Bone marrow mesenchymal stem cell c

Bone marrow mesenchymal stem cell culture and identification

Bone marrow mesenchymal stem cells were obtained from eight Fischer 344 rats (male, 7 weeks of age, specific pathogen free, acquired from the Laboratory Animal Centre of Jilin University, China). Following anesthesia with a lethal dose of diethyl ether and under sterile conditions, the bilateral femurs and tibias were separated, the bone ends were cut, and the bone marrow cavities were rinsed with a 5-mL syringe filled with Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM; Gibco, New York, NY, USA). The rinse solution was centrifuged at 1,500 r/min at 4°C for 10 minutes, and the supernatant was discarded. The pelleted cells were resuspended in DMEM containing 10% fetal bovine serum (Gibco), 100 U/mL penicillin, and 100 mg/mL streptomycin. The cells were then incubated in a T-75 flask in an incubator containing 5% CO2 at 37°C with 100% humidity. After 4 days, the first medium change was performed. Non-adherent cells were gently removed by the medium change. From then on, the medium was replaced once every 2 days until cells reached 80% confluency. The cultures were treated with trypsin-ethylenediamine tetraacetic acid solution (0.25% trypsin, 0.02% ethylenediamine tetraacetic acid; Sigma, St. Louis, MO, USA), and were then harvested and diluted to 1:2 per passage for further expansion (Zhang and Lv, 2013). To identify bone marrow mesenchymal stem cells, 80% confluent cells were induced towards osteogenesis for 3 weeks with osteogenic medium, which was supplemented with 0.1 μmol/L dexamethasone, 50 mg/L ascorbic acid, and 10 mmol/L beta glycerin sodium phosphate. Adipogenic induction was also performed for 3 weeks using an adipogenic medium that included 0.25 μmol/L dexamethasone, 50 μmol/L indomethacin, 0.5 mmol/L 3-isobutyl-methyl xanthine, and 10 mg/L insulin. The effects of the osteogenic and adipogenic induction were observed with separate alizarin red and oil red O staining (Gambardella et al., 2011; James, 2013; Kollmer et al., 2013; El-Mahgoub et al., 2014).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรม mesenchymal สเต็มเซลล์ไขกระดูกและรหัส

ไขกระดูก mesenchymal สเต็มเซลล์ได้รับจากตื่นแปดหนู 344 (ชาย 7 สัปดาห์อายุ การศึกษาอิสระ ได้รับจากห้องปฏิบัติการสัตว์ศูนย์ของมหาวิทยาลัยจี๋หลิน จีน) ต่อยาด้วยยายุทธภัณฑ์ diethyl อีเทอร์ และภาย ใต้เงื่อนไขที่ใส่ ระหว่าง femurs และ tibias ได้แบ่ง กระดูกปลายถูกตัด และผุไขกระดูกถูก rinsed ด้วยเข็มฉีดยา 5 mL ที่เต็มไป ด้วยของดุลเบกโกแก้ไขอีเกิลของสื่อ (DMEM Gibco, New York, NY, USA) โซลูชันการล้างถูก centrifuged ที่ r 1500 นาทีที่ 4° C 10 