Gill V-ATPase activity in freshwate

Gill V-ATPase activity in freshwater- versus salinity-acclimated crabs

Assays of gill microsomal ATPase activity, performed using up to 20 min pre-incubation with 0.2 to 1.5 μg alamethicin/μg protein, revealed sealed vesicles in the fractions from crabs at all salinity/time combinations. Activity assays were thus conducted using 1.0 μg alamethicin/μg protein without pre-incubation, a condition that resulted in maximum orthovanadate- and bafilomycin-insensitive ATPase activities, irrespective of the salinity/time combination.

The effect of pH on the gill V-ATPase activity of crabs held in fresh water or acclimated to 21‰ salinity for 10 days is shown in Fig. 1A. Activity was negligible at pH 6.5, increasing markedly up to pH 7.5 then abruptly decreasing at higher values to about 50% and 35% of maximum activity at pH 8.0 and 8.5, respectively, under both conditions. Gill V-ATPase activities in crabs at all other salinity/time combinations showed similar pH profiles, with the same optimal pH (7.5) (data not shown).

The stimulation by ATP and Mg2+ (each at saturating concentrations of the other) of V-ATPase activity in D. pagei maintained in fresh water or acclimated for 10 days to 21‰ salinity is given in Fig. 1B and C, respectively. Activity was stimulated by ATP ( Fig. 1B) following simple saturation curves, with maximum velocities of 26.5 ± 2.1 U mg− 1 and 8.4 ± 0.7 U mg− 1 in the freshwater- and 21‰-acclimated crabs, respectively. The apparent affinity for ATP in crabs from fresh water (KM = 4.2 ± 0.3 mmol L− 1) was 4.4-fold less than that for 21‰-acclimated crabs (KM = 0.96 ± 0.08 mmol L− 1). Magnesium ions ( Fig. 1C) stimulated the V-ATPase from freshwater crabs to V = 27.9 ± 2.5 U mg− 1 with KM = 0.92 ± 0.09 mmol L− 1; in the 21

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรม V-ATPase เหงือก ในปลา- เมื่อเทียบ กับปูเค็ม acclimatedAssays เหงือก microsomal ATPase กิจกรรม กระทำโดยใช้บ่มก่อน 20 นาทีด้วย 0.2-1.5 μg alamethicin/μg โปรตีน เปิดเผยปิดผนึกอสุจิบางส่วนจากปูที่ชุดเค็ม/เวลาทั้งหมด กิจกรรม assays ได้จึงดำเนินการใช้โปรตีน alamethicin/μg μg 1.0 ไม่ฟักตัวก่อน เงื่อนไขที่ทำให้เกิดในสูงสุด orthovanadate และ bafilomycin-ซ้อน ATPase กิจกรรม ไม่รวมเค็ม/เวลาแสดงผลของ pH เหงือก V-ATPase กิจกรรมของปูในน้ำจืด หรือ acclimated เพื่อ 21‰ เค็ม 10 วันใน Fig. 1A กิจกรรมเป็นระยะที่ pH 6.5 เพิ่มขึ้นอย่างเด่นชัดถึง pH 7.5 แล้วทันทีจุดค่าสูงขึ้นประมาณ 50% และ 35% ของกิจกรรมสูงสุดที่ pH 8.0 และ 8.5 ตามลำดับ ภายใต้เงื่อนไขทั้งสอง เหงือกกิจกรรม V-ATPase ในปูเค็ม/เวลาชุดอื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นว่าค่า pH คล้ายกัน มีค่า pH เหมาะสมเดียวกัน (7.5) (ข้อมูลไม่แสดง)การกระตุ้น โดย ATP และ Mg2 + (แต่ละที่ความเข้มข้นของอื่น ๆ saturating) V-ATPase กิจกรรมใน D. pagei เก็บในน้ำจืด หรือ acclimated สำหรับ 10 วัน 21‰ เค็มได้ใน Fig. 1B และ C ตามลำดับ กิจกรรมที่ถูกกระตุ้น โดย ATP (Fig. 1B) ต่อเส้นโค้งอิ่มตัวง่าย มีตะกอนสูงสุดของ 26.5 ± 2.1 U mg− 1 และ 8.4 ± 0.7 U mg− 1 ในปูน้ำจืด - และ 21‰-acclimated ตามลำดับ ความสัมพันธ์ที่ชัดเจนสำหรับ ATP ในปูจากน้ำ (KM = 4.2 ± 0.3 mmol L− 1) ได้ 4.4-fold น้อยกว่าที่สำหรับปู 21‰ acclimated (KM = 0.96 ± 0.08 mmol L− 1) แมกนีเซียมประจุ (Fig. 1C) ถูกกระตุ้น V-ATPase จากปูน้ำจืดให้ V = 27.9 ± 2.5 U mg− 1 กับ KM = 0.92 ± 0.09 mmol L− 1 ใน 21

