2.5. Antimicrobial activityThe mini

2.5. Antimicrobial activity

The minimal inhibitory concentration (MIC) of the EO and its fractions were determined using the micro-dilution broth method in 96-well microplates (Carvalho et al., 2011 and Petrolini et al., 2013). Samples were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) to a concentration of 8000 μg mL−1, followed by dilution in tryptic soy broth (TSB) for aerobic and Schaedler broth (Difco) supplemented which hemin (5.0 μg mL−1), and menadione (10.0 μg mL−1) for anaerobic microorganisms; the sample concentrations tested ranged from 400 to 0.195 μg mL−1. The final DMSO content was 4% (v/v), and this solution was used as a negative control. The inoculum was adjusted for each organism, to yield a cell concentration of 5 × 105 colony forming units per mL (CFU mL−1), according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2012a) guidelines (CLSI, 2012b). The 96-well microplates with the aerobic microorganisms were closed with a sterile plate sealer and incubated aerobically at 37 °C for 24 h. The anaerobic microorganisms were closed with a sterile plate sealer and incubated for 72 h in an anaerobic chamber, in 5–10% H2, 10% CO2, 80–85% N2 atmosphere, at 36 °C. After that, Resazurin (30 μL) in aqueous solution (0.01%) was added to the microplates, to indicate microorganism viability for MIC determination. Chlorhexidine dihydrochloride (CHD) was used as a positive control, and the concentrations ranged from 0.115 to 5.9 μg mL−1. The controls of sterility of TSB and Schaedler broths, control culture (inoculum), CHD, the EO, the EO fractions, and control DMSO were performed. The MIC values were determined as the lowest concentration of EO capable of inhibiting the growth of the microorganisms.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ฤทธิ์ต้านจุลชีพความเข้มข้นน้อยที่สุดยับยั้ง (MIC) ของ EO และเศษส่วนที่ได้รับการพิจารณาโดยใช้วิธีการน้ำซุปไมโครเจือจางใน 96 หลุม microplates (Carvalho et al., 2011 และ Petrolini et al., 2013) ตัวอย่างที่ละลายใน dimethyl sulfoxide (DMSO) กับความเข้มข้นของ 8000 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 ตามด้วยการลดสัดส่วนใน tryptic น้ำซุปถั่วเหลือง (TSB) สำหรับน้ำซุปแอโรบิกและ Schaedler (Difco) เสริมซึ่ง hemin (5.0 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1) และ menadione (10.0 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1) สำหรับจุลินทรีย์ที่ไม่ใช้ออกซิเจน; ความเข้มข้นของตัวอย่างทดสอบตั้งแต่ 400-.195 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 เนื้อหา DMSO สุดท้ายคือ 4% (v / v) และการแก้ปัญหานี้ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ หัวเชื้อที่ได้รับการตั้งค่าสำหรับแต่ละสิ่งมีชีวิตเพื่อให้มีความเข้มข้นของเซลล์ 5 × 105 อาณานิคมสร้างหน่วยต่อมิลลิลิตร (มล CFU-1) ตามที่คลินิกและสถาบันห้องปฏิบัติการ (CLSI, 2012a) แนวทาง (CLSI, 2012b) 96 ดี microplates กับจุลินทรีย์แอโรบิกที่ถูกปิดด้วยแผ่นปิดผนึกผ่านการฆ่าเชื้อและบ่มออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง แบบไม่ใช้ออกซิเจนจุลินทรีย์ที่ถูกปิดด้วยแผ่นปิดผนึกผ่านการฆ่าเชื้อและบ่มเป็นเวลา 72 ชั่วโมงในห้องไม่ใช้ออกซิเจนใน 5-10% H2, CO2 10%, 80-85% บรรยากาศ N2 ที่ 36 ° C หลังจากนั้น Resazurin (30 ไมโครลิตร) ในการแก้ปัญหาน้ำ (0.01%) ถูกบันทึกอยู่ใน microplates ที่มีชีวิตเพื่อแสดงให้เห็นความมุ่งมั่นของจุลินทรีย์สำหรับ MIC chlorhexidine dihydrochloride (CHD) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวกและความเข้มข้นตั้งแต่ 0.115-5.9 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 การควบคุมของการเป็นหมันของ TSB และซุปมิโสะ Schaedler วัฒนธรรมการควบคุม (เชื้อ), โรคหลอดเลือดหัวใจ, EO ที่เศษส่วน EO และควบคุม DMSO ได้ดำเนินการ ค่า MIC ได้รับการพิจารณาว่าเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ EO ความสามารถในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 กิจกรรมการยับยั้ง

ความเข้มข้นยับยั้งน้อยที่สุด ( MIC ) ของ EO และเศษส่วน ตัดสินใจใช้วิธีเจือจางในน้ำซุปไมโครดี ( 96 microplates คาร์วัลโญ่ et al . , 2011 และ petrolini et al . , 2013 ) ตัวอย่างที่ถูกละลายในไดเมทิลซัลฟอกไซด์ ( DMSO ) ความเข้มข้นของ 8000 μกรัมมิลลิลิตร− 1ตามด้วยการเจือจางในน้ำซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ) สำหรับแอโรบิค และ schaedler broth ( difco ) เสริมจากที่ ( 5.0 μ− 1 กรัมต่อมิลลิลิตร ) และ menadione ( 10.0 μกรัมต่อมิลลิลิตร− 1 ) ถังจุลินทรีย์ ตัวอย่างการทดสอบระหว่างความเข้มข้น 400 มล. และμ G − 1 เนื้อหา DMSO สุดท้าย 4 % ( v / v ) และโซลูชั่นนี้ใช้เป็นชุดควบคุมลบ เชื้อมีการปรับสำหรับแต่ละสิ่งมีชีวิตผลผลิตเซลล์ความเข้มข้น 5 × 105 โคโลนีสร้างหน่วยต่อมิลลิลิตร ( CFU ml − 1 ) ไปตามทางคลินิกและห้องปฏิบัติการสถาบันมาตรฐาน ( ต่าง 2012a ( , ) แนวทางต่าง 2012b , ) 96 ดี microplates กับจุลินทรีย์แอโรบิกถูกปิดด้วยแผ่นซีลเป็นหมัน และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศา aerobically เป็นเวลา 24 ชั่วโมงจุลินทรีย์ในถังปิดด้วยแผ่นซีลเป็นหมัน และบ่มนาน 72 ชั่วโมงในห้องแอโรบิค ใน 5 - 10 % H2 , คาร์บอนไดออกไซด์ร้อยละ 10 , 80 - 85 % N2 บรรยากาศที่ 36 องศา หลังจากนั้น รีซาซูริน ( 30 μ L ) ในสารละลาย ( 0.01% ) ถูกเพิ่มลงใน microplates , เพื่อแสดงศักยภาพในการต่อไมค์ คลอเฮกซิดีน : ( CHD ) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวกและความเข้มข้นอยู่ระหว่างการเติบโตμกรัมต่อมิลลิลิตร 0.115 − 1 ควบคุมการเป็นหมันของ TSB schaedler broths และ วัฒนธรรม ควบคุม ( 3 ) , โรคหลอดเลือดหัวใจ , แถบ , แถบเศษส่วนและ DMSO ควบคุมการปฏิบัติ ค่า MIC พบว่าเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ EO ซึ่งสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์