นาที และ supernatant ถูกละทิ้ง เซลล์ pelleted ถูก resuspended ใน DMEM ที่ประกอบด้วย 10% ครรภ์วัวซีรั่ม (Gibco), 100 U/mL ยาเพนนิซิลลิน และ streptomycin 100 mg/mL เซลล์ได้แล้ว incubated ในหนาว T-75 ในการบ่มเพาะวิสาหกิจประกอบด้วย 5% CO2 ที่ 37° C ความชื้น 100% ด้วย หลังจาก 4 วัน มีดำเนินการเปลี่ยนแปลงขนาดแรก เซลล์ไม่มี adherent ถูกออกเบา ๆ จากการเปลี่ยนแปลงขนาด จากนั้น สื่อถูกแทนหนึ่งครั้งทุก ๆ 2 วันจนเซลล์ถึง 80% confluency วัฒนธรรมได้รับการรักษา ด้วยทริปซิน-ethylenediamine tetraacetic กรดโซลูชั่น (0.25% ทริปซิน 0.02% ethylenediamine tetraacetic กรด ซิก St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา), และได้เก็บเกี่ยวผลผลิต แล้วทำให้เจือจางเป็น 1:2 ต่อเส้นทางต่อขยาย (เตียวและ Lv, 2013) ระบุไขกระดูก mesenchymal สเต็มเซลล์ เซลล์ confluent 80% นำไป osteogenesis 3 สัปดาห์กับกลาง osteogenic ซึ่งถูกเสริม ด้วย 0.1 μmol/L dexamethasone กรดแอสคอร์บิค 50 mg/L และกลีเซอรีน 10 mmol/L เบต้าโซเดียมฟอสเฟต เหนี่ยวนำ Adipogenic ยังทำการใช้สื่อการ adipogenic ที่รวม 0.25 dexamethasone μmol/L 50 μmol/L indomethacin 0.5 mmol/L 3-isobutyl-methyl xanthine สัปดาห์ที่ 3 และอินซูลิน 10 มิลลิกรัม/L ผลของการเหนี่ยวนำ osteogenic และ adipogenic สุภัค alizarin แยกสีแดงและสีแดงน้ำมัน O ย้อมสี (Gambardella et al., 2011 James, 2013 Kollmer et al., 2013 El-Mahgoub et al., 2014)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไขกระดูกวัฒนธรรมเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal และการตรวจไขกระดูกเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal ที่ได้รับจากแปดฟิชเชอร์ 344 หนู (ชาย, 7 สัปดาห์ของอายุที่เฉพาะเจาะจงเชื้อโรคฟรีที่ได้มาจากสัตว์ศูนย์ห้องปฏิบัติการของมหาวิทยาลัยจี๋หลิน, จีน) ต่อไปนี้การระงับความรู้สึกด้วยยาพิษของอีเทอร์และภายใต้เงื่อนไขหมัน femurs ทวิภาคีและ tibias ถูกแยกออกที่ปลายกระดูกถูกตัดและกระดูกโพรงไขกระดูกถูกล้างด้วยเข็มฉีดยา 5 มิลลิลิตรเต็มไปด้วย Dulbecco ของการปรับเปลี่ยนขนาดของนกอินทรี (DMEM; Gibco, New York, NY, USA) การแก้ปัญหาที่ได้รับการล้างหมุนเหวี่ยงที่ 1,500 รอบ / นาทีที่ 4 ° C เป็นเวลา 10 นาทีและใสถูกทิ้ง เซลล์เม็ดถูก resuspended ใน DMEM ที่มี 10% ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ (Gibco) 100 U / ml penicillin, และ 100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร streptomycin เซลล์ที่ถูกบ่มแล้วใน T-75 ขวดในตู้อบที่มี 5% CO2 ที่ 37 ° C ที่มีความชื้น 100% 4 วันหลังจากการเปลี่ยนแปลงขนาดกลางเป็นครั้งแรกที่ดำเนินการ เซลล์ที่ไม่สานุศิษย์ถูกถอดออกมาเบา ๆ โดยการเปลี่ยนแปลงขนาดกลาง จากนั้นสื่อก็ถูกแทนที่หนึ่งครั้งในทุก 2 วันจนกว่าเซลล์ถึง 80% confluency วัฒนธรรมที่ได้รับการรักษาด้วยสารละลายกรด tetraacetic trypsin-ethylenediamine (0.25% trypsin 0.02% กรด ethylenediamine tetraacetic; Sigma, เซนต์หลุยส์, MO, USA) และได้รับการเก็บเกี่ยวแล้วและลดลงเหลือ 