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิลล์กิจกรรม V-ATPase ใน freshwater- เมื่อเทียบกับปูเค็ม-acclimated ตรวจเหงือกไมโครกิจกรรม ATPase, ดำเนินการโดยใช้ถึง 20 นาทีก่อนการบ่มด้วย 0.2-1.5 ไมโครกรัม alamethicin / ไมโครกรัมโปรตีนเปิดเผยถุงปิดผนึกในเศษส่วนจากปูที่ระดับความเค็มทั้งหมด / เวลารวมกัน การวิเคราะห์กิจกรรมได้ดำเนินการจึงใช้ 1.0 ไมโครกรัม alamethicin / ไมโครกรัมโปรตีนโดยไม่ต้องก่อนการบ่มเงื่อนไขที่ส่งผลสูงสุด orthovanadate- และกิจกรรม ATPase สาร bafilomycin ตายโดยไม่คำนึงถึงความเค็ม / ครั้งรวมกัน. ผลของ pH ต่อเหงือก V-ATPase กิจกรรมของปูที่จัดขึ้นในน้ำจืดหรือปรับตัว 21 ‰ความเค็มเป็นเวลา 10 วันมีการแสดงในรูป 1A กิจกรรมได้เล็กน้อยที่ pH 6.5 ที่เพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดถึงค่า pH 7.5 แล้วลดลงทันทีที่ค่าสูงขึ้นประมาณ 50% และ 35% ของกิจกรรมสูงสุดที่ pH 8.0 และ 8.5 ตามลำดับภายใต้เงื่อนไขที่ทั้งสอง กิลล์กิจกรรม V-ATPase ในปูที่ระดับความเค็มอื่น ๆ / รวมกันครั้งแสดงให้เห็นว่ารูปแบบค่า pH ที่คล้ายกันที่มีค่า pH ที่เหมาะสมเดียวกัน (7.5) (ไม่ได้แสดงข้อมูล). กระตุ้นโดยเอทีพีและ Mg2 + (แต่ละที่ความเข้มข้น saturating ของอื่น ๆ ) ของวี กิจกรรม ATPase นาใน pagei ดียังคงอยู่ในน้ำจืดหรือปรับตัวเป็นเวลา 10 วันถึง 21 ‰ความเค็มจะได้รับในรูป 1B และ C ตามลำดับ กิจกรรมที่ถูกกระตุ้นโดยเอทีพี (รูป. 1B) ตามเส้นโค้งความอิ่มตัวของสีที่เรียบง่ายด้วยความเร็วสูงสุด 26.5 ± 2.1 U mg- ที่ 1 และ 8.4 ± 0.7 U mg- 1 ใน freshwater- และ 21 ‰ปู -acclimated ตามลำดับ ความสัมพันธ์ที่ชัดเจนสำหรับเอทีพีในปูจากน้ำจืด (KM = 4.2 ± 0.3 มิลลิโมล L- 1) เป็น 4.4 เท่าต่ำกว่า 21 ‰ปู -acclimated (KM = 0.96 ± 0.08 มิลลิโมล L- 1) แมกนีเซียมไอออน (. รูปที่ 1C) กระตุ้น V-ATPase จากปูน้ำจืดที่จะ V = 27.9 ± 2.5 U mg- 1 KM = 0.92 ± 0.09 มิลลิโมล L- 1; ใน 21

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิล v-atpase กิจกรรมในน้ำจืดกับน้ำให้ปู

) เหงือกตับ ATPase กิจกรรม โดยใช้ได้ถึง 20 นาทีก่อนการบ่มด้วย 0.2 1.5 กรัม / กรัมโปรตีนμลาเมตทิซินμเปิดเผยปิดผนึกเล็กในเศษส่วนจากปูที่ผสมน้ำ / เวลาทั้งหมด หรือกิจกรรม ) จึงดำเนินการใช้ 1.0 กรัม / กรัมโปรตีนμลาเมตทิซินμโดยไม่ก่อนระยะเวลาเงื่อนไขที่ทำให้เกิด orthovanadate - สูงสุด และ bafilomycin ตายด้าน ATPase กิจกรรมโดยไม่คํานึงถึงความเค็ม / เวลารวมกัน

ผลของ pH ต่อเหงือกของปู v-atpase กิจกรรมที่จัดขึ้นในน้ำจืดหรือเค็ม‰ acclimated 21 10 วันจะแสดงในรูปที่ 8 . กิจกรรมสำคัญที่ pH 6.5 , เพิ่มขึ้นอย่างเด่นชัดขึ้น pH 75 แล้วชะงักการลดลงที่สูงค่าประมาณ 50 % และ 35 % ของกิจกรรมสูงสุดที่ pH 8.0 และ 8.5 ตามลำดับ ภายใต้เงื่อนไขทั้งสอง . เหงือกปูที่ v-atpase กิจกรรมในชุดทั้งหมดความเค็ม / เวลาอื่น ๆ พบสภาพ pH คล้าย , pH ที่เหมาะสมเดียวกัน ( 7.5 ) ( ข้อมูลไม่แสดง ) .

และการกระตุ้นโดยเอทีพี mg2 ( แต่ละที่ความเข้มข้นสูงของอื่น ๆ ) กิจกรรม v-atpase ใน D . pagei รักษาในน้ำสดหรือแบบ 10 วัน 21 ความเค็ม‰จะได้รับในรูปที่ 1 บี และซี ตามลำดับ กิจกรรมที่ถูกกระตุ้นโดยเอทีพี ( รูปที่ 1A ) ตามเส้นโค้งความอิ่มตัวง่ายกับความเร็วสูงสุด 26.5 ± 2.1 u มก. − 1 และ 8.4 ± 07 u มก. − 1 ในน้ำจืด - 21 ‰ - แบบปู ตามลำดับ affinity ชัดเจนสำหรับ ATP ในปูจากแหล่งน้ำ ( km = 4.2 ± 0.3 มิลลิโมล L − 1 ) 4.4-fold น้อยกว่า 21 ‰ - ให้ปู ( km = 0.96 ± 0.08 มิลลิโมล L − 1 ) แมกนีเซียมไอออน ( ภาพที่ 1c ) กระตุ้น v-atpase จากปูน้ำจืดให้ V = ถึง± 2.5 U มก. − 1 km = 0.92 ± 0.09 มิลลิโมล L − 1 ; ใน 21