Skeletal muscle samples obtained be

Skeletal muscle samples obtained before and after each
exercise protocol were homogenized in an extraction buffer
containing (in millimoles per liter): Tris 100 (pH 7.4), sodium
pyrophosphate 100, sodium fluoride 100, EDTA 10, sodium
vanadate 10, phenylmethylsulfonyl fluoride 2, 0.1 mg/mL
aprotinin, and 1% Triton-X100 at 4°C with a Polytron PTA 20S
generator (model PT 10/35; Brinkmann Instruments, Westbury,
NY, USA) operated at maximum speed for 30 seconds.
The extracts were centrifuged at 15 000 rpm (9000g) and 4°C in
a Beckman 70.1-Ti rotor (Palo Alto, CA) for 40 minutes to
remove insoluble material, and the supernatants of these
samples were used for protein quantification using the Bradford method. Proteins were denatured by boiling in a
Laemmli buffer containing 100 mmol/L dithiothreitol, run on
sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,
and transferred to nitrocellulose membranes that were
blocked, probed, and developed. The antibody used for the
immunoblotting was anti–IRS-1 (ab64954) from Abcam (Cambridge,
UK). Immunoreactive bands were detected using the
enhanced chemiluminescence method (RPN 2108; Amersham
Biosciences, Uppsala, Sweden) and quantified by optical
densitometry (Scion Image software, ScionCorp, Frederick,
MD) of the developed autoradiographs.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างกล้ามเนื้อลายที่ได้รับก่อน และ หลังแต่ละโพรโทคอลการออกกำลังกายถูก homogenized ในบัฟเฟอร์การดูดประกอบด้วย (ใน millimoles ต่อลิตร): ทริสเรทติ้ง 100 (pH 7.4), โซเดียมpyrophosphate 100 โซเดียมฟลูออไรด์ 100, EDTA 10 โซเดียมvanadate 10, phenylmethylsulfonyl ฟลูออไรด์ 2, 0.1 mg/mLaprotinin และ 1% ที่ 4 ° C การ X100 ไทรทันกับ PTA Polytron 20Sเครื่องกำเนิดไฟฟ้า (รุ่น PT 10/35 เครื่องมือ Brinkmann เดอะโซโหนิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) ทำงานที่ความเร็วสูงสุด 30 วินาทีสารสกัดได้จาก ที่ 15 000 rpm (9000 กรัม) และ 4 ° C ในใบพัด 70.1 Ti Beckman (Palo Alto, CA) 40 นาทีเอาวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ และ supernatants เหล่านี้ตัวอย่างที่ใช้สำหรับนับโปรตีนโดยวิธีแบรดฟอร์ด โปรตีนถูกเอทิลแอลกอฮอล์ โดยต้มในการLaemmli บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 100 mmol/L dithiothreitol รันบนโซเดียม dodecyl ซัลเฟตตรวจสอบวิเคราะห์อิและโอนย้ายไปไนโตรเซลลูโลสเยื่อที่บล็อก พิสูจน์ และการพัฒนา แอนติบอดีที่ใช้สำหรับการimmunoblotting ถูกต่อต้าน – IRS-1 (ab64954) จาก Abcam (เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) วง immunoreactive ตรวจพบโดยใช้การวิธีเพิ่ม chemiluminescence (RPN 2108 Amershamออก อุปซาลา สวีเดน) และวัดโดยชมีความหนาแน่น (ไซออนซอฟต์แวร์ภาพ ScionCorp เฟรเดริกMD) ของ autoradiographs พัฒนา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างกล้ามเนื้อโครงร่างที่ได้รับก่อนและหลังจากที่แต่ละ
โปรโตคอลการออกกำลังกายที่ถูกปั่นในบัฟเฟอร์สกัด
ที่มี (ใน millimoles ต่อลิตร): ทริส 100 (pH 7.4) โซเดียม
ไพโรฟอสเฟต 100 โซเดียมฟลูออไร 100 EDTA 10 โซเดียม
วานาเดต 10 phenylmethylsulfonyl ลูออไรด์ที่ 2 0.1 mg / ml
Aprotinin และ 1% Triton-X100 ที่ 4 องศาเซลเซียสกับ Polytron PTA 20S
เครื่องกำเนิดไฟฟ้า (รุ่น PT 10/35; Brinkmann เครื่องดนตรี, Westbury,
NY, USA) ดำเนินการที่ความเร็วสูงสุด 30 วินาที.
