Flower buds of the desired size (petals equal or slightly longer than
sepals and anthers with a faint purple tip), which contained more than
50% of microspores in the late unicellular stage, with amounts of mid
unicellular microspores and of bicellular pollen not exceeding 20% and
50% respectively, were harvested from young inflorescences in the
morning.
After being rinsed under tap water for 30 min, flower buds were
sprayed with 70% ethanol, then surface-sterilized in a 0.1% (w/v)
mercuric chloride containing 0.05% (v/v) Tween 20 and periodically agitated
for 12 min before three rinses in sterile distilled water for 5 min
each. Anthers isolated from one bud were placed on one Petri dish
(60 mm × 15 mm), with their inner part facing the sucrose-starvation
medium containing 0.37 Mmannitol, 10 mMCaCl2, 1 mMMgSO4·7H2O,
1 mM KNO3, 200 μM KH2PO4, 1 μM KI, 100 nM CuSO4·5H2O, and 0.5%
agar (pH 5.8). For the first seven days anthers were incubated in the
darkness at the temperature of 33 °C.
อาหารดอกไม้ขนาดระบุ (กลีบเล็กน้อยนานกว่า หรือเท่ากับsepals และเหมือนกับคำแนะนำสีม่วงอ่อน), ซึ่งมีอยู่มากกว่า50% ของ microspores ในระยะ unicellular สาย มีจำนวนของกลางunicellular microspores และละอองเกสร bicellular ไม่เกิน 20% และ50% ตามลำดับ ถูกเก็บเกี่ยวจากช่อเขียวอ่อนในการตอนเช้าหลังจากถูก rinsed ภายใต้น้ำประปาสำหรับ 30 นาที มีอาหารดอกไม้ฉีดพ่น ด้วย 70% เอทานอล แล้ว พื้นผิว-sterilized ใน 0.1% (w/v)คลอไรด์ mercuric ประกอบด้วย 0.05% (v/v) Tween 20 และเป็นระยะ ๆ นั้นกระตุ้นทำสำหรับ 12 นาทีก่อนสาม rinses ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ 5 นาทีละ แยกต่างหากจากดอกตูมหนึ่งเหมือนถูกวางบนจานเพาะเชื้อหนึ่ง(60 มม. × 15 มม.), กับส่วนภายในของพวกเขาหันซูโครสความอดอยากกลางประกอบด้วย 0.37 Mmannitol, 10 mMCaCl2, 1 mMMgSO4·7H2OKNO3 มม. 1, 200 μM KH2PO4, 1 μM KI, 100 nM CuSO4·5H2O และ 0.5%agar (pH 5.8) สำหรับเหมือนเจ็ดวันแรกถูก incubated ในการความมืดที่อุณหภูมิ 33 องศาเซลเซียส
การแปล กรุณารอสักครู่..