Bioinsecticidal activity of a novel

Bioinsecticidal activity of a novel Kunitz trypsin inhibitor from Catanduva (Piptadenia moniliformis) seeds
Abstract
The present study aims to provide new in vitro and in vivo biochemical information about a novel Kunitz trypsin inhibitor purified from Piptadenia moniliformis seeds. The purification process was performed using TCA precipitation, Trypsin–Sepharose and reversed-phase C18 HPLC chromatography. The inhibitor, named PmTKI, showed an apparent molecular mass of around 19 kDa, visualized by SDS-PAGE, which was confirmed by mass spectrometry MALDI-ToF demonstrating a monoisotopic mass of 19.296 Da. The inhibitor was in vitro active against trypsin, chymotrypsin and papain. Moreover, kinetic enzymatic studies were performed aiming to understand the inhibition mode of PmTKI, which competitively inhibits the target enzyme, presenting Ki values of 1.5 × 10−8 and 3.0 × 10−1 M against trypsin and chymotrypsin, respectively. Also, the inhibitory activity was assayed at different pH ranges, temperatures and reduction environments (DTT). The inhibitor was stable in all conditions maintaining an 80% residual activity. N-terminal sequence was obtained by Edman degradation and the primary sequence presented identity with members of Kunitz-type inhibitors from the same subfamily. Finally after biochemical characterization the inhibitory effect was evaluated in vitro on insect digestive enzymes from different orders, PmTKI demonstrated remarkable activity against enzymes from Anthonomus grandis (90%), Plodia interpuncptella (60%), and Ceratitis capitata (70%). Furthermore, in vivo bioinsecticidal assays of C. capitata larvae were also performed and the concentration of PmTKI (w/w) in an artificial diet required to LD50 and ED50 larvae were 0.37 and 0.3% respectively. In summary, data reported here shown the biotechnological potential of PmTKI for insect pest control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรม Bioinsecticidal ของสารยับยั้งทริปซิน Kunitz นวนิยายจากเมล็ด Catanduva (Piptadenia moniliformis)บทคัดย่อจุดมุ่งหมายของการศึกษาปัจจุบันให้ใหม่ในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลองชีวเคมีข้อมูลเกี่ยวกับสารยับยั้งการทริปซิน Kunitz นวนิยายบริสุทธิ์จาก Piptadenia moniliformis เมล็ด กระบวนการฟอกทำใช้ TCA ฝน ทริปซิน – Sepharose และ chromatography C18 HPLC ขั้นตอนย้อนกลับ สารยับยั้ง ชื่อ PmTKI แสดงมวลโมเลกุลความชัดเจนของ kDa ประมาณ 19, visualized โดย SDS-หน้า ซึ่งได้รับการยืนยัน โดยรเมท MALDI ToF เห็น monoisotopic เป็น มวลของดา 19.296 ผลที่ถูกใช้งานในทริปซิน chymotrypsin และพาเพอิน นอกจากนี้ ศึกษาเอนไซม์ในระบบเดิม ๆ ถูกดำเนินมุ่งเข้าใจโหมดการยับยั้งของ PmTKI ซึ่งสามารถแข่งขันได้ยับยั้งเอนไซม์เป้าหมาย นำเสนอค่า Ki 1.5 × 10−8 และ 3.0 × 10−1 M กับทริปซินและ chymotrypsin ตามลำดับ ยัง ลิปกลอสไขกิจกรรมถูก assayed ที่ช่วงค่า pH ที่แตกต่างกัน อุณหภูมิ และสภาพแวดล้อมลด (DTT) สารยับยั้งการมีเสถียรภาพในเงื่อนไขทั้งหมดที่รักษากิจกรรม 80% ส่วนที่เหลือ เทอร์มินัล N ลำดับกล่าว โดย Edman สลายตัวและอัตลักษณ์หลักลำดับที่นำเสนอกับสมาชิกของ Kunitz ชนิด inhibitors จาก subfamily เดียว ในที่สุด หลังจากที่ได้ประเมินในหลอดบนเอนไซม์ช่วยย่อยอาหารแมลงจากใบสั่งต่าง ๆ ชีวเคมีจำแนกผลลิปกลอสไข PmTKI แสดงกิจกรรมโดดเด่นกับเอนไซม์จากแกรนดิส Anthonomus (90%), Plodia interpuncptella (60%), และ Ceratitis capitata (70%) นอกจากนี้ ยังดำเนิน assays C. capitata ตัวอ่อน bioinsecticidal ในสัตว์ทดลองและความเข้มข้นของ PmTKI (w/w) ในอาหารเทียมเป็นต้องตัวอ่อน LD50 และ ED50 ได้ 0.37 และ 0.3% ตามลำดับ ในสรุป ข้อมูลรายงานนี่แสดงศักยภาพ biotechnological ของ PmTKI ในการควบคุมแมลงศัตรูพืช