1: 2 ต่อทางสำหรับการขยายตัวต่อไป (Zhang และเลเวล, 2013) เพื่อระบุกระดูกเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal 80% เซลล์ที่ไหลมารวมกันถูกชักนำไปสู่ ​​osteogenesis 3 สัปดาห์กับสื่อกระดูกซึ่งได้รับการเสริมด้วย 0.1 ไมโครโมล / ลิตร dexamethasone 50 mg / L วิตามินซีและ 10 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมกลีเซอรีนเบต้าฟอสเฟต เหนี่ยวนำ Adipogenic ยังถูกดำเนินการเป็นเวลา 3 สัปดาห์โดยใช้สื่อ adipogenic รวม 0.25 ไมโครโมล / ลิตร dexamethasone 50 ไมโครโมล / ลิตร indomethacin 0.5 mmol / L xanthine 3 isobutyl-methyl, และ 10 mg / L อินซูลิน ผลกระทบของกระดูกและเหนี่ยวนำ adipogenic พบกับ Alizarin แยกสีแดงและน้ำมันโอสีแดงย้อมสี (Gambardella, et al, 2011. เจมส์, 2013; Kollmer, et al, 2013. El.-Mahgoub และคณะ, 2014)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ไขกระดูกวัฒนธรรมและตัว

มีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ไขกระดูกได้จากแปด Fischer 344 หนู ( ชาย 7 สัปดาห์ของอายุ โดยเฉพาะเชื้อโรคฟรี ที่ได้มาจากสัตว์ทดลองของศูนย์มหาวิทยาลัยจี๋หลิน , จีน ) ต่อไปนี้ยาชาด้วยพิษของยาของอีเทอร์ และภายใต้สภาพปลอดเชื้อ , กระดูกขาทวิภาคีและ tibias แยกจากกันแล้วกระดูกปลายถูกตัด และกระดูกผุ คือล้างด้วย 5-ml เข็มเต็มไปด้วยดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ; gibco , New York , NY , USA ) ล้างในสารละลายไฟฟ้าที่ 1500 r / min อุณหภูมิ 4 องศา C เป็นเวลา 10 นาที และนำมันทิ้ง ในเซลล์มีเม็ด resuspended ในซีรั่มวัว dmem ที่มี 10% fetal ( gibco ) 100 U / ml เพนิซิลลินและ 100 มก. / มล. เหมือนเคย . เซลล์แล้วบ่มใน t-75 ขวดในตู้อบที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5% ที่ 37 ° C มีความชื้น 100% หลังจาก 4 วัน เปลี่ยนกลางก่อนกำหนด ไม่ติดเซลล์ก็ค่อยๆเอาออกจากเปลี่ยนกลาง หลังจากนั้น อาหารก็ถูกแทนที่ทุก 2 วัน จนกว่าเซลล์ถึง 80% confluency .วัฒนธรรมที่ได้รับการรักษาด้วยเอนไซม์ลลีนไดแอม tetraacetic สารละลายกรด ( 0.25% มีค่า 0.02 เปอร์เซ็นต์ลลีนไดแอม tetraacetic กรด ; Sigma , St . Louis , MO , USA ) และได้เก็บเกี่ยวและเจือจางใน 1 : 2 ต่อผ่านสำหรับการขยายตัวต่อไป ( Zhang และ LV , 2013 ) ระบุมีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ไขกระดูก ,เซลล์กระจู๋กระจี๋ 80% ถูกชักนำไปสู่โรคเป็นเวลา 3 สัปดาห์ ด้วย osteogenic ขนาดกลางซึ่งถูกเสริมด้วยμ 0.1 โมลต่อลิตร dexamethasone , 50 มก. / ล. และกรดแอสคอร์บิค และ 10 mmol / L กลีเซอรีนโซเดียมเบตาฟอสเฟต การ adipogenic ยังดำเนินการสำหรับสัปดาห์ที่ 3 ใช้ adipogenic ขนาดกลางรวม 0.25 μ mol / L dexamethasone , 50 μ mol / L อินโด , 0.5 มิลลิโมล / ลิตรของ 3-isobutyl-methyl ,และ 10 มิลลิกรัมต่อลิตร อินซูลิน ผลของ osteogenic adipogenic เหนี่ยวและพบว่ามีสีแดงอะลิซารินแยกและน้ำมันสีแดง O staining ( gambardella et al . , 2011 ; เจมส์ 2013 ; kollmer et al . , 2013 ; เอล mahgoub et al . , 2010 )