2.4. Preparation of differentiation

2.4. Preparation of differentiation media and plant regeneration
Nine different types of differentiation media were tested and
labeled as D1–D9 (Table 2). For all nine media, MS salts were combined
with 30 g/l sucrose and 6.5 g/l agar and pH was adjusted
to 5.9–6.0. Five levels of BAP were tested (0.1, 0.2, 0.5, 1.0,
2.0 mg/l) along with four levels of NAA (0.01, 0.1, 0.2, 0.5 mg/l).
After autoclaving at 121 ◦C and 1.1 kg/cm2 pressure for 20 min,
40 ml aliquots of media were poured into 100 ml Erlenmeyer
flasks.
In order to easily identify the origin of calli in this phase of
the experiment, only calli produced in induction medium supplemented
with 0.5 mg/l 2,4-D and 1.0 mg/l BAP (I1) were used for
differentiation. Calli were subcultured 2–3 times for one month
each round on the same medium used for callus multiplication,
until calli numbers were sufficient for the regeneration experiment.
The calli were divided into small pieces (2 cm × 2 cm), then
one piece was transferred to each flask of differentiation media
mentioned. Flasks were incubated under a 12 h photoperiod at
30–40 mol/m2/s provided by fluorescent 20W daylight lamps at
25 ± 1 ◦C for 30 d. A completely randomized design was used, with

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การจัดทำสื่อความแตกต่างและการฟื้นฟูโรงงานเก้าชนิดที่แตกต่างกันของสื่อความแตกต่างได้รับการทดสอบและระบุว่าเป็นD1-D9 (ตารางที่ 2) สำหรับทั้งเก้าสื่อเกลือ MS ร่วมกันกับ30 กรัม / ลิตรและน้ำตาล 6.5 กรัม / ลิตรและวุ้นพีเอชมีการปรับเพื่อ5.9-6.0 ห้าระดับของ BAP ได้มีการทดสอบ (0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 mg / l) พร้อมด้วยสี่ระดับของ NAA (0.01, 0.1, 0.2, 0.5 mg / l). หลังจากนึ่งฆ่าเชื้อที่ 121 ◦Cและ 1.1 กก. / cm2 ดันเป็นเวลา 20 นาที, 40 มล. aliquots ของสื่อถูกเทลงใน 100 มล. Erlenmeyer ขวด. เพื่อที่จะสามารถระบุที่มาของแคลลัสในขั้นตอนของการนี้การทดลองเพียงแคลลัสที่ผลิตในกลางเหนี่ยวนำเสริม0.5 mg / l 2,4- D และ 1.0 mg / l BAP (I1) ถูกนำมาใช้ในการสร้างความแตกต่าง แคลลัสได้รับการเลี้ยง 2-3 ครั้งสำหรับหนึ่งเดือนรอบในแต่ละสื่อเดียวกับที่ใช้สำหรับการคูณแคลลัส, จนกระทั่งตัวเลขแคลลัสมีเพียงพอสำหรับการทดสอบการฟื้นฟู. แคลลัสที่ถูกแบ่งออกเป็นชิ้นเล็ก ๆ (2 ซม. × 2 ​​ซม.) จากนั้นหนึ่งชิ้นเป็นโอนไปยังแต่ละขวดของสื่อความแตกต่างที่กล่าวถึง ขวดถูกบ่มภายใต้แสง 12 ชั่วโมงที่30-40 mol / m2 / s ให้โดยนีออน 20W โคมไฟในเวลากลางวันที่25 ± 1 ◦C 30 d การออกแบบที่สมบูรณ์แบบสุ่มถูกนำมาใช้กับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การเตรียมการของสื่อที่แตกต่าง และ ต้นใหม่
9 ชนิดที่แตกต่างกันของสื่อและการทดสอบ
ป้ายเป็น D1 - D9 ( ตารางที่ 2 ) ทั้งหมดเก้าสื่อ , นางสาวเกลือร่วม
30 กรัมต่อลิตรและปริมาณ 6.5 กรัมต่อลิตรและ pH ให้อยู่ในระดับที่เหมาะสมต่อการเติบโตของ
–จาก ห้าระดับของแบบทดสอบ ( 0.1 , 0.2 , 0.5 , 1.0 ,
2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ) พร้อมกับสี่ระดับของ NAA ( 0.01 , 0.1 , 0.2 , 0.5 mg / l )
หลังจากอัตราส่วนโฟกัสที่ 121 องศาเซลเซียส และ◦ 1.1 kg / cm2 แรงดัน 20 นาที
40 ml เฉยๆของสื่อที่ถูกเทลงไปในขวด 100 ml เออร์เลนเมเยอร์
.
เพื่อที่จะสามารถระบุแหล่งที่มาของแคลลัสในขั้นตอนของการทดลองนี้
6 วันเท่านั้นที่ผลิตในสื่อชักนำเสริม
0.5 มก. / ล. และ 2 , 4-D , 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร BAP ( i0 ) ใช้สำหรับ
ความแตกต่าง . แคลลัส subcultured 2 – 3 ครั้งในหนึ่งเดือน
แต่ละรอบในวันเดียวกัน ขนาดกลาง ใช้สำหรับเลี้ยงแคลลัสคูณ
จนกว่าตัวเลขที่เพียงพอสำหรับการทดลอง
ระดับแบ่งออกเป็นชิ้นเล็ก ๆ 2 cm × 2 ซม. ) แล้ว
ชิ้นหนึ่งถูกย้ายไปแต่ละขวดของความแตกต่างของสื่อ
กล่าว ขวดถูกบ่มภายใต้แสงที่ 12 H
30 – 40 โมล / ตารางเมตร / s โดยหลอดไฟเรืองแสงที่
เครื่องตอนกลางวัน25 ± 1 ◦ C 30 D . CRD ใช้กับ