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรมของ Bioinsecticidal ยับยั้ง trypsin Kunitz นวนิยายจาก Catanduva (Piptadenia moniliformis) เมล็ด
บทคัดย่อ
การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อให้ใหม่ในหลอดทดลองและในร่างกายข้อมูลเกี่ยวกับชีวเคมียับยั้ง trypsin Kunitz นวนิยายบริสุทธิ์จากเมล็ด Piptadenia moniliformis กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ได้รับการดำเนินการโดยใช้การตกตะกอน TCA, Trypsin-Sepharose และย้อนกลับเฟส C18 โค HPLC ยับยั้งชื่อ PmTKI แสดงให้เห็นว่ามวลโมเลกุลประมาณ 19 กิโลดาลตันมองเห็นโดยวิธี SDS-PAGE ซึ่งได้รับการยืนยันจากมวลสาร MALDI-ToF แสดงให้เห็นถึงมวล monoisotopic ของ 19.296 ดา ยับยั้งอยู่ในหลอดทดลองที่ใช้งานกับ trypsin, chymotrypsin และปาเปน นอกจากนี้การศึกษาเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวของเอนไซม์ได้ดำเนินการเล็งที่จะเข้าใจโหมดการยับยั้งของ PmTKI ซึ่งสามารถแข่งขันยับยั้งเอนไซม์เป้าหมายนำเสนอค่า Ki 1.5 × 10-8 และ 3.0 × 10-1 M กับการสกัดเอนไซม์ตามลำดับ นอกจากนี้กิจกรรมการยับยั้งได้รับการวิเคราะห์ที่ช่วงค่า pH ที่แตกต่างกัน, อุณหภูมิและสภาพแวดล้อมการลด (DTT) ยับยั้งมีเสถียรภาพในทุกสภาวะการรักษา 80% กิจกรรมที่เหลือ ลำดับ n- ขั้วได้จากการย่อยสลาย Edman และลำดับหลักที่นำเสนอตัวตนกับสมาชิกของสารยับยั้ง Kunitz ชนิดจากอนุวงศ์เดียวกัน ในที่สุดหลังจากที่ลักษณะทางชีวเคมีผลยับยั้งถูกประเมินในหลอดทดลองเกี่ยวกับเอนไซม์ย่อยอาหารแมลงจากคำสั่งซื้อที่แตกต่างกัน, PmTKI แสดงให้เห็นถึงกิจกรรมที่น่าทึ่งกับเอนไซม์จาก Anthonomus grandis (90%), Plodia interpuncptella (60%) และ Ceratitis capitata (70%) นอกจากนี้ในการตรวจร่างกาย bioinsecticidal ซีตัวอ่อน capitata ถูกดำเนินการและความเข้มข้นของ PmTKI (ก / w) ในอาหารเทียมที่จำเป็นในการ LD50 และตัวอ่อน ED50 เป็น 0.37 และ 0.3% ตามลำดับ ในการสรุปข้อมูลที่รายงานที่แสดงที่นี่มีศักยภาพทางเทคโนโลยีชีวภาพของ PmTKI สำหรับการควบคุมแมลงศัตรูพืช

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรม bioinsecticidal ของนวนิยาย kunitz ยับยั้งเอนไซม์จาก Catanduva ( piptadenia moniliformis เมล็ด

) บทคัดย่อ การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อให้บริการใหม่ในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง ข้อมูลทางชีวเคมีที่เกี่ยวกับนิยาย kunitz ยับยั้งเอนไซม์บริสุทธิ์จาก piptadenia moniliformis เมล็ด กระบวนการผลิตการใช้ TCA ด้วย ,เกี่ยวข้อง–ทริป reversed-phase c18 HPLC โครมาโตกราฟี และชื่อ pmtki มีมวลโมเลกุลประมาณ 19 ชัดเจนว่าปรากฏการณ์โดย SDS-PAGE ซึ่งได้รับการยืนยันโดยมวลสารมา ดิ tof แสดงมวล monoisotopic ของ 19.296 ดา . และอยู่ในหลอดทดลองใช้งานกับเอนไซม์ไคโมทริปซิน , และนโยบาย นอกจากนี้จลนศาสตร์ของเอนไซม์ศึกษาการมุ่งมั่นที่จะเข้าใจและโหมดของ pmtki ซึ่งสามารถยับยั้งเอนไซม์เป้าหมาย เสนอกิค่า 1.5 × 10 −× 10 − 8 และ 3 1 m ต่อเอนไซม์ไคโมทริปซิน และ ตามลำดับ นอกจากนี้ ยังมีกิจกรรมการเจริญแตกต่างกันอ ซีรั่มที่ช่วงอุณหภูมิและสภาพแวดล้อมที่ลดลง ( DTT )และมีเสถียรภาพในการรักษาสภาพ 80% ส่วนที่เหลือกิจกรรม ลำดับของกรดอะมิโนที่ได้จากงูหัวกระโหลก และลำดับการเสนอเอกลักษณ์กับสมาชิกของ kunitz ประเภทสารยับยั้ง จาก subfamily เดียวกัน ในที่สุดหลังจากที่ทางชีวเคมีสมบัติยับยั้งผลทดสอบในหลอดทดลองเกี่ยวกับแมลงเอนไซม์ย่อยอาหารจากคำสั่งต่าง ๆpmtki แสดงกิจกรรมที่โดดเด่นกับเอนไซม์จาก anthonomus สัก ( 100% ) , plodia interpuncptella ( 60% ) และ ceratitis capitata ( 70% ) นอกจากนี้ ในร่างกาย bioinsecticidal ) ของ capitata ตัวอ่อนยังดำเนินการและความเข้มข้นของ pmtki ( w / w ) ในอาหารเทียมและต้อง ld50 ed50 ~ i ) 0.37 และ 0.3% ตามลำดับ กล่าวโดยสรุปข้อมูลที่รายงานมาแสดงศักยภาพทางเทคโนโลยีของ pmtki เพื่อควบคุมแมลงศัตรูพืช