
เทคโนโลยี , USA ) คือเพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย 100 nm
เพียงก่อนที่จะเรียงลำดับ GMD ถูกเรียงบน icyt Synergy ไหล
ใช้โมโนพร้อมกับ 126 μ M หัวฉีดและสายเลเซอร์ของแล้ว
561 nm สำหรับความตื่นเต้นของ yegfp และ sytox ส้ม ตามลำดับ
GMD บุคคลแยกจากสูง stringency ชุบประเภทถูกวางไว้บนตัวแผ่น luteus
เมตร ( 0.5 mg mL − 1 เมตร luteus 10 μ g / ml
E . coli ไอวี่ , 0.5 % dextrose , 1.5% กาแลคโตส 0.71 % difco ynb โดยไม่
( NH4 ) 2so4 0.25 % ( NH4 ) 2so4 0.077 % , CSM −ปานเจริญ ) และโต 4 วัน ที่ 30 องศา รัศมีรูป
แพร่หลายอาณานิคมสุ่มของ