สารสกัดถูกหมุนเหวี่ยง ที่ 15 000 รอบต่อนาที (9000g) และ 4 ° C ใน
Beckman 70.1-Ti โรเตอร์ (พาโลอัลโต) เป็นเวลา 40 นาทีในการ
ลบเนื้อหาที่ไม่ละลายน้ำและ supernatants เหล่านี้
กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการวัดปริมาณโปรตีนโดยใช้วิธี Bradford โปรตีนถูกเอทิลแอลกอฮอล์โดยการต้มใน
บัฟเฟอร์ Laemmli มี 100 มิลลิโมล / ลิตร dithiothreitol, ทำงานบน
โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide gel electrophoresis,
และโอนไปยังเยื่อไนโตรเซลลูโลสที่ถูก
ปิดกั้นการตรวจสอบและการพัฒนา แอนติบอดีที่ใช้สำหรับ
immunoblotting ต่อต้านกรมสรรพากร-1 (ab64954) จาก Abcam (เคมบริดจ์,
สหราชอาณาจักร) วงดนตรีที่ Immunoreactive ถูกตรวจพบโดยใช้
การปรับปรุงวิธีการ chemiluminescence (RPN 2108; Amersham
ชีววิทยาศาสตร์, Uppsala, สวีเดน) และปริมาณแสงโดย
densitometry (ซอฟต์แวร์ของไซออน ScionCorp เฟรเดอริ,
MD) ของ autoradiographs พัฒนา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างกล้ามเนื้อลายได้ก่อนและหลังแต่ละขั้นตอนการออกกำลังกายมีบดในการสกัดสารบัฟเฟอร์ประกอบด้วย ( millimoles ต่อลิตร ) : บริษัท 100 ( pH 7.4 ) , โซเดียมพบ 100 , โซเดียมฟลูออไรด์โซเดียม EDTA 10 , 100 ,การทำงาน 10 , phenylmethylsulfonyl ฟลูออไรด์ 2 0.1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโพรทินิน และ 1% triton-x100 4 ° C กับ PTA polytron 20 กว่า ๆเครื่องกำเนิดไฟฟ้า ( รุ่น PT 10 / 35 ; Westbury brinkmann , เครื่องมือNY , USA ) ทำงานที่ความเร็วสูงสุด 30 วินาทีสารสกัดที่เป็นระดับที่ 15 000 รอบต่อนาที ( 9000g ) และ 4 ° C ในมีท่าน 70.1-ti ใบพัด ( Palo Alto , CA ) สำหรับ 40 นาทีเอาวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ และ supernatants เหล่านี้กลุ่มตัวอย่างที่ใช้สำหรับปริมาณโปรตีนโดยใช้วิธีแบรดฟอร์ด โปรตีนถูกใช้โดยการต้มในlaemmli บัฟเฟอร์ที่มี 100 mmol / L บัตรแข็ง วิ่งบนโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กและโอนไปยังไนโตร membranes ที่บล็อก , ตรวจสอบและพัฒนา แอนติบอดีที่ใช้สำหรับวิธีคือ Anti – irs-1 ( ab64954 ) จาก ABCAM ( เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร ) วง immunoreactive ถูกตรวจพบโดยใช้วิธีการปรับปรุงนโยบายแรงงาน ( RPN 1302 ; ชามชีววิทยาศาสตร์ อุปซอลา , สวีเดน ) และปริมาณของแสงdensitometry ( ไซออนภาพซอฟต์แวร์ scioncorp เฟรดดริกMD ) ของการพัฒนา autoradiographs .